劉聯(lián)斌，薛 靈，周茂華，郭 萍，黃 剛，王小麗，吳 偉

(贛州市腫瘤醫(yī)院 1、檢驗科 2、放療科，江西 贛州 341000)

惡性腫瘤患者免疫功能是削弱的，T 淋巴細胞亞群是一項評價人體細胞免疫功能的重要指標，放療可加劇由癌癥誘發(fā)的低免疫功能，而細胞免疫功能與患者的預后密切相關(guān)[1-3]。放療是鼻咽癌的主要治療手段，放療通過射線殺滅腫瘤細胞使患者得到康復，但又有可能抑制機體的免疫功能，造成不能完全被消滅的腫瘤細胞重新生長，導致腫瘤的復發(fā)和/或轉(zhuǎn)移。本文通過流式細胞儀檢測鼻咽癌患者放療前后T 淋巴細胞亞群，以了解放療對鼻咽癌患者免疫功能狀況的影響。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 2010年6月至2011年12月來本院就診的134例初治鼻咽癌患者，均經(jīng)病理確診為鼻咽低分化鱗癌，其中男98例，女36例。年齡24～67歲，中位年齡48歲。放療前及放療結(jié)束后即刻收集外周血標本，做T細胞亞群分析，外周血T細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+采用流式細胞術(shù)檢測。

1.2 儀器和試劑 美國BD 公司FACSCalibur 流式細胞儀，用標準熒光微球校正光電倍增管(PMT)電壓,建立熒光補償,檢查儀器靈敏度,使流式細胞儀處于最佳工作狀態(tài)；美國BD 公司配套四色試劑MultiTESTTMIMK Kit，貨號：340503。

1.3 樣本制備與檢測

1.3.1 所有樣品按照要求采集外周靜脈血2 ml,EDTA-K2抗凝,均在采樣48 h 內(nèi)完成檢測。

1.3.2 在檢測管中準確加入20μl MultiTEST 四色試劑和50μl全血,充分混勻后置室溫陰暗處15min。加入450μl FACS 溶血劑(1x),充分混勻后室溫陰暗處15 min。

1.3.3 標本制備后立即上機運行MultiTEST 程序檢測。

1.3.4 每次檢測均使用質(zhì)控品同時檢測,質(zhì)控品的檢測值均在其靶值±2s 范圍內(nèi)各樣品檢測值有效。

1.4 放射治療 采用西門子直線加速器6MV的X線。采用體位不變的等中心照射，熱塑型面罩固定，低熔鉛個人專擋，屏蔽非照射區(qū)域。常規(guī)分割連續(xù)放療，每次2Gy，1次/d，每周5次；鼻咽靶區(qū)根治劑量為65～75Gy，頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶根治劑量為60～70Gy，頸淋巴結(jié)預防性照射劑量為45～50Gy。

1.5 統(tǒng)計分析 采用SPSS12.0軟件包處理有關(guān)數(shù)據(jù)，采用單樣本t 檢驗和配對t 檢驗，P≤0.05 有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

鼻咽癌患者放療前后外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比較有明顯變化，134例患者放療后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的均值比放療前明顯降低(P＜0.01)，CD8+明顯升高。經(jīng)統(tǒng)計學分析各組差異顯著，見下表。

3 討論

表1 放療前后T細胞亞群分析()

T細胞亞群在腫瘤免疫中起重要作用，T細胞各亞群間數(shù)量比例適當，才能發(fā)揮正常的抗腫瘤作用。T細胞亞群包括總T細胞數(shù)(CD3+)、輔助T細胞數(shù)(CD4+)、抑制T細胞數(shù)(CD8+)以及后兩者的比值(CD4+/CD8+)，此四項指標中，CD3+的檢測意義已逐漸減小，CD4+和CD8+的結(jié)果相互影響，功能相互牽制，單獨分析有一定的局限性，而CD4+/ CD8+的值在判斷結(jié)果時相對穩(wěn)定，檢測更具有實用價值。

CD4+/CD8+比值低于正常時被認為是免疫調(diào)節(jié)功能紊亂，易發(fā)生惡性腫瘤。CD4+T細胞可識別腫瘤細胞分泌的可溶性抗原，參與B細胞、巨噬細胞、NK細胞的激活，進而起到抗腫瘤作用；CD4+T淋巴細胞還可釋放IL-2、IFN-γ、IL-4等細胞因子以激活NK細胞、促進B細胞活化和抗體形成以達到抗腫瘤效應。而CD8+T 淋巴細胞是抑制性T細胞，其功能主要是抑制免疫應答。機體維持正常的免疫功能狀態(tài)，有賴于各種免疫細胞之間的相互制約，以產(chǎn)生適度的免疫應答，CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平在腫瘤患者中常常出現(xiàn)異常[4,5]。

許多外周血T細胞亞群檢測的研究結(jié)果表明，多種惡性腫瘤患者有T 淋巴細胞亞群狀態(tài)異常和比例失調(diào)，腫瘤患者外周血CD3+細胞、CD4+細胞、CD4+/CD8+比值均低于正常人，而CD8+則明顯高于正常人。不同腫瘤組之間各項指標無顯著性差異，說明腫瘤患者免疫功能較正常人明顯低下，細胞免疫受到抑制，降低了清除腫瘤細胞的能力，其機制可能與腫瘤在發(fā)生、發(fā)展過程中分泌大量的免疫抑制因子有關(guān)[6,7]。

放療后由于T細胞亞群數(shù)量及比例均有改變，對患者產(chǎn)生強大而持久的抑制作用，降低其免疫功能。本研究結(jié)果示，134例患者放療后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的均值比放療前明顯降低 (P＜0.01)，CD8+明顯升高。統(tǒng)計學檢測有極顯著性差異，表明放療在使鼻咽癌病灶消退的同時也損傷機體的免疫功能，致使CD4+/CD8+比例降低或者倒置、細胞免疫功能抑制，減弱宿主免疫細胞抗腫瘤的能力。隨著時間的推移，機體的免疫功能是否仍處于抑制狀態(tài)、放療后T細胞亞群變化目前仍在隨訪中，以觀察其與生存率的關(guān)系，從而得到鼻咽癌預后的指標。

鼻咽癌患者免疫力低下，在放射治療中，射線將使T細胞亞群發(fā)生變化，對細胞免疫功能和T細胞亞群產(chǎn)生影響，對淋巴細胞增殖功能有抑制作用；在放射治療后T細胞亞群檢測CD4+/CD8+的比值比在治療前顯著下降，因此外周血T細胞亞群檢測對預測放射治療效果、預后、轉(zhuǎn)移等有重要價值。在放射治療時給以免疫增強劑治療將有助于提高療效，尤其是中藥在放射治療中具有增敏和固護機體正氣，保護機體免疫功能的作用，同時能刺激骨髓造血功能，保護和促進正常組織的修復，鞏固療效[8]。

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