張麗琴 陳興無(wú) 張 偉 許秋琴

(皖南醫(yī)學(xué)院附屬弋磯山醫(yī)院呼吸內(nèi)科，安徽 蕪湖 241000)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種以氣道持續(xù)性炎癥和氣流漸進(jìn)性受限為特征的疾病，中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和CD8陽(yáng)性淋巴細(xì)胞在其發(fā)病過(guò)程中具有重要作用〔1〕，特別是活化的巨噬細(xì)胞募集并激活其他炎性細(xì)胞如中性粒細(xì)胞，放大炎癥反應(yīng)，參與COPD氣道炎癥的進(jìn)展。目前的治療不能延緩疾病的自然進(jìn)程，不能降低死亡率，急需發(fā)展新的治療藥物。他汀類(lèi)藥物廣泛用于治療與預(yù)防高脂血癥和動(dòng)脈粥樣硬化，藥物流行病學(xué)研究顯示該類(lèi)藥物也能降低COPD急性加重患者住院和死亡率〔2，3〕，可能的機(jī)制包括影響細(xì)胞黏附分子、炎癥介質(zhì)釋放、抗氧化作用和增加凋亡細(xì)胞清除。本研究擬探討辛伐他汀對(duì)COPD患者氣道炎癥的修飾效應(yīng)。

1 資料與方法

1.1 對(duì)象 選擇2009年10月至2010年12月在我院呼吸科門(mén)診就診的穩(wěn)定期COPD患者32例，男19例，女13例，年齡44～80〔平均(63.5±17.4)〕歲，病程(22.3±5.74)年，吸煙史(39.7±35.4)年包，未使用吸入性藥物治療，肺功能第1秒用力呼氣容積(FEV1)%為(50.98±16.3)%，F(xiàn)EV1/用力肺活量(FVC)為54.26±10.3。給予辛伐他汀(魯南貝特制藥有限公司)，40 mg/d，口服，治療12 w。COPD診斷符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)COPD學(xué)組制定的COPD診治指南(2007年修訂版)〔4〕。所有患者治療前4 w無(wú)氣道感染，并對(duì)本試驗(yàn)知情，自愿參加。

1.2 方法

1.2.1 誘導(dǎo)痰(IS)收集 試驗(yàn)前15 min吸入沙丁胺醇200μg，超聲霧化吸入3%高滲鹽水，用力咳痰至已消毒的培養(yǎng)皿;若患者無(wú)痰或痰量不足則換用4%高滲鹽水重復(fù)霧化直到收集到足夠的痰標(biāo)本，立即送實(shí)驗(yàn)室處理。

1.2.2 痰涂片染色和分類(lèi) 加磷酸鹽緩沖液(PBS)5 ml至沉淀細(xì)胞、1 000 r/min離心5 min、重復(fù)洗滌細(xì)胞2次、PBS重懸細(xì)胞、臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞活性、光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞分類(lèi)(計(jì)數(shù)400個(gè)非鱗狀細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞分類(lèi))。

1.2.3 免疫組化法檢測(cè)巨噬細(xì)胞CD163表達(dá) 制作細(xì)胞涂片，4%多聚甲醛固定15 min，PBS沖洗3×5 min，以CD163抗體孵育，加生物素標(biāo)記的第二抗體，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色、蘇木素伊紅(HE)復(fù)染，光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)巨噬細(xì)胞區(qū)域陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。結(jié)果判定:棕褐色或棕黃色著色的細(xì)胞視為陽(yáng)性細(xì)胞。采用半定量積分法，在高倍鏡(×400)下根據(jù)每張切片單位面積陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及染色強(qiáng)度積分，著色細(xì)胞比例1/3以下為1分、1/3～2/3為2分、2/3以上為3分，著色程度分為無(wú)著色0分、棕色1分、棕褐色2分，根據(jù)兩者乘積劃分成陰性(≤2)和陽(yáng)性(＞2)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS10.0軟件進(jìn)行分析;數(shù)據(jù)資料以x±s表示，組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)。

2 結(jié)果

2.1 治療前后患者IS細(xì)胞數(shù)和比例 治療后IS細(xì)胞總數(shù)無(wú)明顯降低(P＞0.05)、中性粒細(xì)胞比例顯著降低(P＜0.05)、巨噬細(xì)胞比例明顯升高(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 治療前后患者IS巨噬細(xì)胞CD163表達(dá)情況 COPD患者CD163+巨噬細(xì)胞比例治療后較治療前明顯上升(65.63%vs 21.88%，P＜0.05)，表達(dá)強(qiáng)度增強(qiáng)。見(jiàn)圖1。

表1 治療前后患者IS細(xì)胞數(shù)和比例(x ± s，n=32)

圖1 治療前后IS中巨噬細(xì)胞CD163表達(dá)分析(×400)

3 討論

COPD氣道炎癥以中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞為主，其中IS中性粒細(xì)胞的數(shù)量與吸煙者氣道阻塞的嚴(yán)重度相關(guān);巨噬細(xì)胞是COPD氣道炎癥反應(yīng)和組織破壞的核心炎癥細(xì)胞，正常情況下具有肺保護(hù)作用，清除所有吸進(jìn)肺的殘骸顆粒;而COPD患者巨噬細(xì)胞功能異常，介導(dǎo)了COPD的全部病理生理特征，對(duì)肺部炎癥反應(yīng)、組織破壞之啟動(dòng)、消退過(guò)程產(chǎn)生重要影響〔5〕。COPD嚴(yán)重程度和FEV1下降與支氣管上皮下浸潤(rùn)的巨噬細(xì)胞數(shù)量相關(guān)。

他汀類(lèi)藥物除調(diào)脂作用還具有抗炎、抗氧化及調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的作用;此外，還有顯著的免疫調(diào)節(jié)作用。既往研究發(fā)現(xiàn)他汀類(lèi)藥物可有效降低COPD患者死亡率和住院率，穩(wěn)定肺功能。本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)，穩(wěn)定期COPD患者辛伐他汀治療后IS中性粒細(xì)胞百分比明顯降低，而巨噬細(xì)胞百分比顯著提高，提示辛伐他汀可減輕氣道中性粒細(xì)胞為主的炎癥，保護(hù)肺功能。辛伐他汀的上述效應(yīng)可能與預(yù)防COPD發(fā)作有關(guān)。

巨噬細(xì)胞凋亡識(shí)別受體CD163是一種細(xì)胞表面糖蛋白受體，屬于富含半胱氨酸的清道夫受體，具有單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞表達(dá)特異性〔6〕，可作為巨噬細(xì)胞活化的一種特定標(biāo)志?？扇苄訡D163是監(jiān)測(cè)炎癥條件下巨噬細(xì)胞活化的有價(jià)值的診斷參數(shù)。CD163調(diào)節(jié)其下游分子血紅素氧合酶-1(HO-1)表達(dá)發(fā)揮抗炎、抗氧化和心血管保護(hù)作用;CD163也直接激活細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，誘導(dǎo)一些細(xì)胞因子分泌，參與炎癥反應(yīng)調(diào)控。CD163介導(dǎo)的細(xì)菌識(shí)別和信號(hào)產(chǎn)生細(xì)胞因子和其他炎癥介質(zhì)，促進(jìn)局部炎癥反應(yīng)的觸發(fā)，導(dǎo)致感染的消除〔7〕。在炎癥消退階段巨噬細(xì)胞表達(dá)高水平CD163〔8〕。研究報(bào)道COPD肺泡巨噬細(xì)胞對(duì)凋亡細(xì)胞的吞噬功能明顯減退〔9〕。本文發(fā)現(xiàn)COPD患者治療前IS標(biāo)本CD163陽(yáng)性巨噬細(xì)胞比例低，表明宿主巨噬細(xì)胞防御氣道感染能力受損，吞噬能力下降;辛伐他汀治療后IS巨噬細(xì)胞CD163表達(dá)比例增加、表達(dá)強(qiáng)度增強(qiáng)，與既往研究〔10〕類(lèi)似，其機(jī)制可能是辛伐他汀阻止巨噬細(xì)胞異戊烯化和RhoA的膜定位，增加過(guò)氧化物酶激活受體增殖水平，提高巨噬細(xì)胞CD163的表達(dá)。辛伐他汀對(duì)COPD氣道巨噬細(xì)胞吞噬的調(diào)節(jié)功能，將減輕或延緩COPD氣道慢性炎癥的進(jìn)行性發(fā)展。

總之，本研究將為進(jìn)一步拓展包括辛伐他汀在內(nèi)的他汀類(lèi)藥物應(yīng)用于COPD奠定基礎(chǔ)。本研究的局限性在于病例數(shù)相對(duì)較少、觀(guān)察指標(biāo)少、時(shí)間短、研究?jī)H限于穩(wěn)定期病人，因此，上述結(jié)果需審慎對(duì)待，有必要采取較長(zhǎng)觀(guān)察時(shí)間的前瞻性研究進(jìn)一步評(píng)估辛伐他汀的臨床和生化作用。

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