李 枝，李 進，李世開，和海燕，師 濤，張 慶，陳海濱

（1.大理學院臨床醫(yī)學院，云南大理 671000；2.大理學院基礎醫(yī)學院，云南大理 671000）

薄荷在中醫(yī)藥中有較好的功效〔1〕，其中含有豐富芳香的薄荷油〔2〕，傳統(tǒng)認為無毒性而廣泛用于牙膏等生活日用品之輔料，民間多以調(diào)味和菜食而廣泛大劑量食用，近期卻有大量食用薄荷油中毒的報道。為了掌握其對肝腎等重要器官的毒害作用，本實驗通過不同劑量對分組小白鼠實施灌胃，測定致死量并解剖觀察肝、腎器官的病理形態(tài)改變，以確定薄荷油的毒性及其量效關(guān)系，對指導合理量食用、醫(yī)藥的劑量使用具有重要意義。

1 材料與方法

1.1實驗藥物100%薄荷油，由實驗室制取。

1.2儀器電子天平，顯微鏡，全能型脫水機，解剖器械。

1.3動物昆明小白鼠，同齡雌雄各半，由昆明醫(yī)學院實驗動物中心提供，（20±2）g。

1.4方法

1.4.1 薄荷油的提取

1.4.1.1 原理 薄荷揮發(fā)油與水不互溶。當受熱后，二者蒸氣壓的總和與大氣壓相同時，混合液即開始沸騰，繼續(xù)加熱則揮發(fā)油可隨水蒸氣蒸餾出來，冷卻靜置，即可分離〔3〕。

1.4.1.2 提取方法 水蒸氣蒸餾法〔4〕提取，稱取粉碎好的薄荷200 g，置揮發(fā)油提取器中，加水1 000 mL，按《中國藥典》2000版附錄XD揮發(fā)油測定法提取揮發(fā)油。蒸餾6 h，收集薄荷油。靜置分層，用無水硫酸鈉脫水，濾紙過濾。

1.4.2 灌胃和解剖觀察 為了能達到藥物在有效時間范圍內(nèi)造成器官損傷的效果，進行了試探性實驗測定致死最小量。給藥劑量為1.00 mL/10 g的小鼠均在給藥半小時后死亡。當給藥劑量降至0.05 mL/10 g時，小鼠給藥后，立即出現(xiàn)呼吸加快后減慢到呼吸停止，4只小鼠大約30 min后陸續(xù)死亡，最短死亡時間為給藥后42 min。當給藥量降至0.005 mL/10 g時，小鼠癥狀減輕，但仍有部分小鼠給藥30 min后死亡。死亡小白鼠均進行解剖，制片并鏡下觀察。

按照試探性實驗測定結(jié)果設計急性實驗，如下：取小白鼠50只，體重相近（20±2）g，雌雄各半，隨機分為10組，其中1組空白對照組未灌胃，其他9組用100%薄荷油的不同劑量灌胃，觀察并記錄一般狀況和死亡情況等臨床過程，24 h后全部處死，解剖后取肝、腎作常規(guī)HE石蠟切片染色，光學顯微鏡下觀察其組織形態(tài)學變化。不同給藥劑量與切片檢查情況對照。見表1。

表1 小鼠1次灌胃不同劑量薄荷油對肝、腎組織形態(tài)的病理分級

2 結(jié)果

2.1不同劑量灌胃后小白鼠臨床改變按實驗設計不同劑量灌胃小白鼠，觀察24 h。小劑量組（0.001～0.002 5 mL/10 g）小鼠給藥30 min后均出現(xiàn)驚厥，部分小鼠出現(xiàn)步履蹣跚，行走易向一側(cè)摔倒，隨著時間推移，癥狀緩解，部分小鼠死亡。中劑量組（0.003～0.003 5 mL/10 g）小鼠給藥30 min后明顯驚厥，出現(xiàn)步履蹣跚，行走易向一側(cè)摔倒，行動遲緩，氣息微弱，部分可見抱腹現(xiàn)象，大多小鼠的上述癥狀隨著時間推移在1～2 h后得到緩解。劑量較大組（0.004 mL/10 g～0.005 mL/10 g） 小鼠大多30 min后出現(xiàn)異常反應且陸續(xù)死亡。各劑量組均可見出現(xiàn)異常反應的小鼠逐漸恢復正常。死亡小鼠解剖后肉眼檢查可見肝臟有不同程度的顏色變深、表面粗糙等，腎臟無明顯變化。具體死亡情況：空白組小鼠死亡數(shù)為0；薄荷油各組按劑量從低到高的死亡數(shù)依次為：0、1、3、3、2、4、3、5、5、5。第5、8、9、10組小鼠在給藥后分別立即死亡2、1、4、5只，剩余實驗組小鼠部分陸續(xù)死亡，其余小鼠24 h之后仍活著。

2.2不同劑量灌胃后小白鼠病理形體改變

2.2.1 不同劑量灌胃后小白鼠肝臟病理形體改變光鏡下觀察，空白組及低劑量第2組肝小葉結(jié)構(gòu)清晰完好，肝細胞未見明顯變性、壞死及肝血竇改變。低劑量組（3、4、5組）：肝小葉結(jié)構(gòu)尚正常，肝細胞可見水樣變性，細胞體積增大，胞漿變得透亮、淡染。中等劑量組（6、7組）：可見肝細胞水樣變性，細胞體積增大，胞漿變得透亮、淡染，偶見脂肪變性細胞，肝索不明顯，肝小葉結(jié)構(gòu)不清，肝細胞排列混亂。高劑量組（8、9、10組）肝組織有顯著性損傷：肝小葉結(jié)構(gòu)不清偶見壞死灶及炎性浸潤，大片肝細胞呈現(xiàn)脂肪變性，胞漿內(nèi)圓形脂肪滴擠壓細胞核變形趨居一側(cè)，可見部分肝細胞氣球樣變及核溶解現(xiàn)象。見圖1～2。

圖1 肝細胞水腫（HE染色，10×40倍）

圖2 肝細胞脂肪變性（HE染色，10×10倍）

2.2.2 不同劑量灌胃后小白鼠腎臟病理形體改變光鏡下觀察，空白組及低劑量第2組腎組織切片顯示：腎小球結(jié)構(gòu)完整，未見腎小管上皮細胞水腫等病理改變，管腔輪廓清晰。低劑量組（3、4、5組）：腎組織未見異常；中等劑量組（6、7組）：腎小管上皮細胞見輕度水腫及破壞，輪廓不清，相互融合。高劑量組（8、9、10組）：腎組織出現(xiàn)腎小管上皮細胞明顯腫脹，細胞體積明顯增大，胞漿淡染，可見絲狀淡染物質(zhì)。部分腎小管管腔輪廓不清，相對變窄，腔內(nèi)偶見脫落的上皮細胞及細胞核溶解現(xiàn)象。見圖3。

圖3 腎小管上皮細胞水舯（HE染色，10×40）

3 討論

薄荷在生活中應用廣泛，其價值受到青睞，對薄荷油的研究也日益增多〔5〕，但對其毒性研究較少，尤其腎毒性的研究甚少。Ilene B.Anderson等〔6〕報道過薄荷油中毒的病例，其中毒主要表現(xiàn)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肝和腎方面。陳光亮等〔7〕已在小鼠薄荷油急性毒性實驗中證實：薄荷油有中樞神經(jīng)系統(tǒng)和肝毒性。對肝臟的損傷多有報道〔8〕，但對腎臟的損傷研究較少，為進一步了解其毒性作用，彌補該藥對腎臟損傷的空缺，進行本次研究，從而指導薄荷油的安全使用。

本實驗對小白鼠灌胃較大劑量（大于0.004 mL/10 g）30 min后，小鼠出現(xiàn)步履蹣跚，行動遲緩，易向一側(cè)摔倒，呼吸急促并有部分死亡。隨著劑量變大，小鼠死亡速率和死亡率呈增大趨勢。小劑量組某些小鼠亦可在給藥30 min后出現(xiàn)死亡，可能是個體對薄荷油的敏感性存在差異，亦可能是在灌胃過程中人為因素導致的。另外，有資料表明內(nèi)服少量薄荷油有中樞興奮作用，但超過一定量時對中樞神經(jīng)起抑制作用〔9〕。灌胃小劑量薄荷油即可使小鼠30 min后出現(xiàn)驚厥，表現(xiàn)為中樞神經(jīng)興奮。30 min后出現(xiàn)步履蹣跚，行動遲緩，易向一側(cè)摔倒，類似醉酒狀態(tài)等異常反應，可能是隨著時間的延長，血藥濃度升高到一定程度后，薄荷油發(fā)揮中樞抑制作用的結(jié)果。顯微鏡下觀察，不同劑量薄荷油對小鼠肝臟和腎臟的病理損傷程度不同，采用灌胃方法給予小白鼠大劑量薄荷油時，肝細胞出現(xiàn)嚴重水腫、脂肪變性和壞死等改變，小劑量時變化不明顯。腎損傷均不明顯，大劑量時可見腎小管細胞水腫。出現(xiàn)上述病理改變的原因可能是薄荷油能夠引起肝、腎細胞內(nèi)某些代謝酶變性〔10〕，或是代謝后產(chǎn)生了能夠損傷肝、腎細胞的毒性物質(zhì)，具體毒理機制還有待進一步研究。大量資料表明，人體低劑量服用薄荷油并無毒性作用，日常生活及臨床應用中只要合理控制劑量并不會產(chǎn)生明顯的急性中毒，從而有效、安全地利用其藥用價值。一次大劑量服用本品可產(chǎn)生一系列的毒性作用，尤以中樞神經(jīng)系統(tǒng)和肝毒性顯著，并對腎臟有輕度毒性，所以在使用過程中要謹慎。對薄荷油毒性作用的掌握有利于指導合理量食用及醫(yī)藥劑量的使用。

〔1〕江蘇新醫(yī)學院.中藥大辭典：下冊〔M〕.上海：上?？茖W技術(shù)出版社，1977：2648.

〔2〕劉穎.薄荷化學成分的研究〔J〕.中國中藥雜志，2005，14（30）：1086-1088.

〔3〕谷珉珉，賈韻儀，姚子鵬.有機化學實驗〔M〕.上海：復旦大學出版社，1991：198-200.

〔4〕王立斌，馬永純，班偉.水蒸氣蒸餾法提取薄荷中揮發(fā)油〔J〕.通化師范學院學報，2005，26（6）：56-57.

〔5〕徐健飛.文獻計量分析揭示我國薄荷研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢〔J〕.桂林師范高等專科學校學報，2007，21（3）：146-149.

〔6〕Ilene B Anderson，Water H Mullen，James E Mceker，et al.Pennyroyal toxicity：measurement of toxic metabolite levels in two cases and review of the literature〔J〕.Ann Intern Med，1996，124（8）：726-734.

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〔8〕陳光亮，姚道云，汪遠金，等.薄荷油藥理作用和急性毒性的研究〔J〕.中藥藥理與臨床，2001，17（1）：10.

〔9〕梁呈元，李維林，張涵慶，等.薄荷化學成分及其藥理作用研究進展〔J〕.中國野生植物資源，2003，22（3）：9-12.

〔10〕劉紅杰，金若敏，張文斌，等.薄荷油致大鼠肝毒性機制研究〔J〕.毒理學雜志，2007，12（18）：2594-2596.