鄭永芹， 初正云， 王添敏， 翟延君

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧大連116600)

刺槐花為豆科植物刺槐屬刺槐Robinia pseudoacacia L.的干燥花，又名洋槐、江南槐、胡藤，原產(chǎn)于美國東部的阿柏拉契亞山脈和奧薩克山脈一帶，我國引種栽培的有刺槐和毛刺槐兩種［1-2］。因具有生長快、適應(yīng)性強、耐鹽堿等優(yōu)點，目前得到大面積的種植［3］，覆蓋28個省 (市、自治區(qū))，黃河和淮河流域為刺槐栽培中心區(qū)域［4］。刺槐花具有較高的藥用價值，具有消癰化瘀，清熱解毒，療咽治痔，健胃通腸等功效［5］。美國當(dāng)?shù)鼐用駥⒋袒弊鳛榇咄聞€有報道稱它可以使人和動物興奮［6］，國內(nèi)民間多用來止血、殺菌消炎等。本實驗建立了高效液相色譜法同時測定刺槐花中的刺槐苷和鼠李糖刺槐苷的方法，并且對不同產(chǎn)地的花蕾、初開花及開放花中兩種成分進(jìn)行定量考察，期望為刺槐花采收期的確立和質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1100型高效液相色譜儀，配置四元泵、在線脫氣機、柱溫箱、紫外檢測器、柱溫箱、ChemStaion化學(xué)工作站;SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵 (鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)，KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器 (昆山市超聲儀器有限公司)，CP225D型十萬分之一電子天平 (德國sartorius公司)

1.2 試藥 12個不同產(chǎn)地刺槐花的花蕾、初開花及開放花，均采自于遼寧大連市的不同地區(qū)，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)初正云教授鑒定為豆科植物刺槐Robinia pseudoacacia L.的干燥花，并將12個不同產(chǎn)地的刺槐花依次編號為 S1、S2、S3…S12。刺槐苷和鼠李糖刺槐苷對照品均由本實驗室分離得到，經(jīng)高效液相色譜法檢測純度均大于98%。甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其余試劑均是分析純(天津科密歐化學(xué)試劑有限公司)。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 Agilent TC-C18色譜柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相為甲醇 (A)-0.3%磷酸溶液 (B)梯度洗脫，0～5 min(20% ～32%A)，5～25 min(32% ～45%A)，25～30 min(45% ～68%A)，30～40 min(68% ～80%A)。體積流量為1 mL/min，柱溫為35℃，檢測波長為349 nm，進(jìn)樣量20 μL，以峰面積為定量依據(jù)。在此色譜條件下，分別取對照品溶液和供試品溶液進(jìn)樣，計算理論板數(shù)，以鼠李糖刺槐苷色譜峰計算不低于2500，分離度大于1.5，對照品和供試品色譜圖見圖1。

圖1 混合對照品(A)與供試品(B)色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of reference substances(A)and sample(B)

2.2 對照品溶液的制備 取刺槐苷12.84 mg，鼠李糖刺槐苷0.6 mg，精密稱定，分別置50 mL量瓶中，加70%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液 (刺槐苷的質(zhì)量濃度為0.2568 mg/mL，鼠李糖刺槐苷的質(zhì)量濃度為0.012 mg/mL)。

2.3 供試品溶液的制備 取刺槐花粉末約0.5 g，精密稱定，置錐形瓶中，加50 mL石油醚，超聲10 min脫脂，濾去石油醚，揮干粉末，加70%甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲提取1 h，放冷至室溫，用70%的甲醇補足質(zhì)量，搖勻濾過，取續(xù)濾液，再微孔濾膜濾過，即得。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密吸取刺槐苷和鼠李糖刺槐苷對照品溶液1、2、3、4、5、6、7 mL，定容至10 mL，搖勻。吸取以上溶液，注入液相色譜儀，進(jìn)樣量20 μL，測定。以峰面積 (mAU)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量 (μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果刺槐苷回歸方程為Y=1410.1X－37.457，r=0.9994，表明刺槐苷在質(zhì)量濃度為0.02568～0.17976 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;鼠李糖刺槐苷回歸方程為 Y =2795.4X－18.843，r=0.9999，表明鼠李糖刺槐苷在質(zhì)量濃度為0.0012～0.0084 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗 取同一供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定刺槐苷和鼠李糖刺槐苷的峰面積，結(jié)果RSD分別為1.15%、1.04%，表明精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗 分別精密稱取同一樣品5份，按2.3項下方法分別制成供試品溶液，進(jìn)樣分析，測定刺槐苷和鼠李糖刺槐苷的峰面積，計算，平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為2.253% 、0.08937%，RSD分別為1.29%、1.32%，結(jié)果表明本方法重復(fù)性好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12 h測定刺槐苷和鼠李糖刺槐苷的峰面積，結(jié)果RSD分別為0.64%、1.16%，表明樣品在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收試驗 精密稱取0.25 g已測含有量的樣品9份，每3份分別加入刺槐苷對照品3、3.7、4.5 mg和鼠李糖刺槐苷對照品 0.6、0.8、1.0 mg，按2.3項下方法制備供試品溶液，分別吸取供試品溶液20 μL進(jìn)樣，測定。計算得刺槐苷的平均回收率為98.21%，RSD為0，972%;鼠李糖刺槐苷的平均回收率為97.84%，RSD為1.17%。

2.9 樣品測定 分別精密稱取10個產(chǎn)地的刺槐花的花蕾、初開花及12個產(chǎn)地的開放花粉末，按2.3項下方法，制成供試品溶液，測定刺槐苷和鼠李糖刺槐苷，結(jié)果見表1。

2.10 兩種成分的含有量比較 采用SPSS Statistics 17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，組間比較采用多重比較，對刺槐苷和鼠李糖刺槐苷進(jìn)行比較，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 刺槐屬植物中的黃酮苷類化合物具有光譜活性和低毒性，如山柰酚、山柰酚-7-鼠李糖苷、刺槐苷、山柰酚-3，7-二鼠李糖苷、刺槐素都具有明顯的抗炎作用，后三者的活性均超過蘆丁［7］。朝鮮也曾經(jīng)有報道用刺槐花中的鼠李糖刺槐苷制成了注射液，治療急、慢性腎炎、腎毒癥、尿毒癥、腎性高壓、膀胱炎和泌尿系統(tǒng)疾?。?］。本課題組采用經(jīng)典的MTT法實驗，初步結(jié)果表明，刺槐苷和鼠李糖刺槐苷也有一定的抗癌活性。因此，本研究將刺槐花中的刺槐苷和鼠李糖刺槐苷，作為確定刺槐花采收期的指標(biāo)性成分。

表1 刺槐苷和鼠李糖刺槐苷的測定結(jié)果Tab.1 Determination of robinin and rhamnoroininin samples

表2 刺槐苷和鼠李糖苷含有量比較 (±s)Tab.2 Comparison of robinin and rhamnorobinin in samples(±s)

表2 刺槐苷和鼠李糖苷含有量比較 (±s)Tab.2 Comparison of robinin and rhamnorobinin in samples(±s)

注:與花蕾比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.001;與初開花比較，##P ＜0.001。

不同采收期的刺槐花 刺槐苷/% 鼠李糖刺槐苷/%0.09378±0.025202.298±0.3164 0.0675±0.03142初開花 (n=10) 1.924±0.3734* 0.08051±0.04108開放花 (n=12) 1.259 ±0.3213＊＊##花 蕾(n=10)

3.2 本研究采用SPSS Statistics 17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，結(jié)果顯示不同采收期對刺槐苷的含有量有顯著影響，花蕾與初開花相比較，花蕾顯著高于初開花 (P＜0.05);花蕾與開放花相比較，花蕾顯著高于開放花 (P＜0.001);初開花與開放花相比較，初開花顯著高于開放花 (P＜0.001)。結(jié)果還顯示鼠李糖刺槐苷的P值均大于0.05，故采收期對鼠李糖刺槐苷的影響很小，故可以忽略期對其的影響。綜上所述，刺槐花的采收期宜在花蕾和初開時期。

3.3 刺槐花氣味芳香、口感甜，此外刺槐花中還含有極為豐富的三大營養(yǎng)素、多種維生素、礦物質(zhì)，并含有一些高效生物活性物質(zhì)［9］。人們經(jīng)常食用刺槐花，民間流傳著一些食療方，如刺槐花芝麻餅、籠蒸刺槐花、槐花酥蝦、油煎刺槐花、刺槐花雞蛋湯等。此外，還有報道將刺槐花制成刺槐花飲料［10］、多維低糖槐花果醬［11］、脫水速溶花菜湯、花保健蜜酒、刺槐花營養(yǎng)粥等［12］。本研究的結(jié)果可以使人們更好地利用刺槐花的藥用價值和食用價值，從而達(dá)到中醫(yī)所提倡的“食療法”。

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