歐陽錄明 陳福春 胡永軒 羅 輝 江 超 程 慶

湘南學院基礎醫(yī)學部，湖南郴州 423000

慢性乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染者的臨 床轉歸和預后，與其免疫應答狀況以及免疫調節(jié)細胞因子含量變化有關聯。是當前研究的熱點之一[1]。為了解HBV感染者免疫應答狀況與細胞因子含量變化的影響及意義，筆者選擇 HBV 感染者分類進行了 IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-12細胞因子含量變化的檢測和研究，結果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

60例來自醫(yī)院肝病科2010年6月～2011年6月的門診和住院患者。將其中27例HBeAg陽性和肝功能丙氨酸轉氨酶（ALT）異常者，劃為乙型病毒性肝炎（HB）現癥患者，即A組：男 17 例，女 10 例，平均年齡（39.14±3.36）歲，平均病程（4.2±1.61）年。將22例HBeAg陽性和肝功能ALT持續(xù)正常者，劃為無癥狀HBV攜帶者，即B組：男15例，女7例，平均年齡（34.31±6.72）歲，平均病程（4.92±8.63）年。將 11 例HBeAg陰性和肝功能ALT正常以及HBV-DNA陰性者，劃為非活動性HBsAg攜帶者[2]，即C組：男8例，女3例，平均年齡（35.90±6.15）歲，平均病程（4.15±6.13）年。 設正常對照組：為各型病毒性肝炎血清學檢測指標陰性的健康體檢者10例，男6例，女4例，平均年齡（36.60±3.63）歲。 診斷標準按照2000年全國第十次病毒性肝炎與肝病學術會議（西安）修訂的病毒性肝炎防治方案[3]；并在3個月前未經免疫調節(jié)劑和抗病毒治療，并排除合并其他病毒性肝炎和免疫性疾病的患者。

1.2 研究方法

1.2.1 血清病毒標志物指標觀察 包括HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe 及抗-HBc，HBV-DNA（羅氏熒光定量法）。高病毒載量為 HBV-DNA≥1×107拷貝/mL，中載量為 1×105～6拷貝/mL，低載量為＜1×105拷貝/mL。均由醫(yī)院檢驗科檢測。

1.2.2 血清生化學指標觀察 包括ALT、天冬氨酸轉氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、r-谷酰胺轉肽酶（GGT）、總膽紅素（TB）、白蛋白（A）及球蛋白（G），統(tǒng)一由醫(yī)院檢驗科檢測。

1.2.3 細胞因子含量檢測 受試者均于清晨無菌采血，血清分離后存放-50℃冰箱中備檢。 IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-12測定均采用雙抗體夾心ELISA法。試劑購自深圳晶美生物工程有限公司進口分裝，具體步驟嚴格按照說明書操作。儀器為DNX-9620電腦洗板機、DG30ZZA型酶標檢測儀，購自北京普朗新技術有限公司。

1.3 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 13.0軟件包進行統(tǒng)計學處理，計量資料數據以均數±標準差（x±s）表示，比較采用t檢驗，兩兩比較q檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組HBV感染者細胞因子含量檢查比較

HBV感染者各組IL-2、IL-12含量較正常對照組均下降，IL-4、IL-10 均升高，差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05），IFN-γ普遍降低但各組之間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。A組現癥患者IL-2、IL-12的活性顯著高于B組無癥狀HBV攜帶組和C組非活動性HBsAg攜帶組（P＜0.05）。見表1。

2.2 病毒載量與細胞因子含量的關系

IFN-γ、IL-2各組與正常對照組比較顯著下降 （P＜0.05），IFN-γ 下降幅度為≥107組和 105～6組＞、＜105組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。IL-12也普遍降低，各組差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。IL-4、IL-10各組含量明顯高于對照組 （P＜0.05），含量隨病毒載量增高而增加。≥107組和105～6與＜105組比較差異有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05）。 見表 2。

3 討論

機體感染HBV會有不同的臨床表現和預后。慢性乙型肝炎發(fā)病主要是免疫應答導致的肝細胞損傷，CD4+T輔助（Th）細胞在肝細胞損傷的免疫反應中起著核心的調節(jié)作用。根據CD4+Th產生的細胞因子不同分為Th1和Th2等細胞亞群，Th1分泌IL-2、IFN-γ等細胞因子，主要介導細胞免疫反應，在一定條件下，還可刺激B細胞產生抗體；Th2分泌IL-4、IL-10等細胞因子，主要促進B細胞增殖并分化成漿細胞，介導體液免疫。Th1/Th2應答的動態(tài)平衡是機體處于正常免疫狀態(tài)的保證[4]。這兩種細胞因子發(fā)揮作用時相互拮抗，使得Th1和Th2成為功能上相互抑制的適應性調節(jié)T細胞亞群[5]，本研究結果顯示，IFN-γ、IL-12、IL-2 較正常組血清含量均下降，而IL-4、IL-10均升高，提示HBV感染者Th1/Th2免疫應答失衡或紊亂。

IFN-γ由活化T細胞產生，是促進Th1分化的關鍵性因子，它能直接抑制Th2的分化從而使Th1的分化占優(yōu)勢；IL-12主要由單核細胞、巨噬細胞產生，它和IFN-γ可直接調節(jié)Th1的分化，還可促進NK細胞和T細胞產生IFN-γ，從而發(fā)揮對Th2的抑制和對Th1的促進作用。IFN-γ、IL-12含量較正常組降低，IFN-γ降低程度伴隨病毒載量增加而降低，顯示Th1細胞免疫應答在HBV感染者中受到不同程度的抑制。IL-4對啟動Th2的分化起最為關鍵作用，IL-4含量越高，則對Th1細胞產生IFN-γ的抑制作用越強[6]。IL-10主要通過抑制Th1細胞產生IFN-γ、IL-2等，來促進Th2的分化。結果表明IL-4和IL-10含量均升高，且含量伴隨病毒載量增高而增加，顯示HBV致病與免疫應答中Th2介導的體液免疫活性偏高有關系。含量偏高的IL-4和IL-10抑制了Th1群細胞的功能，使Th1分泌IFN-γ和IL-2的量減少，細胞免疫效應降低，機體清除病毒能力減弱，導致病毒持續(xù)感染。同時也進一步證實了HBV致機體免疫應答低下。IL-2在HBV感染者中雖然普遍偏低，但在HB現癥患者中其活性顯著高于無癥狀HBV攜帶者和非活動性HBsAg攜帶者 （P＜0.05），提示在有病毒復制的HB現癥患者中，Th1群細胞免疫應答處在相對活躍狀態(tài)，與有關報道相符[7]。IL-2主要由活化的淋巴細胞產生，是調節(jié)機體免疫功能最主要淋巴因子之一。它屬于Th1群細胞因子，能增強CTL、NK、LAK等殺傷細胞的活性清除HBV。HB現癥患者ALT異常，提示Th1群細胞免疫應答導致了肝細胞的損傷。

表1 各組HBV感染者細胞因子含量檢查結果比較（x±s，pg/mL）

表2 病毒載量與細胞因子含量的關系（x±s，pg/mL）

綜上所述，HBV感染者臨床表現呈多樣性，它與免疫應答狀況以及免疫調節(jié)細胞因子含量變化有關聯。在HBV感染與免疫反應中，Th1/Th2免疫應答失衡或紊亂，直接影響了CTL、NK、LAK和B細胞功能的正常發(fā)揮，致使病毒清除能力下降從而導致疾病慢性化。對HBV感染者進行免疫狀況和免疫調節(jié)的細胞因子研究，對于進一步闡明其發(fā)病機制以及應用細胞因子干預治療慢性肝炎患者，判斷藥物治療效果，臨床轉歸和預后預測具有重要意義，有待繼續(xù)深入研究。

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