秦海春 劉 俊 杜廷義 范 紅 (云南省第一人民醫(yī)院消化科，云南 昆明 65003)

大腸癌是一種常見惡性腫瘤，在我國惡性腫瘤中居第五位，其發(fā)病率和致死率均較高，嚴重危害人類的健康。癌胚抗原(CEA)作為腫瘤標志物已廣泛用于大腸癌的診斷〔1〕，然而其對大腸癌治療效果的判斷目前報道較少。本文檢測大腸癌患者手術(shù)前后血CEA蛋白、CEA mRNA水平，探討其在大腸癌治療效果判斷中的價值。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選擇2009年1月至2011年6月在我院行手術(shù)治療的大腸癌患者48例，均經(jīng)X線、腸鏡及病理檢查確診。年齡33～75〔平均(47.1±13.8)〕歲，其中男29例，女19例;一年內(nèi)復發(fā)9例。同時選擇來我院進行體檢的健康體檢者50例作為正常對照組，年齡32～76〔平均(48.5±14.3)〕歲，其中男31例，女19例，均無肝、心、腎等臟器疾病。

1.2 方法

1.2.1 血漿CEA蛋白水平檢測 分別于治療前后采集空腹靜脈血1.5 ml，加入乙二胺四乙酸二鈉抗凝管，4℃ 3000 r/min離心5 min，分離血漿。采用電化學發(fā)光免疫法檢測CEA，應用Cobase601全自動電化學發(fā)光免疫分析儀及其配套試劑，嚴格按操作規(guī)程進行檢測，CEA＞10 ng/ml為陽性。

1.2.2 外周血CEA mRNA水平檢測 分別于手術(shù)治療前后采集空腹靜脈血5 ml，加入枸櫞酸鈉抗凝管，于1 h內(nèi)利用TBD公司淋巴細胞分離液進行細胞分離，采用Invitrogen公司Trizol試劑提取總RNA。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應法檢測CEA mRNA，試劑盒購自大連寶生物技術(shù)有限公司。PCR反應在美國MJResearch公司產(chǎn)PTC－200型PCR儀上進行，反應條件:94℃ 2 min;92℃ 10 s、50℃ 25 s、72℃ 2 s，35 個循環(huán);最后72℃5 min至4℃。引物序列參照相關(guān)文獻〔2〕，序列如下:上游引物為 5′－AGTGAGTGCAAACCGCAGTGAC－3′，下 游 引 物 為 5′－TTGAGGTTCGCTCCCGAAAG－3′。擴增產(chǎn)物經(jīng)2.5%瓊脂糖凝膠電泳，出現(xiàn)108 bp條帶者判定為陽性。

1.3 統(tǒng)計學方法 應用SPSS11.5統(tǒng)計軟件，數(shù)據(jù)資料以±s表示，計數(shù)資料采用χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 對照組與大腸癌組治療前后CEA和CEA mRNA比較

大腸癌治療前、后CEA水平、CEA陽性率和CEA mRNA陽性率均明顯高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。大腸癌治療后CEA水平、CEA陽性率和CEA mRNA陽性率均明顯下降，與治療前比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 對照組與大腸癌組治療前后CEA和CEA mRNA比較

2.2 治療后CEA和CEA mRNA陽性與大腸癌復發(fā)間的關(guān)系

治療后CEA mRNA陽性組復發(fā)率均明顯高于治療后CEA mRNA陰性組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。而治療后CEA蛋白表達與復發(fā)無明顯相關(guān)性(P＞0.05)。見表2。

表2 治療后CEA和CEA mRNA陽性與大腸癌復發(fā)的關(guān)系〔n(%)〕

3 討論

大腸癌包括結(jié)腸癌和直腸癌，是大腸黏膜上皮和腺體發(fā)生的惡性腫瘤，是消化道常見的惡性腫瘤之一。盡管目前診斷及治療手段有很大進展，但5年生存率并無多大改觀，仍在50%左右〔3〕。大腸癌患者早期常無明顯癥狀，相當比例的大腸癌患者確診時已到晚期，多數(shù)患者最終死于局部復發(fā)或轉(zhuǎn)移(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移)，嚴重影響了治療效果和預后。大腸癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的機制尚未完全闡明，主要認為是與腺瘤向腺癌的轉(zhuǎn)化及多種癌基因和抑癌基因聯(lián)合失調(diào)有關(guān)，是多因素、多步驟逐漸演變而成的復雜過程〔4〕。隨著近年來腫瘤分子生物學研究不斷發(fā)展，尋找與大腸癌的發(fā)生、發(fā)展及預后相關(guān)的新的分子標志物，對于早期診斷、預后評估及治療方案制定具有一定的臨床意義〔1〕。

CEA是一種具有人類胚胎抗原決定簇的酸性糖蛋白，由幼稚細胞以及胃腸道腫瘤細胞合成，在正常胎兒和成人消化道均少量產(chǎn)生，而失去極性的癌細胞分泌的CEA則進入血液和淋巴液，常應用于消化系統(tǒng)腫瘤的輔助診斷和動態(tài)監(jiān)測判斷療效及轉(zhuǎn)歸〔5〕。本研究結(jié)果顯示，大腸癌組血漿CEA蛋白水平和陽性率明顯高于正常對照組，并且治療后CEA蛋白水平和陽性率明顯下降，可以反映大腸癌的發(fā)生及轉(zhuǎn)歸情況，但其缺點是敏感性太低;并且，血漿中CEA的表達與復發(fā)無相關(guān)性，不利于判斷大腸癌患者手術(shù)后情況。近年來，微轉(zhuǎn)移檢測作為一項獨立的高危因素用于預測腫瘤患者復發(fā)轉(zhuǎn)移的風險及預后，而外周血對存在于循環(huán)系統(tǒng)的微轉(zhuǎn)移都可以檢測，提示風險的意義更大〔6〕。CEA mRNA是細胞惡變時有關(guān)腫瘤基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，只存在于某些腫瘤細胞內(nèi)，細胞之外不能存在游離的CEA mRNA，因此，在外周血中檢測到CEA mRNA則表示外周血中已存在能表達CEA mRNA的腫瘤細胞或轉(zhuǎn)移腫瘤細胞〔1〕。王金芝等〔7〕對50例大腸癌患者外周血中 CEA mRNA水平進行檢測，發(fā)現(xiàn)其對大腸癌診斷的敏感性為62.0%，并且其陽性表達與患者的Dukes分期及有無遠處轉(zhuǎn)移有關(guān)，可以作為大腸癌病情發(fā)展和判斷預后的指標。本研究結(jié)果顯示，大腸癌組血漿CEA mRNA陽性率明顯高于正常對照組，而治療后CEA mRNA陽性率明顯下降;同時，治療后CEA mRNA陽性表達者其1年內(nèi)的復發(fā)率明顯高于CEA mRNA陰性者，從而有望成為一種判斷手術(shù)效果、防止患者復發(fā)的指標。總之，血CEA蛋白、CEA mRNA在大腸癌患者中表達明顯升高，并且治療后明顯下降，其中治療后CEA mRNA的陽性表達與大腸癌復發(fā)明顯相關(guān)，對預測大腸癌的復發(fā)有重要意義。

1 何仰東.血清腫瘤標志物TSGF、CEA和CA199聯(lián)檢對大腸癌的診斷價值探討〔J〕. 中國醫(yī)藥指南，2010;8(20):24－6.

2 馬育華.CEA蛋白、CEA mRNA的檢測在大腸癌、胃癌早期診斷中的應用價值〔J〕.菏澤醫(yī)學?？茖W校學報，2010;22(2):8－10.

3 郭小剛，王建國，張 彬.血清CEA、TPA和CRP檢測在大腸癌手術(shù)前后的變化及意義〔J〕.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學，2010;18(9):1783－4.

4 楊光勇，呂永庭，羅 浩，等.血清CEA水平在大腸癌術(shù)后復發(fā)早期診斷中的意義探討〔J〕.醫(yī)學理論與實踐，2011;24(11):1251－2.

5 楊小文，孫楊安.聯(lián)合檢測血清CEA、VEGF、CA19－9在大腸癌診治中的價值〔J〕. 實用臨床醫(yī)學，2009;10(12):9－10.

6 申東蘭，胡金森，鄭海霞，等.外周血癌胚抗原mRNA在大腸癌組織中的表達及其臨床意義〔J〕.腫瘤防治雜志，2005;12(22):1732－4.

7 王金芝，燕善軍.Survivin mRNA、CEA mRNA在大腸癌患者外周血中表達及意義〔J〕. 腫瘤學雜志，2010;16(2):93－6.