楊利平 劉桂芳 劉雪凝

(長江師范學(xué)院，重慶，408100)

野牡丹屬(Melastoma)植物為野牡丹科(Melastomataceae)多年生常綠灌木或小灌木，集中分布在熱帶或亞熱帶，在我國有9種，主要產(chǎn)于華南和西南地區(qū)［1］。細葉野牡丹(Melastoma intermedium Dunn)莖半匍匐生長，植株低矮，莖葉緊密，花期較長［2］，不僅可作為高檔的地被材料，也是盆栽垂吊植物的優(yōu)良新種質(zhì)。我國野牡丹屬的大多數(shù)種類分布較廣，種群數(shù)量大，有些種類已經(jīng)被廣東省的一些城市引種應(yīng)用，其景觀地方特色明顯［3］。野牡丹屬植物的組培擴繁研究工作涵蓋了該屬的大部分種類［4－12］，為野牡丹的廣泛園林應(yīng)用作了必要的基礎(chǔ)工作。由于細葉野牡丹在自然界的種群數(shù)量少［13］，要作為園林植物利用，首先要解決其擴繁技術(shù)。目前，細葉野牡丹繁殖研究僅限于枝條扦插［9］，必要的組培快繁工作還未見開展。本研究以細葉野牡丹枝條為材料，對其組培快繁中的一些基本問題進行試驗分析，為細葉野牡丹的進一步規(guī)?；S育苗提供依據(jù)。

1 材料與方法

細葉野牡丹采集于廣東省韶關(guān)市的芙蓉山。取當(dāng)年生半木質(zhì)化枝條，剪除葉片后剪成10 cm長的莖段，置于燒杯中，軟刷沾洗潔精清洗莖表，再流水沖洗30 min，75%酒精浸泡20 s，無菌水沖洗2次，0.2%升汞消毒12 min，無菌水洗5次，吸干表面水分。將枝條切成1.5 cm單芽莖段為外植體，接種到初代誘導(dǎo)培養(yǎng)。待芽誘導(dǎo)成功后，將芽轉(zhuǎn)到繼代培養(yǎng)基中繼代增殖培養(yǎng);待芽的數(shù)量達到要求后，將芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中生根培養(yǎng)。分別統(tǒng)計起始萌動時間、誘導(dǎo)率、平均芽(枝)長、增殖倍數(shù)、芽生長狀況和生根率、根的生長狀況等。

培養(yǎng)條件以MS為基本培養(yǎng)基。誘導(dǎo)芽萌發(fā)及分化培養(yǎng)基為 MS+6－BA(0.5，1.0，1.5，2.0)mg·L－1+NAA(0.1，0.5，1.0)mg·L－1共 9 種培養(yǎng)基;芽的生長增殖培養(yǎng)基為 MS+6－BA(0.1，0.3，0.5，0.7，1.0)mg·L－1+NAA(0.01，0.05，0.1，0.15，0.2)mg·L－1共20種培養(yǎng)基;生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA(0.1，0.2，0.3，0.4，0.5)mg·L－1共 5 種培養(yǎng)基。所有培養(yǎng)基均含3%蔗糖和0.8%瓊脂，pH=5.6。培養(yǎng)溫度為(25±1)℃，光強為3 000 lx，光照時間14 h·d－1。

生根后移栽到泥瓦盆中栽培，基質(zhì)為消毒的V(草炭)∶V(珍珠巖)∶V(腐葉土)=1∶1∶1混合基質(zhì)。日常管理至開花。

2 結(jié)果與分析

2.1 初代誘導(dǎo)培養(yǎng)

外植體在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)12 d后，有些腋芽開始萌動，40 d后節(jié)間部位可分化出1～3個不定芽，同時，有少量莖段基部切口部位形成黃綠色愈傷組織(圖1－A、B)。所選用的培養(yǎng)基對芽誘導(dǎo)率一般在50%以上，最高可達到80%。對誘導(dǎo)率和芽的生長狀況而言，培養(yǎng)基 MS+6－BA1.0 mg·L－1+NAA0.5 mg·L－1效果明顯好于其他的，培養(yǎng)基MS+6－BA0.5 mg·L－1+NAA0.1 mg·L－1的誘導(dǎo)效果最差(表1)。由于細葉野牡丹莖段生有細毛，易造成離體繁殖的污染。本試驗的外植體清洗和消毒方法可使初代培養(yǎng)的污染率控制在15%。

圖1 細葉野牡丹組培快繁

表1 激素質(zhì)量濃度配比對細葉野牡丹誘導(dǎo)的影響

2.2 繼代增殖培養(yǎng)

嫩芽在繼代培養(yǎng)基上培養(yǎng)10 d左右，有約17%長出黃綠色的愈傷組織，25 d左右在愈傷組織的表面直接分化出叢芽，其余近83%直接在接種芽的基部形成叢生芽。叢芽分割成單芽在培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)快速增殖，在大多數(shù)芽的基部重新形成叢生芽，只有少量經(jīng)過愈傷組織途徑再分化出大量的叢芽(圖1－C)。待不定芽長到6～8 cm時，將其葉片去除，根據(jù)節(jié)間長短切割成1 cm左右的單芽或2芽莖段，不斷在增殖培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)，每30 d繼代1次，6個月時統(tǒng)計，平均每月可增殖3.2倍。在所有培養(yǎng)基中MS附加0.5 6－BA mg·L－1與低質(zhì)量濃度的NAA配比的芽增殖效果較好，其中 MS+6－BA0.5 mg·L－1+NAA0.05 mg·L－1和 MS+6－BA0.5 mg·L－1+NAA0.1 mg·L－1的平均每月芽增殖倍數(shù)為 3.6。該激素配比下生長的芽顏色正常，但芽狀體態(tài)顯得不如 MS 附加0.7 6－BA mg·L－1的粗壯(表2)。隨著繼代培養(yǎng)時間延長至45～55 d不轉(zhuǎn)瓶，在叢生芽的基部可直接長出根系，但根系較短，且細弱。

2.3 生根培養(yǎng)

將芽切成4～5 cm長，轉(zhuǎn)入到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，1周后可見到基部根的形成，1個月后生根率100%。其中，主根1～3條，而須根則較豐富(圖1－D)。低質(zhì)量濃度的NAA對誘導(dǎo)根系生長效果最好，根長、粗壯且側(cè)根豐富(表3)。

2.4 出瓶培養(yǎng)

溫室煉苗3 d，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，用自來水沖洗干凈后，將幼苗移栽到滅菌的V(草炭)∶V(珍珠巖)∶V(腐葉土)=1∶1∶1的栽培基質(zhì)中，并在溫室中生長，注意遮陰，3個月后統(tǒng)計成活率，87%以上的移栽植株能夠成活(圖1－E)。第二年5—6月份開出紫紅色花朵，單朵花開放時間為1 d，從花蕾現(xiàn)色到花朵脫落的可觀賞期約為7 d(圖1－F)。

表2 激素質(zhì)量濃度配比對細葉野牡丹繼代增殖的影響

表3 激素質(zhì)量濃度配比對細葉野牡丹生根的影響

3 結(jié)論與討論

本研究在總結(jié)前人工作基礎(chǔ)上，設(shè)計出以6－BA和NAA為生長調(diào)節(jié)劑的誘導(dǎo)培養(yǎng)基和繼代培養(yǎng)基激素配比。在MS培養(yǎng)基上，細葉野牡丹莖段腋芽可以直接誘導(dǎo)萌發(fā)，其中 MS+6－BA1.0 mg·L－1+NAA0.5 mg·L－1的誘導(dǎo)率達到80%。經(jīng)過MS+6－BA0.5 mg·L－1+NAA0.05 mg·L－1和 MS+6－BA0.5 mg·L－1+NAA0.1 mg·L－1繼代培養(yǎng)，平均每月芽增殖倍數(shù)最高。在生根培養(yǎng)1個月后，全部生根，其中1/2MS+NAA0.1 mg·L－1根系生長狀態(tài)最好。細葉野牡丹組培生根中發(fā)現(xiàn)了有趣的現(xiàn)象，幾乎所有細根呈現(xiàn)等距均勻排列高密度區(qū)，根尖橙紅色(圖1－D)。這一現(xiàn)象在野牡丹屬組培研究中未見報道，可能與該種細根中內(nèi)含物種類與分布有關(guān)。

在一定時間內(nèi)擴繁出健康正常芽的數(shù)量是衡量組培快繁體系的重要指標(biāo)。繼代培養(yǎng)半年后統(tǒng)計，細葉野牡丹平均每月芽增殖可達到3.2倍，略高于印度野牡丹(Melastoma malabathricum)［8］、紫毛野牡丹(Melastoma penicillatum)［11］和展毛野牡丹(Melastoma normale)［12］?？梢姡毴~野牡丹的高效組培體系已經(jīng)基本成功建立。

細葉野牡丹生根率與展毛野牡丹一樣，均可達100%，稍高于伍成厚等［8］、彭東輝等［11］對印度野牡丹和紫毛野牡丹的研究結(jié)果。組培苗產(chǎn)業(yè)化的主要指標(biāo)之一是移栽成活率，本研究的細葉野牡丹生根率為87%，與印度野牡丹基本一致［8］，高于紫毛野牡丹［11］。

盆栽垂吊花卉是室內(nèi)盆花中的重要組成部分，但其中的木本植物還不多見。細葉野牡丹枝條輕盈、花朵直徑較大、花色鮮艷、異型雄蕊奇特，是開發(fā)垂吊花卉的新種質(zhì)。同時，細葉野牡丹半匍匐生長的特點，也可作為優(yōu)良的地被植物。通?；ɑ軘U繁通過有性(種子繁殖)或無性方式來實現(xiàn)。自然環(huán)境中細葉野牡丹個體數(shù)量少，不易得到，其種子萌發(fā)率也不高［13］，同時，種子萌發(fā)到植株開花至少需要將近4 a的時間［5］。雖然扦插繁殖已經(jīng)獲得成功，但繁殖系數(shù)較低［9］。相比之下，細葉野牡丹組培有快繁容易、繁殖系數(shù)高及生育期縮短的明顯優(yōu)勢，因此，組培快繁為細葉野牡丹的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供可行的基礎(chǔ)。

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