鄭光雅，馬逾英，翟萌，穆向榮，金麗鑫

金銀花為常用中藥，具有清熱解毒、疏散風(fēng)熱等功效，廣泛應(yīng)用已有悠久歷史，為治療各種熱病、風(fēng)病、溫病的首選藥物。金銀花除供藥用外，還廣泛應(yīng)用于食品、保健品、護膚品、日用化工等。川產(chǎn)金銀花主流品種為細氈毛忍冬Lonicera similes Hemsl，該種資源豐富，使用歷史悠久。

細氈毛忍冬的主要成分除有機酸外，還含黃酮類、皂苷類、環(huán)烯醚萜及揮發(fā)油等。其中黃酮類化合物是一類生物活性很強的化合物，具有抗衰老、增強機體免疫力、抗癌防癌的功效[1]，在醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。目前對黃酮類化合物含量測定方法的研究甚多，研究表明目前總黃酮含量測定以分光光度法為主，此方法在金銀花[2]、枸杞[3]、鳳仙花[4]、南紅豆杉[5]、甘草[6]、黃芪[7]等眾多中藥的總黃酮含量測定中得到了廣泛應(yīng)用。

本文以蘆丁為對照品，采用紫外-可見分光光度法在波長510 nm處測定細氈毛忍冬中的總黃酮含量，對細氈毛忍冬的化學(xué)成分及其含量有一個系統(tǒng)、全面的了解，為深入研究并綜合開發(fā)川產(chǎn)金銀花的主流品種細氈毛忍冬的藥用價值和經(jīng)濟價值提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 藥材

實驗所用細氈毛忍冬藥材采購于四川省南江縣，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)馬逾英教授鑒定，為忍冬科植物細氈毛忍冬Lonicera similis Hemsl。

1.2 試劑

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（由中國藥品生物制品檢驗所提供，批號：100080-200707）；無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉均由成都市科龍化工試劑廠提供；蒸餾水（自制）。

1.3 儀器設(shè)備

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-5203（上海亞榮生化儀器廠）；循環(huán)水式多用真空泵SHB-Ⅲ（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；電子天平TD6001（天津天與儀器廠）；紫外-可見分光光度計UV1100（上海天美科技有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

細氈毛忍冬干燥花蕾4.75 g，采用文獻方法[8～9]進行提取，即用90%、80%、70%的乙醇回流提取，物料比為1∶8，過濾，減壓回收乙醇，得浸膏0.95 g，（即1 g浸膏相當(dāng)于5 g生藥量）。精密吸取浸膏0.5 g，置50 mL容量瓶中，加75%乙醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加75%乙醇至刻度，搖勻。精密量取1.0 mL，置50 mL容量瓶中，加75%乙醇至刻度，搖勻，即得（濃度為0.001g生藥 mL-1）。

2.2 對照品溶液的制備

取蘆丁對照品約25 mg，置50 mL容量瓶中，加75%乙醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加75%乙醇至刻度，搖勻。精密量取20 mL，置50 mL容量瓶中，加75%乙醇至刻度，搖勻，即得（濃度為0.2 mg mL-1）。

2.3 波長的選定

精密吸取蘆丁對照品溶液和供試品溶液適量，以亞硝酸鈉-硝酸鋁顯色，空白試劑為對照，于200～800 nm波長范圍內(nèi)掃描。結(jié)果表明，對照品溶液在510.5 nm處有最大吸收，供試品溶液在509.3 nm處有最大吸收，如圖1所示。

由于供試品中黃酮種類多，造成最大吸收與對照品有微小的差異，考慮到以對照品來計含量，故選擇510nm為測定波長。

2.4 線性關(guān)系的考察

圖1 蘆丁對照品溶液和供試品溶液UV-VIS掃描圖Fig 1 UV-VIS scans of rutin standard solution and sample solution

精密量取對照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL，分別置25 mL容量瓶中，加5%亞硝酸鈉溶液1.0 mL，混勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1.0 mL，搖勻，放置6 min，加10%氫氧化鈉溶液1.0 mL，再加水定容至刻度，搖勻，放置15 min，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見分光光度法（《中國藥典》2010年版一部附錄VA），于510 nm波長處測定吸光度。以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，濃度C（μg mL-1）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

求得回歸方程：A=0.0137C+0.0008，r=0.9999，n=6。測定結(jié)果見表1、圖2。結(jié)果表明，蘆丁對照品溶液在8.0179～48.1074 μg mL-1濃度范圍內(nèi)，吸光度與濃度呈良好線性關(guān)系。

圖2 蘆丁對照品溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig 2 The standard curve of rutin standard solution

表1 蘆丁對照品標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制結(jié)果Table 1 Results of the standard curve of rutin standard solution

2.5 精密度試驗

精密量取對照品溶液0.2 mL，置于10 mL容量瓶中，用75%乙醇定容，于510 nm處測定其吸光度，重復(fù)測定5次，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差值(RSD)。

測得細氈毛忍冬總黃酮含量的RSD值為0.31%，表明儀器的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

精密稱取4.7508 g細氈毛忍冬，按“2.1”方法制成供試液，于510 nm處測其吸光度，每隔30 min測1次，連續(xù)測定6次計算RSD值。

測得細氈毛忍冬總黃酮含量RSD值為0.32%，表明試驗在3小時內(nèi)穩(wěn)定，滿足測定要求。

2.7 重復(fù)性試驗

稱取同一批細氈毛忍冬樣品5份，按“2.1”方法制成供試液，于510 nm處測定吸光度，計算樣品含量及RSD值。

結(jié)果表明，5次測得的平均含量為3.38% ，RSD值為0.66% ，說明該方法的重復(fù)性良好。

2.8 樣品含量測定

表2 樣品中總黃酮含量測定結(jié)果Table 2 Results of determination of total fl avonoids in samples

精密稱取4.7502 g細氈毛忍冬，按“2.1”方法制備樣品供試液，以75%乙醇作為空白對照，于510 nm處測定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中總黃酮的含量。

結(jié)果見表2，計算得樣品中總黃酮含量為3.38%。

3 結(jié)論與討論

蘆丁是細氈毛忍冬中的主要黃酮類成分，以蘆丁為對照品測定細氈毛忍冬中總黃酮的含量，結(jié)果較可靠。

該研究在對細氈毛忍冬中總黃酮含量進行測定時，分別嘗試了用濃HC1-Mg粉法和NaNO2-A1(NO3)3-NaOH法進行測定，前者因存在色素類成分的干擾，不能用于細氈毛忍冬總黃酮的含量測定；后者操作簡單，準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好，對儀器要求不高，可作為細氈毛忍冬中總黃酮含量的檢測方法。除此以外，該研究對顯色劑的用量和顯色時間進行了考察，結(jié)果表明：室溫下放置6 min樣品液，吸光度基本穩(wěn)定；加入10%NaOH溶液1 mL顯色，吸光度值較為適中。

[1] 張彬,李彩俠,吳亞卿.黃酮類化合物的研究進展[J].食品與藥品,2005,2l(5):70.

[2] 宋琳琳,冉軍艦.金銀花中總黃酮提取條件優(yōu)化研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,36(32):14151.

[3] 張穎,張立睦,周紅英.不同產(chǎn)地枸杞子中黃酮含量的測定[J].中國中醫(yī)藥科技,2004,11(2):102.

[4] 李曉明,姜華,李軍,等.分光光度法測定鳳仙花中總黃酮的含量[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(33):16378.

[5] 孔繁晟,嚴(yán)春艷,賁永光,等.紫外分光光度法測定云南紅豆杉枝葉中總黃酮的含量[J].時珍國醫(yī)國藥,2009,20(2):471.

[6] 周斌,常軍,劉可越,等.紫外分光光度法測定甘草中總黃酮的含量[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(31):15246.

[7] 董順福,韓麗琴,劉建華,等.黃芪等中藥總黃酮與金屬元素含量測定及聚類分析[J].時珍國醫(yī)國藥,2010,21(3):650.

[8] 許小方,李會軍,李萍,等.灰氈毛忍冬花蕾中的化學(xué)成分[J].中國天然藥物,2006,4(1):45.

[9] 羅詠婧,李會軍,李萍等.毛花柱忍冬花蕾化學(xué)成分研究[J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè),2010,30(1):73.