陳雅慧 朱 梅 李寶莉 朱建文 張正祥 (延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院生理教研室，陜西 延安 76000)

酸柏梔油軟膠囊具有安神、增強(qiáng)記憶等作用〔1，2〕，可用于治療神經(jīng)衰弱、焦慮癥、抑郁癥、記憶力低下、老年性癡呆、更年期綜合征、心腦血管疾病等。該膠囊的主要成分為不飽和脂肪酸，且油酸和亞油酸占82%〔3，4〕。已有研究表明不飽和脂肪酸γ-亞麻酸具有防血脂沉降和抑制血小板集聚的作用，可做抗血栓劑。因此，本實(shí)驗(yàn)通過預(yù)防性給予大鼠酸柏梔油軟膠囊，觀察該藥物對寒凝血瘀證大鼠血液流變學(xué)的影響，探討該藥活血化瘀的物質(zhì)基礎(chǔ)及部分機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用SD大鼠，體重(268±20)g，雌雄各半，動(dòng)物合格證:SCXK(軍)2002-005，由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.1.2 藥品與試劑酸柏梔油軟膠囊:西安東盛醫(yī)藥研究所生產(chǎn)，批號:20080411，0.5 g/粒;復(fù)方丹參片:寶商集團(tuán)陜西辰濟(jì)藥業(yè)有限公司，批號:Z61020995，0.3 g/片。器材:MDK3200K型血流變學(xué)儀，重慶麥迪克公司產(chǎn)品;LBY-NJ型血小板聚集儀，為北京普利生儀器有限公司產(chǎn)品;XSN-12型體外血栓形成儀，為北京醫(yī)用離心機(jī)廠。

1.2 方法 取SD大鼠60只，分為6組，每組10只，雌雄各半。①空白對照組:灌胃注射生理鹽水1.0 g/kg;②血瘀癥模型組予生理鹽水1.0 g/kg灌胃;③丹參陽性對照組予1.0 g/kg灌胃;④大劑量組予酸柏梔油軟膠囊4.5 g/kg灌胃;⑤中劑量組予2.70 g/kg灌胃;⑥小劑量組予1.35 g/kg灌胃。每天給藥1次，連續(xù)15 d。第16天，除空白對照組以外，其他各組于皮下注射鹽酸腎上腺素(Adr)8 μg/kg共2次，兩次間隔4 h，在兩次注射之間每2 h將大鼠浸入冰水處置5 min，處置后停食，共2次，復(fù)制血瘀模型。第17天各組均用20%烏拉坦腹腔注射麻醉，劑量5 ml/kg。頸動(dòng)脈插管取血約5 ml。其中1.5 ml血迅速注入肝素抗凝管中，搖勻后置入35℃的恒溫水浴鍋中備用，另取1.2 ml血迅速注入枸櫞酸鈉抗凝管，搖勻備用。另取大鼠60只，分組給藥同前，建立血瘀模型后，從各組大鼠頸總動(dòng)脈取血5 ml，將2.7 ml置于抗凝的硅化管中(用3.8%枸櫞酸鈉抗凝)，抗凝劑與血漿的比例為1∶9，離心制備富血小板血漿(PRP，500 r/min，5 min)和貧血小板血漿(PPP，3000 r/min，10 min)，用PPP調(diào)PRP中血小板數(shù)至20萬～22萬/mm3。以ADP 0.5 μmol為誘導(dǎo)劑，用LBY-NJ型血小板聚集儀，測定血小板最大聚集率。另將1.8 ml血加入硅化塑料環(huán)內(nèi)，裝到血栓儀圓盤上，啟動(dòng)開關(guān)，37℃條件下，17 r/min，轉(zhuǎn)動(dòng)15 min，停機(jī)，取下塑料環(huán)，用眼科鑷輕輕提取血栓頭，將血液及形成的血栓一起倒在濾紙上，將其移到干燥濾紙上，測定血栓長度，稱濕重，然后將血栓置于恒溫烤箱中，64℃，30 min，烘干，稱干重。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SSPS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料均用±s表示，多組間兩兩比較用單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 酸柏梔油軟膠囊對血瘀模型大鼠全血黏度的影響 血瘀證模型組的全血高、中、低切黏度均明顯升高，其全血還原黏度高、中、低切值亦明顯高于空白對照組(P＜0.05，P＜0.01)，說明血瘀證模型造模成功。陽性對照組全血高、中、低切黏度低于血瘀證模型組，說明復(fù)方丹參對血瘀證升高有抑制作用;酸柏梔油軟膠囊大、中、小劑量組全血高、中、低切黏度及全血還原黏度低于血瘀證模型組，說明其對血瘀證大鼠升高的全血黏度具有顯著的抑制作用;與模型組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。見表1。

血瘀證模型組的血漿黏度、血液屈服應(yīng)力和卡松黏度均高于空白對照組(P＜0.05，P＜0.01)。陽性對照組血漿黏度、血液屈服應(yīng)力和卡松黏度均低于血瘀證模型組，說明復(fù)方丹參對血瘀證的升高有抑制作用。酸柏梔油軟膠囊大、中、小劑量各指標(biāo)也低于血瘀證模型組，酸柏梔油軟膠囊大、中、小劑量對血瘀證大鼠升高的血漿黏度、血液屈服應(yīng)力和卡松黏度均具有顯著的降低作用(P＜0.05，P＜0.01)。見表2。

2.2 酸柏梔油軟膠囊對血瘀模型大鼠紅細(xì)胞聚集和纖維蛋白原水平的影響 血瘀模型組未引起紅細(xì)胞聚集，但酸柏梔油軟膠囊大、中、小劑量組對血瘀模型組纖維蛋白原有明顯的降低作用(P＜0.05)。見表3。

2.3 酸柏梔油軟膠囊對血小板功能和血栓形成的影響 血瘀模型組血小板最大聚集率為46.51%，酸柏梔油軟膠囊各劑量組對ADP誘導(dǎo)的血小板聚集有明顯抑制作用，與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05);酸柏梔油軟膠囊各組對體外血栓長度、血栓濕重和血栓干重也有抑制作用，與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)。說明酸柏梔油軟膠囊對血栓形成有抑制作用。見表4。

表1 酸柏梔油軟膠囊對血瘀模型大鼠全血流變學(xué)參數(shù)的影響( ± s，n=10)

表1 酸柏梔油軟膠囊對血瘀模型大鼠全血流變學(xué)參數(shù)的影響( ± s，n=10)

與模型組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;下表同

組別 全血黏度(mPa·s)高切黏度(150S－1) 中切黏度(60S－1) 低切黏度(30S－1)全血還原黏度(mPa·s)高切黏度(150S－1) 中切黏度(60S－1) 低切黏度(30S－1)空白對照組 4.68±0.69 8.56±2.21 9.99±2.22 2.49±0.23 10.69±3.13 13.10±1.15模型組 6.43±0.962) 11.34±3.11 15.23±3.26 3.12±0.15 13.16±2.23 19.36±3.45陽性對照組 4.75±0.92 9.58±3.36 10.03±0.72 2.16±0.26 10.45±1.56 10.68±1.35大劑量組 4.59±0.681) 8.71±2.241) 10.45±0.712) 2.87±0.421) 10.78±1.031) 11.46±4.312)中劑量組 4.78±0.121) 7.79±3.141) 10.36±0.451) 1.97±0.561) 10.12±1.261) 11.49±1.872)小劑量組 5.12±0.461) 8.75±1.511) 9.97±1.141) 2.37±0.171) 11.14±2.451) 12.18±2.432)

表2 酸柏梔油軟膠囊對血瘀模型大鼠血黏度的影響( ± s，n=10)

表2 酸柏梔油軟膠囊對血瘀模型大鼠血黏度的影響( ± s，n=10)

組別 血漿黏度(mPa·s)血液屈服應(yīng)力(mPa)卡松黏度(mPa·s)1.63±0.28 13.45±1.43 5.89±0.41模型組 1.93±0.70 18.36±1.57 7.83±0.60陽性組 1.45±0.28 11.25±1.34 5.45±0.35大劑量組 1.28±0.242) 11.56±3.192) 4.68±0.432)中劑量組 1.56±0.472) 12.38±1.342) 5.18±0.692)小劑量組 1.37±0.821) 12.50±2.461) 5.32±0.921)正常組

表3 酸柏梔油軟膠囊對血瘀模型大鼠紅細(xì)胞聚集和纖維蛋白原的影響( ± s，n=10)

表3 酸柏梔油軟膠囊對血瘀模型大鼠紅細(xì)胞聚集和纖維蛋白原的影響( ± s，n=10)

組別 血沉(mm/h)紅細(xì)胞壓積(%)纖維蛋白原(g/kg)2.00±0.93 60.25±4.62 1.63±0.28模型組 3.36±1.45 62.52±1.67 2.83±0.70陽性對照組 4.13±1.73 61.25±1.91 1.29±0.281)大劑量組 6.13±2.10 57.75±3.81 1.28±0.242)中劑量組 5.63±1.96 58.06±0.34 1.30±0.322)小劑量組 4.50±2.73 58.50±2.56 1.32±0.821)對照組

表4 酸柏梔油軟膠囊對血瘀模型大鼠血小板聚集和體外血栓形成的影響( ± s，n=10)

表4 酸柏梔油軟膠囊對血瘀模型大鼠血小板聚集和體外血栓形成的影響( ± s，n=10)

組別 血小板最大聚集率(%) 血栓長度(mm) 血栓濕重(mg) 血栓干重(mg)空白對照組 32.81±3.63 19.25±1.54 252.21±120.55 97.14±22.48模型組 46.54±2.34 22.52±2.56 320.34±110.14 112.83±32.70陽性對照組 28.16±1.69 20.14±2.192) 221.26±200.131) 86.29±24.281)大劑量組 31.34±2.181) 17.75±2.431) 234.56±123.461) 90.17±33.191)中劑量組 29.35±3.151) 18.06±2.171) 245.64±106.231) 92.30±32.321)小劑量組 28.66±2.421) 17.50±1.891) 236.18±140.481) 91.32±30.521)

3 討論

本研究所用動(dòng)物模型是依據(jù)中醫(yī)關(guān)于血瘀癥的“暴怒”、“寒邪”病因、病理機(jī)制〔5〕設(shè)計(jì)的大鼠急性血瘀模型。為了迅速復(fù)制寒邪血瘀模型，給大鼠皮下注射大劑量腎上腺素模擬暴怒時(shí)機(jī)體狀態(tài)，同時(shí)用冰水浸泡以模擬寒邪侵襲，二者綜合作用可復(fù)制出寒邪血瘀模型，該模型血液流變性具有黏、濃、凝、聚的特點(diǎn)。全血黏度是代表血液流動(dòng)阻力的主要參數(shù)，當(dāng)血液流動(dòng)阻力增高時(shí)，全血黏度值升高。全血黏度受紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞聚集性、紅細(xì)胞變形性、血漿成分、血管舒縮狀態(tài)等因素的綜合影響，而其中以紅細(xì)胞壓積影響最大，紅細(xì)胞壓積越高，全血黏度越大〔6〕。本研究結(jié)果顯示，血瘀模型大鼠除血沉、紅細(xì)胞壓積外，其余各項(xiàng)血液流變學(xué)指標(biāo)均較正常組明顯升高，提示急性血瘀模型造模成功。酸柏梔油軟膠囊大小劑量組的各項(xiàng)血液流變學(xué)指標(biāo)與正常組比較無明顯意義，但酸柏梔油軟膠囊大劑量可顯著降低血瘀大鼠的全血黏度、還原黏度及血漿黏度等血液流變學(xué)指標(biāo)，小劑量組的作用沒有大劑量組明顯。

已有研究發(fā)現(xiàn)全血黏度、血漿黏度、血沉及血小板聚集與纖維蛋白原水平呈顯著正相關(guān)〔7〕，提示血液黏度增高與血漿纖維蛋白原含量升高有密切的關(guān)系。除紅細(xì)胞使血液黏度增高外，血漿纖維蛋白原因其分子大、濃度高，又具有聚合作用，因此其含量增多是增加血液黏度的又一重要因素。本研究發(fā)現(xiàn)酸柏梔油軟膠囊大劑量組可顯著降低血瘀大鼠的纖維蛋白原含量，抑制血栓形成，提示其對血瘀大鼠的黏、凝、聚有明顯的對抗作用。因此可以得出結(jié)論，酸柏梔油軟膠囊具有去纖、降黏作用，從而起到活血化瘀作用。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)酸柏梔油軟膠囊中油酸、亞油酸含量最多〔3〕，結(jié)合本次藥理實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果，考慮該藥活血化瘀作用可能與該膠囊中的油酸、亞油酸有密切關(guān)系。

1 李寶莉，陳雅慧，胡 銳，等.復(fù)方酸棗仁油梔子油對小鼠的鎮(zhèn)靜、催眠和抗驚厥作用〔J〕.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008;28(9):1636-9.

2 李寶莉，陳雅慧，張正祥，等.復(fù)方酸棗仁油梔子油對小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響〔J〕.西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)·醫(yī)學(xué)版，2010;31(6):673-6.

3 張正祥，李寶莉，陳雅慧，等.復(fù)方酸棗仁油梔子油軟膠囊脂肪酸成份測定〔J〕.陜西醫(yī)學(xué)，2009;38(7):792-3.

4 趙啟鐸.酸棗仁油中不飽和脂肪酸的藥理實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.天津中醫(yī)藥，2005;22(4):331-3.

5 徐淑云.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)〔M〕.第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1994:564-6.

6 陳 奇.中藥藥理研究方法學(xué)〔M〕.北京:人民衛(wèi)生出版社，1996:992-1011.

7 《中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)網(wǎng)》http://www.labweb.cn/articleview/2009-11-16/article_view_11872.htm