李果明，沈毅華，劉 文

(1廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，廣東湛江 524023;2廣東醫(yī)學(xué)院第一臨床學(xué)院;3廣東醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究所)

桃金娘(Rhodomyrtus tomentosa)屬桃金娘科植物，又名山稔子、崗稔等，廣泛分布于中國南方，具有理氣止痛、利濕止瀉、去瘀止血及益腎養(yǎng)血等功效［1，2］。目前，對桃金娘的研究主要集中于其果實利用方面，而對其藥用成分及藥理作用的研究較少。2010年9月～2012年1月，我們研究了桃金娘對大鼠頸動脈血栓形成和血小板聚集的影響，旨在進(jìn)一步探討其作用機理。

1 材料與方法

1.1 材料 ①實驗動物:大白兔36只，雌雄兼用，體質(zhì)量(2.0±0.2)kg;SD 大鼠18只，雌雄兼用，體質(zhì)量(300±50)g。以上動物均由廣東醫(yī)學(xué)院動物中心提供。②藥品和試劑:桃金娘，采自廣東省翁源縣，由本實驗室用煎煮法提?。?］，并用冷凍干燥機真空干燥得到固體藥品;凝血酶(批號 85H9320，Sigma公司);兔環(huán)磷酸腺苷(cAMP)和環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒(天津索羅門生物科技有限公司);一氧化氮(NO)試劑盒(硝酸還原酶法，南京建成科技有限公司);水合氯醛(批號W20011204，中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司);其余試劑均為國產(chǎn)分析純或生化純。③儀器:YLS-14B小動物血栓生成儀(山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站)，CHRONO-LOG(590-2D)全血血小板聚集儀(美國)，連續(xù)光譜熒光酶標(biāo)儀(德國)，LGJ-10冷凍干燥機(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗儀器廠)。

1.2 桃金娘干預(yù)及大鼠頸動脈血栓形成觀察 實驗方法見參考文獻(xiàn)［4］:將18只SD大鼠隨機分為桃金娘1組、桃金娘2組及對照組各6只，三組均以10%水合氯醛4.5 mL/kg腹腔注射麻醉，分離一側(cè)頸動脈和靜脈，分別經(jīng)靜脈注射桃金娘5、10 mg/kg及生理鹽水5 mL/kg，用YLS-14B小動物血栓生成儀刺激頸動脈 (電流1 mA，刺激時間為5 min)，觀察三組頸動脈血栓阻塞情況，以5 min平均堵塞率表示。

1.3 桃金娘干預(yù)及大白兔全血血小板聚集情況觀察 實驗方法見參考文獻(xiàn)［4］:取20只大白兔隨機分為桃金娘1、2、3組及凝血酶組、對照組各4只，用塑料管收集空腹心臟取血0.5 mL，用ACD(86 mmol/L檸檬酸鈉、111 mmol/L葡萄糖、53 mmol/L檸檬酸)0.15體積比抗凝，均加入生理鹽水各0.5 mL，然后四組分別加入桃金娘 200、400、800 μg/mL 及凝血酶500 U/mL，全血與藥物孵育5 min，同時用全血血小板聚集儀記錄血小板最大聚集率。

1.4 桃金娘干預(yù)及大白兔血小板cAMP、cGMP和NO水平測定 實驗方法見參考文獻(xiàn)［5，6］:取16只大白兔隨機分為桃金娘1、2、3組及凝血酶組、對照組各4只，按1.3取血及抗凝、藥物孵育，1 000 r/min離心15 min，取上清，采用ELISA法檢測cAMP和cGMP水平，采用硝酸還原酶法檢測NO水平。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。計量數(shù)據(jù)以±s表示，行t檢驗，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 頸動脈血栓形成情況 桃金娘1組、桃金娘2組及對照組的5 min平均堵塞率分別為(87.46±10.31)% 、(95.26 ± 12.42)% 及 (65.31 ±8.63)%，前兩組均顯著高于對照組(P均＜0.05)。

2.2 全血血小板聚集情況 桃金娘1、2、3組及凝血酶組、對照組血小板最大聚集率分別為(0.75±0.50)、(3.75 ± 2.36)、(7.75 ± 0.96)、(19.25 ±7.97)、0Ω，前四組與對照組比較P分別 ＞0.05 及＜0.05、0.05、0.01。

2.3 血小板 cAMP、cGMP和 NO水平 四組血小板cAMP、cGMP和NO水平見表1。

表1 四組血小板cAMP、cGMP和NO水平比較(n=4， ±s)

表1 四組血小板cAMP、cGMP和NO水平比較(n=4， ±s)

注:與對照組比較，*P ＜0.05，#P ＜0.01

組別 cAMP(pmol/mL)cGMP/(nmol/mL)NO/(μmol/mL)桃金娘1 組 22.00 ±5.05* 6.54 ±1.86* 120.89 ±26.34*桃金娘2 組 18.71 ±5.11# 5.34 ±2.36* 104.28 ±21.27*桃金娘3 組 15.62 ±6.19# 5.03 ±1.67# 86.61 ±16.98#對照組31.45 ±9.41 10.12 ±2.61 165.36 ±32.48

3 討論

研究顯示，桃金娘的根具有祛風(fēng)行氣、益腎作用，可用于治療寒喘、疝氣、風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛等;其葉果健脾益血，收斂解毒，可用于治療腸胃炎、勞傷、痢疾、便血等，還可用來治療牛勞役過度、豬腸炎、豬牛風(fēng)濕軟腳、牛閹割后出血不止、犢牛白痢、仔豬白痢等疾病;其根、莖性微溫，味汁淡無毒，能健脾胃、補血虛、止血痢，治療哮喘效果良好。桃金娘的藥理成分能堿化、稀釋黏液，刺激支氣管纖毛擺動，促進(jìn)痰液的溶解與排出［1，2］。另外，桃金娘提取物對豬油和花生油均具有抗氧化作用，且其抗氧化作用強弱與溶劑的極性直接相關(guān)［7］;桃金娘多糖具有保肝降酶和抗氧化功能，對大鼠急性肝損傷有較好的保護(hù)作用［8］。

桃金娘外用在民間常用于外傷止血，而血栓形成和血小板聚集在生理止血過程中起重要作用。本實驗直流電刺激大鼠頸動脈造成的血管內(nèi)皮損傷，可促進(jìn)一系列活性因子釋放，從而激活血小板和白細(xì)胞，引起血小板聚集，快速形成混合型血栓。cAMP、cGMP和NO在血小板聚集過程中起重要調(diào)節(jié)作用，其中cAMP和NO生成減少能夠促進(jìn)血小板聚集，反之則抑制血小板聚集［9，10］。

本實驗結(jié)果顯示，桃金娘1組、桃金娘2組及5 min平均堵塞率均顯著高于對照組;桃金娘2、3組血小板最大聚集率均明顯高于對照組;桃金娘1、2、3組血小板cAMP、cGMP和NO水平均明顯低于對照組，尤以桃金娘3組為著。提示桃金娘可促進(jìn)血栓形成和血小板聚集，降低血小板cAMP、cGMP和NO的水平。推測桃金娘的止血機理可能是降低血小板cAMP、cGMP水平，通過cGMP-蛋白激酶途徑減少NO生成，進(jìn)而促進(jìn)血小板聚集，形成血栓栓塞血管。

綜上所述，桃金娘有促進(jìn)血栓形成和血小板聚集的作用，可能機制為下調(diào)血小板cAMP、cGMP和NO水平。

［1］覃杰鳳.桃金娘的研究現(xiàn)狀及發(fā)展前景［J］.中國熱帶農(nóng)業(yè)，2011，39(2):63-64.

［2］鄭樹芳，趙大宣，邱文武，等.野生植物桃金娘的開發(fā)利用［J］.廣西熱帶農(nóng)業(yè)，2010，131(6):53-54.

［3］陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1993:68-69.

［4］劉文，梁念慈.槲皮素-7-硫酸酯鈉鹽對血栓形成的影響［J］.中藥藥理與臨床，2011，27(3):30-33.

［5］余文新，李偉英，李鴻燕，等.補骨脂總香豆素對哮喘大鼠血清cAMP/cGMP的影響［J］.現(xiàn)代中藥研究與實踐，2006，20(5):27-29.

［6］廖予妹，馬楠，耿正惠.妊高征患者血漿一氧化氮與內(nèi)皮素及全血血小板聚集性變化的研究［J］.中華血液流變學(xué)雜志，2001，11(4):338-339.

［7］黃科禮，黃儒強.山稔子提取物對油脂抗氧化作用的研究［J］.食品科學(xué)，2008，29(10):90-92.

［8］陳旭，杜正彩.桃金娘多糖對大鼠急性肝損傷保護(hù)作用的研究［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38(11):5644，5664.

［9］丁順，李賀，范新田.脫氫紫堇堿體外對兔血小板中環(huán)核苷酸含量的影響［J］.中國民康醫(yī)學(xué)，2007，19(3):165-166.

［10］李滿生，顏春魯，徐厚謙.一氧化氮的腦血管作用研究進(jìn)展［J］.實用老年醫(yī)學(xué)，2005，19(3):162-163.