趙 濤 張曉紅 盧 露 黨艷妮 謝 偉 南景一

(陜西步長(zhǎng)制藥有限公司，陜西省咸陽(yáng)市渭陽(yáng)西路西延段123號(hào)，712000)

魚金清解口服液是在國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)“魚金注射液”處方組成基礎(chǔ)上［1］，由魚腥草、金銀花2味藥材經(jīng)提取制成的口服液體制劑，臨床療效確切，主要用于熱毒內(nèi)盛而致的上呼吸道感染、支氣管肺炎、化膿性疾病、婦科炎癥與術(shù)后發(fā)熱的病癥。魚金清解口服液包含了揮發(fā)性成分和水溶性成分［2-3］，這些成分在水中穩(wěn)定性好，適合于做成口服液制劑。眾所周知，中藥制劑療效與處方組成、劑量等因素有關(guān)，我們結(jié)合魚金清解口服液的功能主治，通過(guò)體內(nèi)外抗菌試驗(yàn)篩選出處方的最佳配比，為該制劑的臨床療效奠定了基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 AE100電子分析天平(瑞士梅特勒公司);電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海醫(yī)療器械七廠);壓力蒸汽滅菌器(上海醫(yī)用核子儀器廠);電熱蒸餾水器(北京市醫(yī)療設(shè)備廠);電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠);無(wú)菌凈化工作臺(tái)(蘇凈集團(tuán)蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司)。

1.2 試藥 大腸埃希菌ATCC25922株，金黃色葡萄球菌ATCC25925株，綠膿假單孢菌ATCC27853株，表皮葡萄球菌ATCC26069株，甲型溶血性鏈球菌32209株，乙型溶血性鏈球菌32210株，肺炎球菌31001株，流感嗜血桿菌58535株，肺炎克雷伯菌46104株，白色假絲酵母菌85021株;魚金清解口服液處方1、2和3的試驗(yàn)制劑，由陜西步長(zhǎng)制藥有限公司生產(chǎn)提供。

2 方法與結(jié)果［4-5］

2.1 體外抗菌試驗(yàn)方法與結(jié)果 1)藥液的配制:移取魚金清解口服液處方1、2、3分別10mL，與90mL肉湯混勻后，用孔徑0.22μm超微濾器過(guò)濾除菌，無(wú)菌藥液置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?)菌液配制:將37℃、24h培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)菌接種于肉湯，置普通培養(yǎng)箱37℃、24h培養(yǎng)，比濁法進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)，用肉湯調(diào)配成106CFU/mL菌液備用。3)MIC、MBC測(cè)定:將藥液用肉湯由10%為起點(diǎn)進(jìn)行連續(xù)二倍梯度稀釋，依次加到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，0.2mL/孔。再加入濃度為106CFU/mL的實(shí)驗(yàn)菌液0.01mL/孔。同時(shí)設(shè)立細(xì)菌以及培養(yǎng)基對(duì)照。置4℃作用12h，于普通培養(yǎng)箱37℃、48h培養(yǎng)，觀察結(jié)果。無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)孔最小藥物濃度為最小抑菌濃度(MIC)。再依次將各無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)孔的培養(yǎng)物用無(wú)菌蒸餾水稀釋10倍，吸取0.01mL點(diǎn)種于普通瓊脂平板，置普通培養(yǎng)箱37℃、48h培養(yǎng)，無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)點(diǎn)種區(qū)域所對(duì)應(yīng)的藥物最小濃度為最小殺菌濃度(MBC)。結(jié)果見表1、表2。

從表1、表2可見，處方2、處方3配比的體外抗菌效果優(yōu)于處方1，處方2、處方3之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 體內(nèi)抗菌試驗(yàn)方法與結(jié)果 1)金黃色葡萄球菌和乙型溶血性鏈球菌菌液的制備、注射及計(jì)數(shù):金黃色葡萄球菌用MH瓊脂培養(yǎng)基，乙型溶血性鏈球菌用血平板，各傳代1次，取新鮮菌體用于試驗(yàn)。取金黃色葡萄球菌菌液用MH肉湯，乙型溶血性鏈球菌用5%胎牛血清的MH肉湯培養(yǎng)液，37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，1：1混合，用滅菌生理鹽水稀釋，再用721型分光光度計(jì)在550nm波長(zhǎng)處比色，調(diào)金黃色葡萄球菌和乙型溶血性鏈球菌混合菌液的濃度使OD值至0.42，取出部分菌液作細(xì)菌計(jì)數(shù)。每只小鼠注射菌液0.5mL。每只小鼠注射金黃色葡萄球菌和乙型溶血性鏈球菌量約為4×107個(gè)，為預(yù)試驗(yàn)證實(shí)的最小致死劑量。2)不同處方配比的魚金清解口服液對(duì)金黃色葡萄球菌和乙型溶血性鏈球菌小鼠的保護(hù)作用:48只小鼠隨機(jī)分為4組，每組12只，即模型對(duì)照組(無(wú)菌生理鹽水)，魚金清解口服液處方1、2和3組。首次給藥后6h，注射最小致死量的金黃色葡萄球菌和乙型溶血性鏈球菌，造模4h，各組給藥，每日2次，連續(xù)5d。結(jié)果見表3、表4。

表1 不同處方配比的魚金清解口服液對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株的MIC

表2 不同處方配比的魚金清解口服液對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株的MBC

表3 不同處方配比的魚金清解口服液對(duì)金黃色葡萄球菌ATCC25925株感染小鼠體內(nèi)保護(hù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表4 不同處方配比的魚金清解口服液對(duì)乙型溶血性鏈球菌32210株感染小鼠體內(nèi)保護(hù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

從表3、表4可見，3個(gè)處方配比的魚金清解口服液在體內(nèi)對(duì)細(xì)菌感染小鼠的保護(hù)作用以處方2效果最好，處方2、處方3明顯優(yōu)于處方1。

3 討論

我們采用藥效學(xué)的體內(nèi)外抗菌實(shí)驗(yàn)進(jìn)行處方篩選，參照上述試驗(yàn)研究結(jié)果，并且充分考慮各個(gè)試驗(yàn)參數(shù)設(shè)立及其評(píng)價(jià)方法，最終綜合考評(píng)研究結(jié)果得出:魚金清解口服液3個(gè)處方配比中，處方2作用效果最好，故選擇處方2作為魚金清解口服液的制劑處方。

［1］戴冰.魚腥草注射液的研究近況.湖南中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，1994，10(1):33-34.

［2］黃虹，等.均勻設(shè)計(jì)和模式識(shí)別法優(yōu)化魚腥草口服液制備工藝.中成藥，2000，22(10):684-687.

［3］閻巧娟，等.金銀花中綠原酸提取純化工藝的優(yōu)化.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，7(2):22-26.

［4］阮鳴，等.金銀花揮發(fā)油的萜類化學(xué)成分研究進(jìn)展.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2005，16(1):59-60.

［5］趙良忠，等.金銀花水溶性抗菌物質(zhì)的提取及其抑菌效果研究.中國(guó)生物制品學(xué)雜志，2006，3(19):201-203.

(2012-02-01收稿)