胡順珍 張建梅謝全喜 李曉穎

(山東寶來利來生物工程股份有限公司，泰安 271000)

在長期的畜牧業(yè)生產(chǎn)中，抗生素等藥物的普遍使用導(dǎo)致的抗藥性和藥物殘留已嚴重危害人類健康，造成環(huán)境破壞。研究綠色、無公害的添加劑，提高畜禽免疫功能和營養(yǎng)素利用率，生產(chǎn)綠色、安全的畜產(chǎn)品，是21世紀全球高效、低耗、少污染養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的必然趨勢。微生態(tài)制劑(probiotics)是近年發(fā)展起來的新型綠色添加劑，它能夠改善動物消化道有益菌群，抑制或殺死有害菌，從而提高動物健康水平，進而促進動物生長發(fā)育及提高飼料利用率;此外，其還具有無殘留、無毒副作用等特點，可改善養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境，達到生態(tài)防治的目的，使養(yǎng)殖生產(chǎn)良性發(fā)展，取得更好的經(jīng)濟效益和生態(tài)效益［1］。目前，單一微生態(tài)制劑在肉雞養(yǎng)殖中的作用報道較多，王俊峰等［2］用合生素飼喂愛拔益加肉雞42 d，合生素極顯著降低了肉雞前期采食量和料重比及全期采食量(P＜0.01)，顯著降低了后期采食量(P ＜0.05);陳家祥等［3］用地衣芽孢桿菌飼喂雄性麻羽肉雞28 d后發(fā)現(xiàn)，基礎(chǔ)飼糧中添加50 mg/kg地衣芽孢桿菌制劑可使肉雞平均日增重顯著升高(P＜0.05)，料重比顯著降低(P＜0.05)，血清中超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶活性均顯著升高(P＜0.05)，丙二醛含量顯著降低(P＜0.05)。單一免疫增強劑的報道也非常多，大量的研究表明黃芪多糖不僅能夠增強免疫［4］，還具有抗病毒［5］、抗氧化的功效［6］。而作為免疫佐劑，鹽酸左旋咪唑是目前市場上較好的免疫增強劑之一，能夠提高機體免疫力，可輔助各種病毒性疾病的治療［7］。但是，復(fù)合微生態(tài)制劑與其佐劑的聯(lián)合應(yīng)用在肉雞養(yǎng)殖中的報道并不多，為此，我們設(shè)計了由微生態(tài)制劑與維生素等配合而成的多組分復(fù)合微生態(tài)制劑及其佐劑，目的是使其在發(fā)揮益生素作用的同時，還可通過提高機體的免疫水平，達到促進動物健康的功效。在此設(shè)想基礎(chǔ)上，本試驗旨在探討復(fù)合微生態(tài)制劑及其佐劑對肉雞生產(chǎn)性能、腸道菌群數(shù)量、抗氧化指標和免疫功能的影響，為其在肉雞養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

復(fù)合微生態(tài)制劑A：乳酸菌1.0×108CFU/g、芽孢桿菌 4.0×108CFU/g、酵母鋅(鋅含量為1 500 mg/kg)3%、酵母硒(硒含量為1 500 mg/kg)7%、維生素 E 1.0 ×104IU/kg、維生素 C 50 g/kg、黃芪多糖(純度為60%)5%，載體為葡萄糖。

復(fù)合微生態(tài)制劑佐劑B：黃芪多糖(純度為60%)10%、左旋咪唑(純度為99.9%)10%，載體為葡萄糖。

其中，乳酸菌、芽孢桿菌、酵母鋅和酵母硒為本公司產(chǎn)品;維生素E、維生素C購自河北省石家莊中試盛邦商貿(mào)有限公司;黃芪多糖購自山東圣地寶藥業(yè)有限公司;左旋咪唑購自山東泰安山農(nóng)大藥業(yè)有限公司。

1.2 試驗設(shè)計與飼糧組成

將240只1日齡雌性健康肉雞隨機分為4組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)20只。試驗預(yù)試期5 d，飼喂基礎(chǔ)飼糧，飲用煮開后涼透的自來水，正試期37 d。Ⅰ組為對照組，飼喂基礎(chǔ)飼糧，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組為試驗組，在飼喂基礎(chǔ)飼糧同時，分別定時在飲水中添加復(fù)合微生態(tài)制劑A及其佐劑B，其中復(fù)合微生態(tài)制劑A的添加水平為飼糧的2.0‰，6日齡(周二)時開始添加，每周2次(周二和周五)，每次飲用量為周采食量(參照GB/T 19664—2005商品肉雞生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程中的混養(yǎng)商品肉雞的耗料量)2.0‰的1/2;復(fù)合微生態(tài)制劑佐劑 B在7、14和21日齡免疫后分別連續(xù)使用3 d，每天1次，每次飲用量為日采食量(周采食量/7)的0.5‰、1.0‰和 2.0‰。

采用玉米－豆粕型基礎(chǔ)飼糧，其配制參照NRC(1994)，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗雞21日齡前各重復(fù)分箱飼養(yǎng)，21日齡后改為分籠飼養(yǎng)，自由采食和飲水。舍內(nèi)光照、溫度和濕度嚴格按照常規(guī)飼養(yǎng)管理要求進行控制，按常規(guī)免疫程序?qū)﹄r雞進行新城疫及法氏囊免疫。每日換食換水前進行食槽和飲水器殺菌消毒。試驗期間詳細記錄各組飼料消耗及試驗雞的健康狀況。

1.4 測定指標和方法

1.4.1 生產(chǎn)性能

分別于14、21、28、35和42日齡以重復(fù)為單位對空腹(自由飲水)12 h后的肉雞稱重，并準確稱量和記錄日供料量、剩余料量和損失料量，計算各階段平均日增重、平均日采食量和料重比。

1.4.2 腸道菌群數(shù)量

分別于14、28和42日齡從每個重復(fù)中隨機抽取3只空腹(自由飲水)12 h后的肉雞稱重，采用心臟注入空氣法處死雞只，無菌操作取盲腸內(nèi)容物，在滅菌生理鹽水中搖勻，用平板培養(yǎng)計數(shù)法計數(shù)腸道乳酸菌和大腸桿菌，其中乳酸菌接種于乳酸菌選擇性培養(yǎng)基(LBS)上培養(yǎng)，在37℃生化培養(yǎng)箱中厭氧培養(yǎng)48 h后進行菌落計數(shù);大腸桿菌則接種于伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在37℃生化培養(yǎng)箱中有氧培養(yǎng)24 h后進行菌落計數(shù)。菌群數(shù)量以每克腸道內(nèi)容物所含細菌群落總數(shù)的對數(shù)［(lgCFU)/g］表示。

1.4.3 血漿總抗氧化能力(T-AOC)

分別于14、21、28和35日齡從每個重復(fù)中隨機抽取3只空腹(自由飲水)12 h后的肉雞，翅靜脈采血，肝素抗凝，3 000 r/min離心10 min分離血漿，使用總抗氧化能力檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所)測定血漿總抗氧化能力。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets(DM basis) %

1.4.4 免疫器官指數(shù)

分別于14、28和42日齡將雞只處死后，解剖，摘取脾臟和法氏囊，剔除脂肪后稱鮮重，計算脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)。

免疫器官指數(shù)(mg/g)=免疫器官重/活體重。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與處理

應(yīng)用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析，差異顯著者進行LSD多重比較，結(jié)果用平均值±標準差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞生產(chǎn)性能的影響

試驗期間肉雞的健康狀況良好，僅21日齡之前Ⅰ組和Ⅱ組肉雞各死亡1只，可能是由于箱養(yǎng)時肉雞密度大、擁擠踩踏所致。

由表2可知，7～14日齡時，Ⅱ組肉雞平均日采食量最高，顯著高于對照組、Ⅲ組和Ⅳ組(P＜0.05)，后 3 組之間差異不顯著(P ＞0.05);Ⅱ組和Ⅲ組肉雞平均日增重顯著高于對照組(P＜0.05)，料重比顯著低于對照組(P ＜0.05)，且Ⅱ組肉雞平均日增重顯著高于Ⅲ組(P＜0.05)，但Ⅲ組肉雞料重比顯著低于Ⅱ組(P＜0.05)，而Ⅳ組肉雞平均日增重和料重比均與對照組差異不顯著(P ＞0.05)。

15～21日齡時，Ⅱ組和Ⅳ組肉雞平均日增重顯著高于對照組(P＜0.05)，且Ⅱ組肉雞平均日增重顯著高于Ⅳ組(P＜0.05)，而Ⅲ組肉雞平均日增重顯著低于對照組(P＜0.05);各試驗組肉雞平均日采食量和料重比均顯著低于對照組(P＜0.05)，且Ⅳ組肉雞料重比最低，其次是Ⅱ組，各試驗組之間差異顯著(P ＜0.05)。

22～28日齡時，各試驗組肉雞平均日采食量均顯著低于對照組(P＜0.05);僅Ⅱ組肉雞平均日增重顯著高于對照組(P＜0.05)，Ⅲ組顯著低于對照組(P＜0.05)，Ⅳ組與對照組差異不顯著(P＞0.05);Ⅱ組和Ⅳ組肉雞料重比顯著低于對照組(P＜0.05)，且Ⅱ組肉雞料重比顯著低于Ⅳ組(P ＜0.05)，而Ⅲ組顯著高于對照組(P ＜0.05)。

29～35日齡時，Ⅱ組肉雞平均日采食量顯著高于對照組(P＜0.05)，Ⅲ組和Ⅳ組顯著低于對照組(P＜0.05);各試驗組肉雞平均日增重均顯著高于對照組(P＜0.05)，料重比均顯著低于對照組(P＜0.05)，且Ⅱ組肉雞平均日增重最高，料重比最低，各試驗組之間差異顯著(P＜0.05)。

36～42日齡時，Ⅱ組和Ⅲ組肉雞平均日增重顯著高于對照組(P＜0.05)，且Ⅱ組顯著高于Ⅲ組(P ＜0.05)，而Ⅳ組顯著低于對照組(P ＜0.05);各試驗組肉雞平均日采食量和料重比均顯著低于對照組(P＜0.05)，且Ⅱ組肉雞料重比最低，各試驗組之間差異顯著(P＜0.05)。

總體看來，在提高肉雞平均日增重和降低肉雞料重比方面，Ⅱ組的效果較好、較穩(wěn)定，添加水平較合適。

表2 復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞生產(chǎn)性能的影響Table 2 Effects of compound probiotics on performance of broilers

2.2 復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞盲腸菌群數(shù)量的影響

由表3可以看出，在14、28和42日齡，各試驗組肉雞盲腸乳酸菌數(shù)量均在一定程度上高于對照組，說明復(fù)合微生態(tài)制劑及其佐劑的添加確有促進肉雞盲腸乳酸菌繁殖的潛力，但僅14日齡和28日齡時Ⅱ組和Ⅲ組與對照組差異顯著(P＜0.05)，Ⅳ組與對照組差異不顯著(P＞0.05)，且42日齡時各試驗組與對照組差異不顯著(P＞0.05);Ⅱ組和Ⅲ組之間差異不顯著(P＞0.05)。由此可見，在促進肉雞盲腸乳酸菌繁殖方面，Ⅱ組和Ⅲ組的添加水平較合適。

14日齡時，各試驗組肉雞盲腸大腸桿菌數(shù)量均在一定程度上低于對照組，且Ⅱ組和Ⅲ組與對照組差異顯著(P＜0.05)，但Ⅳ組與對照組差異不顯著(P＞0.05);Ⅱ組和Ⅲ組之間差異不顯著(P ＞0.05)，但Ⅱ組顯著低于Ⅳ組(P ＜0.05)。28日齡時，僅Ⅱ組肉雞盲腸大腸桿菌數(shù)量顯著低于對照組(P＜0.05)，Ⅲ組與對照組差異不顯著(P ＞0.05)，Ⅳ組顯著高于對照組(P ＜0.05)。42日齡時，各組肉雞大腸桿菌數(shù)量較14日齡和28日齡大大增加，這可能是由于當(dāng)時天氣寒冷，雞舍溫度很難控制，使得通風(fēng)條件不好，雞舍內(nèi)糞便的污染使得細菌得不到有效排除所致，復(fù)合微生態(tài)制劑及其佐劑的添加也并未起到改善的效果，各組肉雞大腸桿菌數(shù)量均無顯著差異(P＞0.05)?？傮w看來，復(fù)合微生態(tài)制劑及其佐劑的添加能在一定條件下降低肉雞盲腸大腸桿菌數(shù)量，以Ⅱ組的添加水平較合適。

表3 復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞盲腸乳酸菌和大腸桿菌數(shù)量的影響Table 3 Effects of compound probiotics on the number of Lactobacillus and E.coli in cecum of broilers (lgCFU)/g

2.3 復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞血漿總抗氧化能力的影響

由表4可知，除了14日齡時Ⅳ組肉雞血漿總抗氧化能力顯著低于對照組(P＜0.05)外，整個試驗期間各試驗組肉雞血漿總抗氧化能力都在一定程度上高于對照組。21日齡時Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組肉雞血漿總抗氧化能力較14日齡時均明顯下降，這可能是由于飼養(yǎng)方式由箱養(yǎng)轉(zhuǎn)變?yōu)榛\養(yǎng)造成的應(yīng)激所致，Ⅳ組有所上升，可能是測定時的誤差所致;添加復(fù)合微生態(tài)制劑及其佐劑可顯著提高肉雞血漿總抗氧化能力(P＜0.05)，且Ⅱ組顯著高于Ⅳ組(P＜0.05)。28日齡時除了Ⅳ組外各組肉雞血漿總抗氧化能力均有所回升，且Ⅱ組和Ⅲ組均與對照組差異顯著(P＜0.05)。35日齡時各組肉雞血漿總抗氧化能力繼續(xù)上升，其中Ⅱ組和Ⅲ組均與對照組差異顯著(P＜0.05)，而Ⅳ組與對照組差異不顯著(P＞0.05)。這表明復(fù)合微生態(tài)制劑及其佐劑的添加可以有效增強機體抗氧化水平，添加效果以Ⅱ組和Ⅲ組較為穩(wěn)定。

表4 復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞血漿總抗氧化能力的影響Table 4 Effects of compound probiotics on total antioxidant capacity in plasma of broilers U/mg

2.4 復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞免疫器官指數(shù)的影響

所有處死的肉雞免疫器官外觀未見異常。由表5可知，14日齡時各試驗組肉雞的脾臟指數(shù)均在一定程度上高于對照組，其中Ⅳ組肉雞的脾臟指數(shù)最高，顯著高于對照組和Ⅱ組(P＜0.05)，但與Ⅲ組差異不顯著(P＞0.05);28日齡時僅Ⅱ組肉雞的脾臟指數(shù)高于對照組，但差異不顯著(P＞0.05)，Ⅲ組和Ⅳ組肉雞的脾臟指數(shù)比對照組低，其中Ⅲ組比對照組降低了15.24%(P＜0.05)，Ⅳ組比對照組降低了6.67%(P＞0.05);42日齡時各試驗組肉雞的脾臟指數(shù)均在一定程度上高于對照組，其中Ⅳ組肉雞的脾臟指數(shù)最高，顯著高于對照組和Ⅲ組(P＜0.05)，但與Ⅱ組差異不顯著(P＞0.05)。總體看來，在提高肉雞脾臟指數(shù)方面，Ⅱ組和Ⅳ組的效果較好。

14日齡時各試驗組肉雞的法氏囊指數(shù)均在一定程度上高于對照組，其中Ⅱ組和Ⅲ組肉雞的法氏囊指數(shù)顯著高于對照組(P＜0.05)，但與Ⅳ組差異不顯著(P＞0.05);28日齡時Ⅱ組肉雞的法氏囊指數(shù)比對照組有所降低，但差異不顯著(P＞0.05)，Ⅲ組和Ⅳ組均有所升高，但僅Ⅲ組與對照組差異顯著(P＜0.05);42日齡時Ⅱ組肉雞的法氏囊指數(shù)比對照組有所降低，但差異不顯著(P＞0.05)，Ⅲ組和Ⅳ組均顯著升高(P＜0.05)?？傮w看來，在提高肉雞法氏囊指數(shù)方面，復(fù)合微生態(tài)制劑及其佐劑的添加效果以Ⅲ組較好。

3 討論

3.1 復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞生產(chǎn)性能的影響

微生態(tài)制劑具有促進動物生長、提高飼料轉(zhuǎn)化率和降低動物死亡率等多種功能［8］。這一觀點在本試驗中再次被證實。本試驗研究表明，添加2.0‰復(fù)合微生態(tài)制劑A和0.5‰復(fù)合微生態(tài)制劑佐劑B時，肉雞平均日增重顯著高于對照組(P＜0.05)，料重比顯著低于對照組(P＜0.05)。吳亨進等［9］的研究顯示，在飼料中添加有效微生物(EM)復(fù)合制劑的試驗組肉雞增重速度顯著高于對照組(P ＜0.05)。李樹鵬等［10］研究表明，黃芪多糖、益生菌和合生元均能顯著提高雛雞周增重(P ＜0.05)，減少飼料消耗(P ＜0.05)，降低料重比(全期分別降低 13.96%、15.26% 和 12.34%，P ＜0.05)。

3.2 復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞腸道菌群的影響

復(fù)合微生態(tài)制劑中的芽孢桿菌通過消耗腸道內(nèi)的氧氣，降低腸道內(nèi)的氧化還原電勢，創(chuàng)造有利于厭氧菌生長的環(huán)境，扶植腸道內(nèi)的優(yōu)勢菌群，抑制大腸桿菌的數(shù)量，使失調(diào)的腸道菌群結(jié)構(gòu)調(diào)整恢復(fù)到正常狀態(tài)，起到抗菌防病的作用。作為腸道內(nèi)的優(yōu)勢菌群的乳酸菌可以使簡單的碳水化合物產(chǎn)生大量的乳酸，從而降低腸道內(nèi)的pH，使一些只適于pH 6～7的菌群的生長受到抑制。乳酸菌作為優(yōu)勢菌群大量繁殖，有利于動物的生長發(fā)育及生產(chǎn)性能的提高。本試驗將芽孢桿菌和乳酸菌與其他成分配伍，收到了較好的效果。本試驗結(jié)果表明，添加2.0‰復(fù)合微生態(tài)制劑A和0.5‰復(fù)合微生態(tài)制劑佐劑B時，14日齡和28日齡肉雞盲腸乳酸菌數(shù)量顯著高于對照組(P＜0.05)，大腸桿菌數(shù)量顯著低于對照組(P＜0.05)。元娜等［11］研究表明，在基礎(chǔ)飼糧中添加1.5 g/kg復(fù)合微生態(tài)制劑，每克盲腸內(nèi)容物中大腸桿菌數(shù)量較對照組降低37.51%(P＜0.01)，乳酸菌數(shù)量較對照組提高 1.92%(P ＜ 0.05)。董秀梅等［12］的研究顯示，與對照組比較，復(fù)合微生態(tài)制劑組顯著地增加了腸道內(nèi)乳酸菌、腸球菌的數(shù)量，同時顯著地降低了腸道內(nèi)大腸桿菌的數(shù)量。李樹鵬等［13］研究表明，黃芪多糖和益生菌均能有效促進雛雞腸道有益微生物——乳酸菌和雙歧桿菌的增殖，并對腸道有害菌——大腸桿菌有抑制作用，且后者的效果優(yōu)于前者;兩者同時添加于雛雞飼糧中，其作用效果遠遠超過單純添加，表明黃芪多糖與益生菌能協(xié)同作用，共同維持腸道微生態(tài)區(qū)系的平衡和穩(wěn)定。

3.3 復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞抗氧化指標的影響

肉雞由于其營養(yǎng)及生理特點，體內(nèi)脂質(zhì)含量相對較高，故容易發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，產(chǎn)生的過氧化產(chǎn)物會對機體產(chǎn)生一定的損害?？偪寡趸芰κ呛饬繖C體抗氧化能力的指標。本試驗結(jié)果顯示，添加 2.0‰復(fù)合微生態(tài)制劑 A和 0.5‰或1.0‰復(fù)合微生態(tài)制劑佐劑B顯著增加了21、28和35日齡肉雞的總抗氧化能力(P＜0.05)。這與復(fù)合微生態(tài)制劑中的維生素C、維生素E、酵母硒等抗氧化成分密切相關(guān)。武江利等［14］研究顯示，在育成蛋鴨飼糧中添加15和20 IU/kg維生素E時，可在一定程度上提高蛋鴨血清和肝臟中的總抗氧化能力，但與對照組差異不顯著(P＞0.05);王巧莉等［15］研究表明，在基礎(chǔ)飼糧中添加0.3 mg/kg酵母硒時，3、6和9周齡肉鵝血清中總抗氧化能力以及6周齡肉鵝肝臟中總抗氧化能力顯著增強(P ＜0.05)。

3.4 復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞免疫功能的影響

免疫器官稱重法是目前研究機體免疫體況的方法之一。一般認為免疫器官重量增加為免疫增強的表現(xiàn)［16］，而免疫器官重量降低為免疫抑制所致。免疫器官的絕對重量皆隨日齡的增加而增大，但其相對重量有隨其日齡增加而減小的趨勢。脾臟屬于外周免疫器官，它能產(chǎn)生大量的淋巴細胞，可以分泌特殊性的免疫抗體。法氏囊屬于中樞免疫系統(tǒng)，是一種淋巴上皮性器官，是血清抗體生成、系統(tǒng)細胞生長和分化的部位。李樹鵬等［10］研究表明，在基礎(chǔ)飼糧中添加黃芪多糖和益生菌的合生元組雛雞的法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)均顯著高于空白對照組、黃芪多糖組和益生菌組(P＜0.05)。在雛雞階段，法氏囊是主要的免疫器官，隨著日齡的不斷增長，脾臟逐漸發(fā)育成熟，成為主要的免疫器官，而逐漸取代法氏囊的首要位置。本試驗結(jié)果表明，添加0.5‰復(fù)合微生態(tài)制劑佐劑B的組肉雞的法氏囊指數(shù)雖然在28日齡和42日齡顯著低于添加1.0‰和2.0‰復(fù)合微生態(tài)制劑佐劑B的組(P＜0.05)，但添加0.5‰復(fù)合微生態(tài)制劑佐劑B的組肉雞的脾臟指數(shù)在42日齡時顯著高于添加1.0‰復(fù)合微生態(tài)制劑佐劑B的組和對照組(P ＜0.05)。

4 結(jié)論

① 添加2.0‰復(fù)合微生態(tài)制劑A和0.5‰復(fù)合微生態(tài)制劑佐劑B效果最好，能夠提高肉雞生產(chǎn)性能，改善其腸道菌群，提高其血漿總抗氧化能力。

②適量添加復(fù)合微生態(tài)制劑及其佐劑可以提高肉雞的脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)，增強其免疫功能。

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