天津市南開醫(yī)院 （天津300100） 楊秀竹 楊 靜 劉洪斌

肺炎是常見的呼吸道感染疾病，主要累及支氣管、細(xì)支氣管及肺泡壁，臨床以發(fā)熱、咳嗽為表現(xiàn)。研究表明，缺氧、病原微生物及其毒素聯(lián)合作用可引起機體血管內(nèi)皮損傷，炎性介質(zhì)如內(nèi)皮素、血管緊張素、前列素A2及組織胺等釋放，引起小動脈痙攣、血小板活化導(dǎo)致高凝狀態(tài)、血黏度異常和微血管血栓形成，最終導(dǎo)致多器官功能衰竭。肺部感染細(xì)菌或病毒時均可直接、間接促進促凝物質(zhì)釋放［1］?？梢圆l(fā)微血管血栓，并發(fā)播散性血管內(nèi)凝血（DIC）發(fā)生率為5%～37%，在重癥肺炎中DIC的發(fā)生率為15%［2］。早期肝素治療能夠降低血漿凝血酶原片段1＋2（F1＋2）水平和減少血栓形成。血小板活化的指標(biāo)包括P－選擇素 （CD62p）和血小板膜糖蛋白PAC－1以及細(xì)胞內(nèi)游離鈣升高等［3］。血小板活化與肺疾病引起的血栓形成有關(guān)。我院于2010年3月至2010年7月診治慢性阻塞性肺疾?。–hronic obstructive pulmonary disease，COPD）49例和急性肺炎57例，對其全血血小板活化狀況進行了測定，并與20例健康對照者進行了對比分析，現(xiàn)分析報告如下。

對象與方法

1 研究對象 49例COPD急性發(fā)作和57例急性肺炎患者均為我院呼吸科患者，其中男60例，女46例。年齡54～91歲，中位年齡75.5歲。COPD急性發(fā)和急性肺炎的診斷均符合《實用內(nèi)科學(xué)》有關(guān)COPD急性發(fā)作、急性肺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］。對照組20例為健康自愿者。三組在性別、年齡構(gòu)成方面經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理無顯著性差異（P ＞0.05）。

2 測定方法

2.1 標(biāo)本采集 于肘窩正中靜脈抽取外周血3 ml，取新鮮血2ml輕輕推入專用的CTAD抗凝管，立即送檢。

2.2 CD62p和PAC－1檢測 用熒光色素標(biāo)記三種單克隆抗體均購自美國BD公司，與全血中血小板進行直接免疫熒光染色。其中PAC－1FITC，CD62p PE和CD61Percp。RGDS作為PAC－1阻斷劑，用于阻斷PAC－1的陰性質(zhì)控。Mouse IgG1PE作為CD62P的同型對照，每個樣品做兩管，測定管加入3種抗體各20μl，血10μl；對照管加入三種抗體各20μl，血10μl，RGDS 20μl及 mouse IgG1PE20μl。避光15 分 鐘，加 入 PBS 750μl，4% 多 聚 甲 醛 250μl，30min后上機。

2.3 流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測 流式細(xì)胞儀采用美國BD公司生產(chǎn)的Calibur型號，用CD61p／SSC設(shè)定血小板門，測定10000個細(xì)胞。CD61和CD62p或者CD61和PAC－1同時標(biāo)記者定義為陽性。

3 統(tǒng)計學(xué)處理 本組 實驗室數(shù)據(jù)采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件包進行方差分析，結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（ˉx±s）表示，以P＜0.05為有顯著性差異，P＜0.01為有極顯著性差異。

結(jié) 果

三組患者CD62p和PAC－1表達對比 見附表。COPD急性發(fā)作組、急性肺炎組CD62p、PAC－1血小板表面表達無顯著性差異（P＞0.05），但兩組CD62p、PAC－1血小板表面表達均明顯高于健康對照組（P＜0.01）。

附表 各組患者CD62p和PAC－1表達的比較

討 論

血小板的功能主要是促進止血和加速凝血，血小板在止血和凝血過程中，具有形成血栓，堵塞創(chuàng)口，釋放與凝血有關(guān)的各種因子等功能。為了明確血小板的活化狀態(tài)，血小板活化標(biāo)記物的檢測非常重要。CD62p由血小板α－顆粒釋放，為鈣離子依賴蛋白，占血小板分泌蛋白的25%，血小板活化后，CD62p于血小板質(zhì)膜上高水平表達，成為血小板的特異性分子標(biāo)志。PAC－1是血小板活化的早期標(biāo)志物，即活化的GPⅡb／Ⅲa復(fù)合物，它是血小板聚集的最后通路。CD61可以特異性作用于GPⅢa，可以作為血小板的標(biāo)記物［5］。本資料與文獻報道相符，顯示CD62p與PAC－1的表達呈正相關(guān)，提示其是血小板活化的標(biāo)記物。因此，血小板活化過程可能激發(fā)了血小板釋放入循環(huán)中。在數(shù)目眾多的肺泡上，布滿了脆弱的毛細(xì)血管網(wǎng)，而且肺循環(huán)是在低壓下維持血流的。因此，肺動脈高壓、低氧血癥、二氧化碳潴留等病理因素，就容易導(dǎo)致血液高凝狀態(tài)，甚至微血栓形成。COPD急性發(fā)作期及急性肺炎時，發(fā)熱、缺氧、感染、酸中毒等因素導(dǎo)致血液濃縮，肺血管通透性增加，液體滲出，血流遲緩淤滯，為微血栓形成提供了條件。本組資料顯示，血小板表面CD62p和PAC－1表達陽性的比例，在COPD急性發(fā)作期和急性肺炎均明顯高于正常對照組。而前兩者之間差異卻不明顯，這些結(jié)果進一步證實急性肺部炎癥患者，無論其是慢性炎癥急性發(fā)作，還是新近起病皆存在血小板活化現(xiàn)象［6，7］。FCM作為新型的血小板檢測技術(shù)，操作簡便，用血量少，可用于急性肺部炎癥病程中血小板活化狀態(tài)的監(jiān)測。血小板活化可能成為急性肺部炎癥病情及預(yù)后評估的一項指標(biāo)。

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