李潤(rùn)花，趙文婧，裴彥江，李起超，殷國(guó)榮

旋毛形線蟲(chóng)（Trichinella spiralis），簡(jiǎn)稱旋毛蟲(chóng)，其成蟲(chóng)和幼蟲(chóng)分別寄生于同一宿主的小腸和肌肉內(nèi)，由其引起的旋毛蟲(chóng)?。╰richinosis）是一種嚴(yán)重的人獸共患寄生蟲(chóng)病。成囊期幼蟲(chóng)（肌肉期幼蟲(chóng)）可在宿主肌肉中存活數(shù)年，既是主要致病期，又是唯一傳播蟲(chóng)期。近年來(lái)，燒、烤、涮等飲食方式的多樣化，已發(fā)生多起旋毛蟲(chóng)病暴發(fā)，旋毛蟲(chóng)病發(fā)病率有逐年上升的趨勢(shì)［1］。

阿苯達(dá)唑?qū)πx(chóng)的幼蟲(chóng)和成蟲(chóng)均有效，已成為治療旋毛蟲(chóng)病的首選藥物［2］。但是，阿苯達(dá)唑治療同一種寄生蟲(chóng)病的療效存在很大差異，這是由于阿苯達(dá)唑的低水溶性及腸道的低吸收率所致［3］。動(dòng)物研究表明，提高阿苯達(dá)唑生物藥效率的主要策略是應(yīng)用共溶劑或表面活性劑以增加水溶性和脂溶性。將阿苯達(dá)唑與共溶劑（二甘醇單乙醚）結(jié)合可使小鼠體內(nèi)阿苯達(dá)唑的相對(duì)生物藥效率增加1.8倍［4］。與商品片劑相比，用花生油－吐溫80或羥丙基－β－環(huán)糊精作為賦形劑可提高阿苯達(dá)唑生物藥效率4.3～9.7倍［5］。大豆油可增加阿苯達(dá)唑溶解度，其相對(duì)生物藥效率比片劑提高了1.6倍［6］。

本研究比較了吐溫－80、羧甲基纖維素和羥丙基－β－環(huán)糊精作為阿苯達(dá)唑片劑的溶劑對(duì)其抗小鼠旋毛蟲(chóng)成囊期幼蟲(chóng)效果的影響。

1 材料與方法

1.1 阿苯達(dá)唑及溶劑 阿苯達(dá)唑（Albendazole，ABZ）片劑，購(gòu)自中美天津史克制藥有限公司，批號(hào)10110360。吐溫－80，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所。羧甲基纖維素（Carboxymethyl cellulose，CMC）、羥丙基－β－環(huán)糊精（hydroxypropyl-β-cyclodextrin，HP-β-CD），購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及蟲(chóng)株 8周齡BALB/c小鼠32只（SPF級(jí)），體重20～24g，購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所。旋毛形線蟲(chóng)（T.spiralis），山西醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)寄生蟲(chóng)學(xué)研究所小鼠保種。

1.3 動(dòng)物感染與治療 將小鼠隨機(jī)分為4組，每組8只。每鼠口飼感染成囊期幼蟲(chóng)50條，感染后第14 d，頓服300mg/kg，吐溫－80和3%乙醇溶液配制成阿苯達(dá)唑混懸液［7］，驅(qū)除腸道成蟲(chóng)。驅(qū)蟲(chóng)后第29 d，分別用不同溶劑的阿苯達(dá)唑治療，連續(xù)6d，劑量均為200mg/（kg·d）。對(duì)照組不治療。吐溫組：阿苯達(dá)唑用7%吐溫－80和3%乙醇溶解；羧纖組：用1%羧甲基纖維素和3%乙醇溶解；羥環(huán)組：用7%羥丙基－β－環(huán)糊精3%乙醇溶解。45℃磁力攪拌10h，以使阿苯達(dá)唑充分溶解。

1.4 療效觀察 治療后第14d處死小鼠，壓片法鏡檢計(jì)數(shù)膈肌和腓腸肌成囊期幼蟲(chóng)。按照李潤(rùn)花等［8］制定的判斷存活和死亡成囊期幼蟲(chóng)的標(biāo)準(zhǔn)，確定幼蟲(chóng)的存活或死亡。以每克肌肉中成囊期幼蟲(chóng)的總蟲(chóng)數(shù)、活蟲(chóng)數(shù)和死亡蟲(chóng)數(shù)為療效評(píng)價(jià)指標(biāo)，計(jì)算減蟲(chóng)率、活蟲(chóng)率和死蟲(chóng)率?？傁x(chóng)數(shù)＝鏡檢蟲(chóng)數(shù)÷肌肉重量（克）；減蟲(chóng)率＝［（對(duì)照組平均蟲(chóng)數(shù)－治療組平均蟲(chóng)數(shù)）÷對(duì)照組平均蟲(chóng)數(shù)］×100%；死蟲(chóng)率＝死亡蟲(chóng)數(shù)÷總蟲(chóng)數(shù)×100%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 數(shù)據(jù)采用（±s）表示，使用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理。多個(gè)樣本均數(shù)比較用方差分析及LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 小鼠健康狀況 實(shí)驗(yàn)期間，各組小鼠采食、飲水正常，健康狀況良好，未見(jiàn)藥物不良反應(yīng)。

2.2 成囊期幼蟲(chóng)的蟲(chóng)荷及減蟲(chóng)率、死蟲(chóng)率 與對(duì)照組相比，3個(gè)治療組膈肌和腓腸肌中成囊期幼蟲(chóng)總蟲(chóng)數(shù)和存活蟲(chóng)數(shù)均顯著減少（P＜0.05、P＜0.01），死亡蟲(chóng)數(shù)顯著增加（P＜0.05、P＜0.01），療效最高的為羥環(huán)組。將吐溫組阿苯達(dá)唑的相對(duì)藥效率設(shè)為1.0，以減蟲(chóng)率計(jì)算，羧纖組和羥環(huán)組對(duì)膈肌和腓腸肌中成囊期幼蟲(chóng)相對(duì)藥效率分別為吐溫組的1.55、1.33和1.95、1.83倍；而以死蟲(chóng)率計(jì)算，該數(shù)據(jù)分別為1.93、1.82和2.45、3.22倍（表1、2）。

3 討 論

薛劍等實(shí)驗(yàn)表明，連續(xù)7d口服阿苯達(dá)唑200 mg/（kg·d）治療小鼠旋毛蟲(chóng)成囊期幼蟲(chóng)，總蟲(chóng)數(shù)顯著少于對(duì)照組（P＜0.01），膈肌減蟲(chóng)率為71.8%［7］。本研究中吐溫組的阿苯達(dá)唑劑量及配制方法與薛劍等的實(shí)驗(yàn)相同，但膈肌和腓腸肌的減蟲(chóng)率僅為28.13%和42.95%。出現(xiàn)這種差異的原因雖然與本研究給藥時(shí)間較短（6d）有關(guān)，但主要原因是薛劍等的實(shí)驗(yàn)是采用胃蛋白酶消化法回收肌肉中的幼蟲(chóng)，只有當(dāng)幼蟲(chóng)的活力較強(qiáng)時(shí)，才能被回收，亦即死亡和受損幼蟲(chóng)都不可能被回收計(jì)數(shù)，因而治療組回收的幼蟲(chóng)較少。而本研究是采用肌肉壓片法計(jì)數(shù)肌肉中的幼蟲(chóng)，無(wú)論是活的或死亡的幼蟲(chóng)都被計(jì)算到總蟲(chóng)數(shù)中，故而治療組的減蟲(chóng)率相對(duì)較低。支持這一觀點(diǎn)的直接證據(jù)是，本研究治療組膈肌的活蟲(chóng)數(shù)顯著減少，而死蟲(chóng)數(shù)顯著增加。

表1 口服不同溶劑對(duì)阿苯達(dá)唑抗小鼠膈肌旋毛蟲(chóng)成囊期幼蟲(chóng)的效果Tab.1 Effect of 3different oral liquid formulations of albendazole against Trichinella spiralis encapsulated larvae in diaphragmatic muscle in mice

表2 口服不同溶劑對(duì)阿苯達(dá)唑抗小鼠腓腸肌旋毛蟲(chóng)成囊期幼蟲(chóng)的效果Tab.2 Effect of 3different oral liquid formulations of albendazole against Trichinella spiralis encapsulated larvae in gastrocnemius muscle in mice

本研究的主要發(fā)現(xiàn)是，口服相同劑量阿苯達(dá)唑，用1%羧甲基纖維素和3%乙醇（羧纖組）或7%羥丙基－β－環(huán)糊精3%乙醇溶解阿苯達(dá)唑（羥環(huán)組），膈肌和腓腸肌的減蟲(chóng)率、死蟲(chóng)率均顯著高于7%吐溫－80和3%乙醇（吐溫組）溶解，阿苯達(dá)唑的相對(duì)藥效也顯著提高。這些數(shù)據(jù)表明，用羧甲基纖維素和羥丙基－β－環(huán)糊精溶解阿苯達(dá)唑可有效提高其生物藥效率。

已有研究表明，在小鼠旋毛蟲(chóng)感染模型比較了阿苯達(dá)唑－環(huán)糊精混合劑（ABZ-CDC）和阿苯達(dá)唑－羧甲基纖維素混懸液（ABZ-CMC）的生物藥效率和驅(qū)腸蟲(chóng)效能。ABZ-CDC的驅(qū)腸蟲(chóng)效能和活性代謝物（ABZSO）血漿濃度顯著高于 ABZ-CMC［9］。García等研究表明，口服溶于羥丙基－β－環(huán)糊精（HP-β-CD）的阿苯達(dá)唑溶液的生物藥效率和驅(qū)蟲(chóng)效果優(yōu)于羧甲基纖維素（CMC）阿苯達(dá)唑混懸液［10］。Casulli等也證實(shí)，HP-β-CD可有效提高阿苯達(dá)唑的生物藥效率和抗旋毛蟲(chóng)成囊期幼蟲(chóng)的效果［11］。

表面活性劑吐溫－80可增加阿苯達(dá)唑的脂溶性，乙醇也為脂溶性溶劑，CMC則常作為片劑的黏合劑、崩解劑或混懸劑的助懸劑，HP-β-CD可增加阿苯達(dá)唑的水溶性。本研究表明可增加水溶性的HP-β-CD（7%）與增加脂溶性的乙醇（3%）制備的阿苯達(dá)唑溶液的生物藥效率和抗旋毛蟲(chóng)成囊期幼蟲(chóng)效果顯著高于吐溫－80與乙醇溶劑，也優(yōu)于CMC與乙醇溶劑。

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