曲義坤 徐 劍 楊 婷 劉偉新

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院普外二科，黑龍江 佳木斯 154002)

胃癌是我國(guó)死亡率最高的惡性腫瘤，臨床上一般采取手術(shù)切除或者放化療的方法進(jìn)行治療，但是若發(fā)生浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移常造成手術(shù)切除困難、術(shù)后復(fù)發(fā)及化療失敗。本文探討基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)及Ki-67在胃癌浸潤(rùn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移過程中的作用，尋找胃癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)指標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 隨機(jī)選取佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院2009年12月至2011年12月普外科切除的，且資料完整的胃癌病例80例進(jìn)行研究，病理類型均經(jīng)病理科醫(yī)師診斷證實(shí)。有完整的臨床資料，男61例，女19例。根據(jù)組織學(xué)分級(jí)分為高、中分化組61例，低分化組19例;根據(jù)浸潤(rùn)深度分為未浸潤(rùn)漿膜層組38例，浸潤(rùn)漿膜層組42例;根據(jù)有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分為無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組56例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組24例。同時(shí)取癌旁5 cm正常組織作為對(duì)照組。手術(shù)標(biāo)本經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切取5μm組織片，進(jìn)行蘇木素-伊紅(HE)和免疫組織化學(xué)染色，所有患者術(shù)前均未接受化療和放療。

1.2 試劑和染色方法 鼠抗人MMP-9、Ki-67單克隆抗體及免疫組化SABC試劑盒購(gòu)于武漢博士德生物技術(shù)公司。嚴(yán)格按試劑盒說明操作。顯微鏡下觀察，陽(yáng)性顯色為棕黃色。

1.3 結(jié)果判定 MMP-9位于細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞膜呈棕黃色;Ki-67表達(dá)在細(xì)胞核內(nèi)，出現(xiàn)棕黃色顆粒。陽(yáng)性細(xì)胞＜10%為陰性(-)，陽(yáng)性細(xì)胞10% ～25%為弱陽(yáng)性(+)，陽(yáng)性細(xì)胞26% ～50%為中陽(yáng)性(?)，陽(yáng)性細(xì)胞＞50%為強(qiáng)陽(yáng)性(?)。為簡(jiǎn)化計(jì)算，陽(yáng)性表達(dá)包括+～?。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS16.0軟件行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織中MMP-9的表達(dá) MMP-9在正常胃黏膜中很少表達(dá)(5例)，在胃癌組織中的MMP-9陽(yáng)性細(xì)胞很多(55例，68.8%)，與對(duì)照組相比，差異具有顯著性(χ2=66.67，P=0.000)。陽(yáng)性物質(zhì)主要在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜中達(dá)，整體呈散在、片狀或灶狀分布。見圖1。

2.2 Ki-67在胃癌組織中的表達(dá) Ki-67蛋白主要表達(dá)于胃癌細(xì)胞核(61例，76.3%)，為棕褐色，呈巢團(tuán)狀或灶狀分布，在正常胃黏膜組織中表達(dá)很少(3例)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=87.60，P=0.000)。見圖1。

2.3 MMP-9和Ki-67表達(dá)與胃癌病理特征的關(guān)系 80例胃癌組織中，MMP-9在未浸潤(rùn)漿膜層組和浸潤(rùn)漿膜層組的表達(dá)率分別為42.1%和92.9%;高、中分化胃癌和低分化胃癌中陽(yáng)性表達(dá)率分別為60.7%和94.7%;無淋巴轉(zhuǎn)移組和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性表達(dá)率分別為41.6%和80.4% ，他們之間的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。Ki-67在未浸潤(rùn)漿膜層組和浸潤(rùn)漿膜層組的表達(dá)率分別為57.9%和92.9%;高、中分化胃癌和低分化胃癌中陽(yáng)性表達(dá)率分別為68.9%和100%;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無淋巴轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性表達(dá)率分別為85.7%和54.2% ，其差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

圖1 MMP-9、Ki-67在胃癌組織中的表達(dá)(SABC，×200)

3 討論

大量研究表明，腫瘤從開始形成到浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，經(jīng)歷三個(gè)重要階段:細(xì)胞粘連、局部蛋白酶解及細(xì)胞動(dòng)力增加和遷移〔1〕。MMP-9是一種蛋白水解酶，屬于MMP家族膠原酶B，作用底物包括基底膜重要組成成分Ⅳ膠原，主要功能是降解破壞細(xì)胞外基質(zhì)成分〔1〕。本研究顯示，隨著腫瘤惡性程度增加，MMP-9表達(dá)量明顯增加。因?yàn)樵谇忠u和轉(zhuǎn)移過程中，腫瘤細(xì)胞依靠自身分泌或誘導(dǎo)其他細(xì)胞分泌的MMP-9，使基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)被降解破壞，從而為腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移開辟了道路，導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移〔2，3〕，分化程度較低的腫瘤細(xì)胞分泌MMP-9的能力較強(qiáng)，從而能夠更加有效地破壞細(xì)胞外基質(zhì)，為腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移提供條件。

Ki-67抗原是與增殖細(xì)胞相關(guān)的核抗原，分布于核內(nèi)，其表達(dá)量隨細(xì)胞周期的不同而發(fā)生改變，在G1中期到后期出現(xiàn)表達(dá)，S期和G2期逐漸增加，有絲分裂期達(dá)到高峰。它在細(xì)胞周期中起“計(jì)時(shí)器”分子的作用，或在細(xì)胞增殖的調(diào)控中發(fā)揮著重要的作用〔4，5〕。在正常人體組織，Ki-67蛋白表達(dá)可發(fā)生在甲狀腺皮質(zhì)細(xì)胞、胸腺皮質(zhì)細(xì)胞及未分化細(xì)胞，而其他組織的細(xì)胞幾乎無表達(dá)〔5〕。Tzanakis等〔6〕研究表明，Ki-67 表達(dá)可反映腫瘤細(xì)胞的增殖活性，與惡性腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后高度相關(guān)，隨惡性腫瘤臨床分期增加和分化程度的降低，Ki-67表達(dá)強(qiáng)度增加;胃癌分化程度越低，Ki-67表達(dá)越強(qiáng)。本研究結(jié)果也顯示，隨著腫瘤惡性程度的增加，Ki-67表達(dá)也會(huì)增多。Ki-67表達(dá)率隨著胃黏膜不典型增生程度的加重呈上升趨勢(shì)，由于Ki-67抗體標(biāo)記了增生細(xì)胞核，因此它可以反映腫瘤的增殖程度。惡性腫瘤組織增殖迅速，Ki-67表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞增多，并且隨臨床分期增高，分化程度降低，腫瘤細(xì)胞增殖更迅速，Ki-67的表達(dá)相應(yīng)增強(qiáng);Ki-67表達(dá)與胃不典型增生程度、胃癌不同分化程度及胃癌組織學(xué)分型密切相關(guān)。檢測(cè)Ki-67的表達(dá)水平，有助于胃癌惡性程度的判斷〔7〕，對(duì)指導(dǎo)臨床治療有一定意義。

1 Lukaszewicz-Zajac M，Mroczko B，Szmitkowski M.The significance of metalloproteinases and their inhibitors in gastric cancer〔J〕.Postepy Hig Med Dosw(Online)，2009;63:258-65.

2 Kim JH，Pyun JA，Lee KJ，et al.Study on association between single nucleotide polymorphisms of MMP7，MMP8，MMP9 genes and development of gastric cancer and lymph node metastasis〔J〕.Korean J Gastroenterol，2011;58(5):245-51.

3 王 俊，袁志誠(chéng)，施 洋.p53，Ki67，VEGF和MMP-9在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及意義〔J〕.江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2007;17(3):228-31.

4 Yerushalmi R，Woods R，Ravdin PM，et al.Ki67 in breast cancer:prognostic and predictive potential〔J〕.Lancet Oncol，2010;11(2):174-83.

5 Heatley MK.Ki67 protein:the immaculate deception〔J〕.Histopathology，2002;40(5):483.

6 Tzanakis NE，Peros G，Karakitsos P，et al.Prognostic significance of p53 and Ki67 proteins expression in Greek gastric cancer patients〔J〕.Acta Chir Belg，2009;109(5):606-11.

7 Antonini C，F(xiàn)orgiarini O，Chiara A，et al.Hepatoid adenocarcinoma of the stomach.Case report and review of the literature〔J〕.Pathologica，1997;89(3):310-6.