侯 波 裴銳鋒 (吉林省人民醫(yī)院急診外科，吉林 長春 3002)

白細(xì)胞介素(IL)－8是趨化因子CXC家族一員，是巨噬細(xì)胞和上皮細(xì)胞等分泌的細(xì)胞因子。大量正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞均表達(dá)IL－8，主要作用是啟動炎癥反應(yīng)，且在腫瘤生長、血管生成、侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用〔1，2〕。IL－8 基因啟動子區(qū)－251位點存在一個功能性單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點，即 IL－8－251A/T，攜帶A等位基因的個體IL－8水平明顯增加〔3〕。目前，多項流行病學(xué)研究已經(jīng)證實該多態(tài)性位點與多種腫瘤，包括中國臺灣地區(qū)肝癌、胃癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌和肺癌等發(fā)病相關(guān)〔4，5〕。本研究調(diào)查 IL－8－251A/T 多態(tài)性與中國東北地區(qū)肝癌相關(guān)性，旨在為揭示肝癌發(fā)病機制提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 我院普外科肝癌患者229例，男157例，女72例，平均(61.5±13.0)歲，均經(jīng)組織病理學(xué)證實。其中，臨床Ⅰ～Ⅱ期136例，Ⅲ～Ⅳ期93例;高分化128例，低分化101例;有轉(zhuǎn)移135例，無轉(zhuǎn)移94例;HBsAg陽性117例，HBsAg陰性112例。243例健康對照人群來自我院體檢中心，男170例，女73例，平均(60.6±13.3)歲，體檢各項指標(biāo)均正常，無腫瘤家族史及肝炎、肝硬化等肝臟疾病。研究對象均為無血緣關(guān)系的漢族個體。

1.2 DNA提取及引物合成 取外周靜脈抗凝血2 ml，－20℃低溫保存，運用全血基因組DNA提取試劑盒提取DNA(北京百泰克公司)。參照文獻(xiàn)〔6〕設(shè)計引物，上游引物:5′－ATCTTGTTCTAACACCTGCCACTCT－3′，下游引物:5′－ TAAAATACTGAAGCTCCACAATTTGG－3′。引物由上海生工技術(shù)有限公司合成。

1.3 IL－8－251A/T多態(tài)性分型 采用聚合酶鏈反應(yīng)－限制性片段長度多態(tài)性(PCR－RFLP)對 IL－8－251A/T多態(tài)性進(jìn)行分型。PCR 反應(yīng)體系為 25 μl，其中包括基因組 DNA 1.5 μl，上、下游引物各 0.25 μl，10 × 反應(yīng)緩沖液 3.0 μl，dNTPs 2.5 μl，Mg2+1.5 μl，TaqDNA 聚合酶 1.0 U，無菌去離子水補足 25 μl。PCR擴增條件:94℃預(yù)變性4 min;94℃變性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸30 s，35個循環(huán)。PCR擴增產(chǎn)物采用限制性內(nèi)切酶MfeⅠ酶切消化。8%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離酶切產(chǎn)物，硝酸銀染色，分析判讀結(jié)果:TT基因型有121 bp一條帶，AT基因型有121、82和39 bp三條帶，AA基因型有82和39 bp兩條帶，其中39 bp跑至膠外。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件，直接計數(shù)法計算基因型和等位基因在肝癌組和對照組中的分布，各組基因型和等位基因頻率比較采用χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 兩組IL－8－251A/T多態(tài)性基因型頻率和等位基因分布比較 兩組IL－8－251A/T多態(tài)性TT、AT和AA基因型頻率及等位基因分布差異不顯著(P＞0.05)(表1)。

表1 兩組IL-8-251A/T多態(tài)性比較〔n(%)〕

2.2 IL－8－251A/T多態(tài)性與肝癌臨床特征的相關(guān)性 根據(jù)臨床分期、分化程度、轉(zhuǎn)移和HBsAg狀態(tài)進(jìn)行分層分析，發(fā)現(xiàn)HBsAg陰性肝癌患者中TT基因型分布明顯高于HBsAg陽性患者(P=0.002);未發(fā)現(xiàn) IL－8－251A/T多態(tài)性與臨床分期、分化程度和轉(zhuǎn)移狀態(tài)具有明顯相關(guān)性(P＞0.05)(表2)。

表2 IL-8-251A/T多態(tài)性與肝癌臨床特征的相關(guān)性〔n(%)〕

3 討論

肝癌的危險因素包括乙肝病毒感染、飲酒、長期接觸致癌物等。然而，并非接觸危險因素的個體全部患肝癌，存在個體差異，肝癌易感性研究有助于闡明個體差異的分子基礎(chǔ)。

Gao 等〔5〕運用 meta 分析未發(fā)現(xiàn) IL－8－251A/T 多態(tài)性明顯增加或降低腫瘤發(fā)病風(fēng)險。Chien等〔4〕調(diào)查了131例中國臺灣地區(qū)肝癌患者和340例正常對照組IL－8－251A/T多態(tài)性，未發(fā)現(xiàn)該多態(tài)性與肝癌發(fā)病相關(guān)。本研究亦未發(fā)現(xiàn)IL－8－251A/T多態(tài)性與中國東北地區(qū)肝癌發(fā)病呈明顯相關(guān)，IL－8－251TT基因型降低了中國東北地區(qū)HBsAg陽性患者肝癌發(fā)病風(fēng)險。以往研究顯示乙肝病毒感染患者血清中IL－8水平明顯高于正常對照人群，乙肝病毒相關(guān)的肝癌細(xì)胞株中亦檢測到高水平IL－8〔7〕。提示IL－8－251TT基因型可能通過血清中IL－8表達(dá)量的不同參與肝癌發(fā)生發(fā)展。

綜上，IL－8－251A/T多態(tài)性可作為乙肝病毒感染患者肝癌發(fā)病率的一個分子遺傳學(xué)標(biāo)記物。多中心、大樣本量的深入研究將有助于為肝癌風(fēng)險預(yù)測和個體化用藥提供一條新途徑。

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5 Gao LB，Pan XM，Jia J，et al.IL－8－251A/T polymorphism is associated with decreased cancer risk among population－based studies:evidence from a meta－analysis〔J〕.Eur J Cancer，2010;46(8):1333－43.

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