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        2012-10-09 05:11:36鄭光雅馬逾英盧曉琳翟萌郭沛琳
        中藥與臨床 2012年2期
        關(guān)鍵詞:小鼠劑量實驗

        鄭光雅,馬逾英, 盧曉琳,翟萌,郭沛琳

        白芷為傘形科植物白芷Angelica dahurica (Fisch.ex Hoffm.) Benth.et Hook.f.或杭白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.) Benth.et Hook.f. var. formosana(Boiss.) Shan et Yuan的干燥根[1]。具有散風(fēng)除濕、通竅止痛、消腫排膿等功效。以白芷為原料制備的提取物可代替白芷投料,除藥用以外,還廣泛應(yīng)用于食品、保健品、護膚品等。但白芷藥材產(chǎn)地加工干燥時均要熏硫,以達到防腐、防霉、增白、便于干燥的目的,而大量研究表明,很多中藥材熏硫后化學(xué)成分及其含量、藥理作用等都有明顯的變化,以此為原料制備的提取物,其質(zhì)量自然受到影響。關(guān)于熏硫?qū)Π总葡愣顾仡惓煞旨八幚碜饔玫挠绊?,已有研究報道[2~3],本文通過小鼠急性毒性實驗,探討以熏硫與未熏硫白芷為原料制備的提取物的急性毒性,為其質(zhì)量評價及應(yīng)用提供參考依據(jù)。

        1 實驗部分

        1.1 實驗材料

        動物:健康昆明種小白鼠,雌雄各半,雌者無孕,體重18~22 g。由成都達碩生物科技有限公司提供(生產(chǎn)許可證號:SCXK[川]2008-24)。

        藥品:白芷提取物未熏硫樣品,批號為091006;白芷提取物熏硫樣品,批號為091011,由國家“十一五”支撐計劃課題組提供。每克白芷提取物粉末約相當(dāng)于3.25~3.57 g白芷藥材。

        1.2 實驗方法

        1.2.1 白芷提取物未熏硫樣品急性毒性實驗(半數(shù)致死量實驗) 根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果,取健康昆明種小鼠50只,體重18~22 g,雌雄各半,隨機分成5個劑量組,禁食(不禁水)12 h后,一次灌胃給予白芷提取物未熏硫樣品供試液,給藥劑量分別85.6、68.5、54.9、44.0、35.1 g生藥/kg (即組間距為1:0.8),給藥容量均為0.4 mL/10g。給藥后按常規(guī)飼養(yǎng),觀察給藥后4小時內(nèi)動物的反應(yīng),連續(xù)觀察7天,記錄動物的體重、外觀、皮毛、行為活動、呼吸變化、排泄物、死亡情況等。若動物出現(xiàn)不良反應(yīng)癥狀或死亡情況,詳細(xì)記錄不良反應(yīng)癥狀的起始時間、嚴(yán)重程度、持續(xù)時間、是否恢復(fù)等;若有動物死亡,及時進行尸檢,任何器官出現(xiàn)體積、顏色、紋理等改變時作組織病理學(xué)檢查。當(dāng)實驗觀察至第7天,存活動物完全恢復(fù)正常,死亡率已無變化時,用Bliss統(tǒng)計法計算出LD50及95%可信限,并用RM6240多道生理信號系統(tǒng)分析數(shù)據(jù)。

        1.2.2 白芷提取物熏硫樣品急性毒性實驗(半數(shù)致死量實驗) 根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果,將1.2.1中的5個劑量組的給藥劑量分別調(diào)整為136.1、108.8、87.0、69.6、55.6 g生藥/kg外,其余操作方法同1.2.1。

        1.3 實驗結(jié)果

        1.3.1 白芷提取物未熏硫樣品急性毒性實驗結(jié)果及LD50計算 給藥后部分小鼠心跳加速,呼吸困難,全身顫抖;其中部分小鼠3~5 min內(nèi)暈倒,小便失禁,而部分在30~60 min內(nèi)恢復(fù)正常;繼續(xù)觀察7天,健存動物活動正常,體征無異常,大小便、皮毛、呼吸正常,未見其它異常癥狀,無死亡,體重正常增長;攝食量正常。觀察期滿處死動物,肉眼觀察各組織,均未見異常。另外部分小鼠在1~2天內(nèi)死亡,各組死亡情況見表1,死亡動物進行尸檢,肉眼觀察未見變化;用RM6240多道生理信號采集系統(tǒng)中Bliss法計算LD50的值并分析數(shù)據(jù),見圖1。

        表1 白芷提取物未熏硫樣品急性毒性實驗結(jié)果

        通過對數(shù)據(jù)分析得知:LD50(半數(shù)致死量)為55.5169;X50 (半數(shù)致死對數(shù)劑量)為1.7444;SX50 (標(biāo)準(zhǔn)誤)為0.0259;LD50的95%可信限(L95)為49.3894~62.4046;回歸方程:Y(幾率單位):Y=-12.2407+9.8833×log(D)。

        1.3.2 白芷提取物熏硫樣品急性毒性實驗結(jié)果及LD50計算 給藥后部分小鼠急性毒性反應(yīng)的癥狀與1.3.1中基本相似,但出現(xiàn)癥狀的時間相對較晚,小鼠出現(xiàn)心跳加速,呼吸困難,甚至出現(xiàn)暈倒、小便失禁的時間約為給藥后10~20 min。各組死亡情況見表2,死亡動物進行尸檢,肉眼觀察未見變化;用Bliss法計算LD50的值,并用RM6240多道生理信號采集系統(tǒng)分析數(shù)據(jù),見圖2。

        表2 白芷提取物熏硫樣品急性毒性實驗結(jié)果

        通過數(shù)據(jù)分析得知:LD50(半數(shù)致死量)為89.4420;X50 (半數(shù)致死對數(shù)劑量)為1.9515;SX50 (標(biāo)準(zhǔn)誤)為0.0272;LD50的95%可信限(L95)為79.1242~101.1052;回歸方程:Y(幾率單位):Y=-13.5509+9.5058×log(D)。

        1.4 實驗結(jié)論

        單次灌胃給藥白芷提取物未熏硫樣品LD50為55.5169 g生藥/kg,約相當(dāng)于臨床用量的370倍;而白芷提取物熏硫樣品LD50為89.4420 g生藥/kg,約相當(dāng)于臨床用量的596倍。兩者對小鼠急性毒性均屬于無毒級,但熏硫后白芷提取物的LD50及95%明顯升高,毒性明顯降低。

        2 討論

        白芷在臨床上以治療各種疼痛見長,其主要活性成分為香豆素類,課題組前期研究表明白芷熏硫后藥材中香豆素類成分含量可降低40%~60%,且未顯示出明顯的鎮(zhèn)痛作用[3]。本實驗研究發(fā)現(xiàn)以熏硫白芷制備的提取物的急性毒性反而較未熏硫白芷制備的提取物低,是否白芷中有效成分亦是毒性成分,熏硫后有效成分及鎮(zhèn)痛作用降低的同時,毒性也隨著降低,或是其成分發(fā)生變化等,有待進一步研究。

        [1] 中華人民共和國國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(一部)[S].北京: 中國醫(yī)藥科技出版社,2010:97.

        [2] 王夢月,賈敏如,馬逾英,等.不同入藥部分及不同加工方法對白芷香豆素類成分含量的影響[J].中藥材, 2004,27(11):826.

        [3] 馬逾英,高穎,鄒文莉,等.熏硫川白芷藥材對小鼠鎮(zhèn)痛作用的影響[J].華西藥學(xué)雜志,2006,21(6):616.

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