吳建軍，劉繼斌

(1.海門市第五人民醫(yī)院，江蘇 海門 226131;2.南通市腫瘤醫(yī)院，江蘇 南通 226361)

卵巢癌是惡性程度極高的婦科腫瘤，發(fā)病率居婦科腫瘤的第5位，死亡率居首位，對女性生命造成嚴(yán)重的威脅。由于多數(shù)患者確診時已是發(fā)展期，因此尋找靈敏而可靠的指標(biāo)對卵巢癌診治及預(yù)后評估是亟待解決的問題。白介素－6(IL-6)是一種多功能細(xì)胞因子，其除參與免疫應(yīng)答、炎性反應(yīng)以及淋巴細(xì)胞成熟和分化外，還與某些惡性腫瘤的形成和發(fā)展有關(guān);白介素－8(IL-8)是免疫效應(yīng)細(xì)胞生長刺激因子。有研究［1－6］報道IL-6、IL-8在卵巢癌中高表達(dá) ，同時還影響對化療的敏感性。作者應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定卵巢癌患者、卵巢良性疾病患者和健康體檢者血清中IL-6和IL-8水平，探討其與臨床病理、化療療效以及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇南通市腫瘤醫(yī)院2009年月1月至2010年1月收治的40例卵巢上皮性惡性腫瘤(包括漿液性腫瘤，黏液性腫瘤，子宮內(nèi)膜樣腫瘤)患者，年齡35～68歲，平均年齡52歲;均經(jīng)病理證實(shí)且手術(shù)前未經(jīng)過化療、放療、內(nèi)分泌及生物治療。手術(shù)病理分期按FIGO(2006)標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ、Ⅱ期3例，Ⅲ、Ⅳ期37例?；颊呷朐汉缶邮苣[瘤細(xì)胞減滅手術(shù)+鉑類為主的化療。40例卵巢上皮性惡性腫瘤患者為卵巢癌組;40例卵巢良性疾病患者為卵巢良性疾病組，年齡36～69歲，平均年齡51歲;同時選擇健康體檢者40例作為對照組，年齡33～66歲，平均年齡49歲。3組患者的年齡、地區(qū)來源等具有可比性。所有研究對象近半年內(nèi)未服用過免疫調(diào)節(jié)劑和激素類藥物。

1.2 標(biāo)本收集及主要試劑 所有受試人員均晨起空腹抽取外周靜脈血，其中手術(shù)患者在術(shù)后2周留取第2次血清標(biāo)本，化療患者在第2療程結(jié)束留取第2次血清標(biāo)本，3000 r·min－1離心5～10 min ，分離血清，－80℃低溫冰箱凍存，供檢測用。IL-6和IL-8檢測均采用ELISA法，試劑購自上海信然生物技術(shù)有限公司，操作嚴(yán)格按說明書進(jìn)行。

1.3 操作步驟 IL-6和IL-8檢測步驟類似，操作過程如下:1)加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50 μL、待測樣品50 μL于反應(yīng)孔內(nèi)，立即加入50 μL的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45 min;2)甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30 s，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加1次;3)每孔加入100 μL的親和鏈酶素－HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30 min;4)同步驟2);5)每孔加入底物A、B各50 μL，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5 min。避免光照;6)取出酶標(biāo)板，迅速加入50 μL終止液，立即測定結(jié)果;7)在450 nm波長處測定各孔的OD值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 10.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)用表示，比較用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 3組患者血清IL-6、IL-8水平比較 對照組、卵巢良性疾病組及卵巢癌組患者血清IL-6水平分別為(49.96 ± 9.35)ng·L－1、(61.45 ± 10.53)ng·L－1、(161.57 ±6.87)ng·L－1，總體比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);對照組、卵巢良性疾病組及卵巢癌組患者血清 IL-8 水平分別為 (53.56±11.59)ng·L－1、(78.58 ±9.67)ng·L－1、(222.52 ± 11.87)ng·L－1，總體比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 3組血清IL-6、IL-8水平化比較 ng·L－1

2.2 卵巢癌血清IL-6、IL-8水平與臨床分期的關(guān)系 卵巢癌患者血清IL-6、IL-8水平隨臨床分期增加而逐漸升高，各分期間的IL-6、IL-8水平比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均＜0.05)。見表2。

表2 卵巢癌患者血清IL-6、IL-8水平與臨床分期的關(guān)系ng·L－1

2.3 血清IL-6、IL-8水平檢測與卵巢癌患者預(yù)后關(guān)系 40例卵巢癌患者中，16例復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移患者與穩(wěn)定患者血清IL-6、IL-8水平比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均＜0.05)。見表3。

表3 卵巢癌患者血清IL-6、IL-8水平與復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系ng·L－1

2.4 卵巢癌患者化療前后血清IL-6、IL-8水平變化 卵巢癌患者化療前IL-6、IL-8水平明顯高于化療后(P ＜0.05)。見表4。

表4 卵巢癌患者化療前后血清IL-6、IL-8水平ng·L－1

3 討論

卵巢癌的病因以及發(fā)病機(jī)制并不十分清楚，細(xì)胞因子的異常表達(dá)在上皮性卵巢癌發(fā)生、發(fā)展中的作用成為目前研究的熱點(diǎn)，有研究［1］認(rèn)為卵巢癌與細(xì)胞因子失調(diào)關(guān)系密切。卵巢癌患者高表達(dá)IL-6和IL-8，IL-6水平升高與卵巢癌的預(yù)后不良有關(guān)，而IL-6和IL-8水平的同時升高則與化療初敏感性差有關(guān)。IL-6體外可阻止順鉑誘導(dǎo)的卵巢癌細(xì)胞凋亡，但不能改變抗凋亡Bcl-2蛋白的表達(dá)［7］。IL-6和IL-8均是細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中的多效應(yīng)炎性介質(zhì)，對相關(guān)細(xì)胞的生長、分化或基因表達(dá)都有一定影響。IL-6和IL-8等細(xì)胞因子對腫瘤轉(zhuǎn)移及腫瘤血管新生有作用，在許多腫瘤組織都已證實(shí)IL-6和IL-8基因表達(dá)活躍，各種因子分泌增加［8］。腫瘤細(xì)胞在自身生長過程中可直接刺激細(xì)胞分泌IL-6和IL-8［9］，IL-6還可增加卵巢癌細(xì)胞的黏附性、趨化性和(或)化學(xué)促進(jìn)性以及總的侵襲力［10］。

Yamada等［11］發(fā)現(xiàn)IL-6水平的上升與疾病預(yù)后不良關(guān)系密切。腫瘤細(xì)胞能產(chǎn)生IL-8，刺激腫瘤新生血管生成，從而加速腫瘤的生長［12］。本文結(jié)果顯示，卵巢良性疾病組與對照組相比較lL-6和IL-8水平也明顯的增高;卵巢癌組較對照組以及卵巢良性疾病組lL-6和IL-8水平增高更明顯。卵巢癌血清IL-6、IL-8水平隨臨床分期而逐漸升高。復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移者與穩(wěn)定者相比血清IL-6、IL-8水平也有明顯的差異。Chan等［6］研究發(fā)現(xiàn)，多酚化合物可增加卵巢癌細(xì)胞CAOV-3對順鉑的敏感性，這種細(xì)胞產(chǎn)生高水平的IL-6，對順鉑的敏感性較差，多酚化合物可抑制CAOV-3細(xì)胞產(chǎn)生IL-6，提示順鉑與多酚化合物協(xié)同作用的可能機(jī)制是減少內(nèi)源性IL-6的產(chǎn)生。本文結(jié)果顯示，卵巢癌患者化療前IL-6和IL-8水平明顯高于化療后(P＜0.05)。總之IL-6和IL-8在卵巢癌中高表達(dá)，在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，同時還影響其對化療的敏感性。

［1］Penson RT，Kronish K，Duan Z，et al.Cytokines IL-1beta，IL-2，IL-6，IL-8，MCP-1，GM-CSF and TNFalpha in patients with epithelial ovarian cancer and their relationship to treatment with paclitaxel［J］.Int J Gynecol Cancer，2000，10(1):33 － 41.

［2］Toutirais O，Chartier P，Dubois D，et al.Constitutive expression of TGF-bêta1，interleukin-6 and interleukin-8 by tumor cells as a major component of immune escape in human ovarian carcinoma［J］.Eur Cytokine Netw，2003，14(4):246 －255.

［3］Wang Y，Yang J，Gao Y，et al.Regulatory effect of e2，IL-6 and IL-8 on the growth of epithelial ovarian cancer cells［J］.Cell Mol Immunol，2005，2(5):365 －372.

［4］王越，楊潔，高燕，等.雌激素與IL-6、IL-8在卵巢癌細(xì)胞中的調(diào)節(jié)作用［J］.中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志，2008，28(9):799－804.

［5］Yang J，Wang Y，Gao Y，et al.Reciprocal regulation of 17beta-estradiol，interleukin-6 and interleukin-8 during growth and progression of epithelial ovarian cancer［J］.Cytokine，2009，46(3):382－391.

［6］Chan MM，F(xiàn)ong D，Soprano KJ，et al.Inhibition of growth and sensitization to cisplatin-mediated killing of ovarian cancer cells by polyphenolic chemopreventive agents［J］.J Cell Physiol，2003，194(1):63－70.

［7］Ishioka S，van Haaften-Day C，Sagae S，et al.Interleukin-6(IL-6)does not change the expression of Bcl-2 protein in the prevention of cisplatin-induced apoptosis in ovarian cancer cell lines［J］.J Obstet Gynaecol Res，1999，25(1):23 －27.

［8］佟書娟，王寧萍，尹清云.胃癌患者血清 TNF-α、IL-6、IL-8和sIL-2R的檢測及意義 ［J］.寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2005，27(2):97－99.

［9］Ito R，Kitadai Y，Kyo E，et al.Interleukin 1 alpha acts as an autocrine growth stimulator for human gastric carcinoma cells［J］.Cancer Res，1993，53(17):4102 －4106.

［10］Obata NH，Tamakoshi K，Shibata K，et al.Effects of interleukin-6 on in vitro cell attachment，migration and invasion of human ovarian carcinoma［J］.Anticancer Res，1997，17(1A):337 －342.

［11］Yamada T，Hisanaga M，Nakajima Y，et al.Serum interleukin-6，interleukin-8，hepatocyte growth factor，and nitric oxide changes during thoracic surgery［J］.World J Surg，1998，22(8):783 －790.

［12］Smith DR，Polverini PJ，Kunkel SL，et，al.Inhibition of interleukin 8 attenuates angiogenesis in bronchogenic carcinoma［J］.J Exp Med，1994，179(5):1409 －1415.