王合金 陽(yáng)書(shū)坤 許梅妹

1.廣東省深圳市龍崗區(qū)人民醫(yī)院急診科，廣東深圳 518172；2.廣東省深圳市龍崗區(qū)人民醫(yī)院ICU，廣東深圳 518172

膿毒血癥和膿毒性休克每年影響成千上萬(wàn)患者，其中25%甚至更多患者死亡，且病死不斷升高。急性肺損傷（acute lung injury，ALI）/急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）是一種常見(jiàn)危重癥，病死率極高，嚴(yán)重威脅重癥患者的生命并影響其生存質(zhì)量。研究表明，膿毒血癥和膿毒血癥性休克時(shí)ALI的患病率高達(dá)25%～50%[1]。盡管對(duì)其治療策略進(jìn)行了廣泛研究，目前尚未找到充分有效的治療藥物，死亡率仍然高達(dá)35%～40%[2]。 胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（insulin-like growth factor-1，IGF-1）是對(duì)機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育起重要調(diào)節(jié)作用的單鏈多肽，近年來(lái)因發(fā)現(xiàn)其在細(xì)胞凋亡調(diào)控方面具有重要作用而備受關(guān)注。其在膿毒血癥所致的ALI中的作用研究甚少。筆者通過(guò)膿毒血癥大鼠模型研究外源性IGF-1對(duì)肺部炎癥反應(yīng)損傷的影響，研究其對(duì)膿毒血癥引起ALI的肺保護(hù)作用，為臨床診治ALI提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

成年 Wistar大鼠 40 只（清潔級(jí)），體質(zhì)量（200±50）g，雌雄不限（深圳市疾病預(yù)防控制中心）；脂多糖（LPS，美國(guó)Sigma公司）；胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（Biovision 公司）；IL-6，IL-8 試劑盒（購(gòu)置武漢博士得公司），左側(cè)頸動(dòng)脈插管測(cè)量血壓（通過(guò)壓力換能器與BL-420E生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)連接以監(jiān)測(cè)動(dòng)脈壓）。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組及模型制備 將大鼠按照數(shù)字隨機(jī)法隨機(jī)分為4組：對(duì)照組，膿毒血癥模型組，IGF-1治療1組和治療2組，每組大鼠均10只。大鼠膿毒血癥模型參考文獻(xiàn)[3]方法制備：大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉40 mg/kg后經(jīng)股動(dòng)、靜脈分別置入導(dǎo)管測(cè)定平均動(dòng)脈壓和作為靜脈給藥的途徑。以平均動(dòng)脈壓持續(xù)地較基礎(chǔ)值降低25%～30%作為L(zhǎng)PS性休克的標(biāo)準(zhǔn)。除正常對(duì)照組外，其余3組給予靜脈注射LPS（15 mg/kg）。注射LPS后1 h，給予IGF-1治療1組和2組分別皮下注射IGF-1（50 μg/kg和 100 μg/kg）。

1.2.2 標(biāo)本收集 靜脈注射LPS后12 h，右心室穿刺采血2 mL離心15 min（3 000 r/min），取上液置于-80℃保存待測(cè)。快速處死動(dòng)物，打開(kāi)胸腔，結(jié)扎右側(cè)肺門，氣管內(nèi)置入18G靜脈套管，緩慢注射生理鹽3 mL，間隔30 s，反復(fù)抽吸2次后收集支氣管肺泡灌洗液，注入置于冰上的試管內(nèi)。重復(fù)此過(guò)程3次，共 9 mL，收集的灌洗液離心 15 min（3 000 r/min），取上液置于-80℃保存待測(cè)。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)和方法 采用ELISA法檢測(cè)各組大鼠血清及肺泡灌洗液IL-6和IL-8水平。IL-6和IL-8試劑盒購(gòu)置于武漢博士得公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 10.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用單因素方差分析，多組間比較采用Bonferroni檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組別大鼠血清IL-6和IL-8濃度水平比較

結(jié)果顯示，膿毒血癥模型組大鼠血清IL-6和IL-8濃度水平明顯高于對(duì)照組，也高于IGF-1治療1組和2組（均P＜0.05）。同時(shí)結(jié)果也顯示，IGF-1治療兩組膿毒血癥大鼠血清IL-6和IL-8濃度水平明顯低于IGF-1治療1組 （均P＜0.05）。 見(jiàn)表 1。

表1 各組大鼠血清IL-6和IL-8濃度水平比較（x±s，ng/mL，n=10）

2.2 不同組別大鼠肺泡灌洗液IL-6和IL-8濃度水平比較

結(jié)果顯示，膿毒血癥大鼠肺泡灌洗液IL-6和IL-8濃度水平明顯高于對(duì)照組，也高于IGF-1治療1組和2組（均P＜0.05）。同時(shí)結(jié)果也顯示，IGF-1治療2組膿毒血癥大鼠肺泡灌洗液IL-6和IL-8濃度水平明顯低于IGF-1治療1組（均 P＜0.05）。 見(jiàn)表 2。

3 討論

膿毒血癥和膿毒性休克是目前重癥監(jiān)護(hù)室（ICU）內(nèi)主要的死亡原因，也是目前重癥醫(yī)學(xué)研究的難點(diǎn)和熱點(diǎn)。膿毒血癥極易導(dǎo)致患者并發(fā)ALI，并且與SIRS和MODS密切相關(guān)。目前對(duì)膿毒血癥導(dǎo)致的ALI的具體機(jī)制尚不明確，但大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為：在致病因素的作用下，炎癥細(xì)胞和多種炎癥細(xì)胞因子相互作用下，經(jīng)過(guò)啟動(dòng)、放大和損傷等炎癥“級(jí)聯(lián)瀑布效應(yīng)”過(guò)程，導(dǎo)致失控性炎癥反應(yīng)，從而導(dǎo)致全身多器官損害?，F(xiàn)有的研究表明，IL-6和IL-8是上述級(jí)聯(lián)瀑布效應(yīng)的關(guān)鍵炎癥因子，與膿毒性血癥的病死率密切相關(guān)，同時(shí)可以敏感地反應(yīng)組織損傷程度[4]，同時(shí)也是反應(yīng)膿毒血癥導(dǎo)致的ALI的敏感指標(biāo)。

表2 各組大鼠肺泡灌洗液IL-6和IL-8濃度水平比較（x±s，ng/mL，n=10）

胰島素生長(zhǎng)樣因子-1（IGF-1）是一種肽類激素，IGF-1具有調(diào)控細(xì)胞分化和增殖的功能，也具有抑制細(xì)胞凋亡功能?，F(xiàn)有的研究表明，外源性IGF-1在重癥胰腺炎，心肌梗死及腦缺血性疾病中均有較好的抑制炎癥的作用[5]。因此，可推測(cè)外源性IGF-1對(duì)膿毒血癥所致的ALI也可能具有較好的肺保護(hù)作用。

動(dòng)物模型成功后筆者發(fā)現(xiàn)，膿毒血癥大鼠肺泡灌洗液IL-6和IL-8濃度水平與其血清水平同時(shí)上升，均高于對(duì)照組。這表明，膿毒血癥大鼠可以導(dǎo)致急性肺損傷，其與文獻(xiàn)報(bào)道相一致[5]。在給予IGF-1干預(yù)后發(fā)現(xiàn)，與未行干預(yù)組比較，干預(yù)組大鼠血清及肺泡灌洗液IL-6和IL-8濃度均低于未治療組，且濃度水平與治療劑量成負(fù)相關(guān)。這一研究表明，外源性IGF-1能夠?qū)δ摱狙Y大鼠ALI有著較好的肺保護(hù)作用。

炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激等作用途徑最終導(dǎo)致肺泡毛細(xì)血管屏障損害，最終發(fā)展成呼吸衰竭是ALI的主要機(jī)制。而研究表明，IL-6和IL-8在這一系列的炎癥反應(yīng)過(guò)程中起著重要的作用。外源性IGF-1對(duì)膿毒血癥大鼠肺保護(hù)作用的具體機(jī)制目前尚不明確。Warzecha等[6]研究發(fā)現(xiàn)，外源性IGF-1能夠減輕急性胰腺炎時(shí)胰腺組織白細(xì)胞的浸潤(rùn)和減少白細(xì)胞介素的產(chǎn)生而減輕胰腺的損害。國(guó)內(nèi)學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)IGF-1能夠通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡而減少重癥胰腺炎大鼠肺泡損害而起到肺保護(hù)的作用[7]。結(jié)合本研究，筆者推測(cè)外源性IGF-1通過(guò)抑制大鼠組織和肺泡細(xì)胞IL-6和IL-8分泌表達(dá)，同時(shí)也可能抑制膿毒血癥大鼠肺泡細(xì)胞凋亡，減輕肺組織的損傷起到肺保護(hù)作用。

綜上所述，膿毒血癥大鼠確實(shí)存在著ALI，外源性IGF-1能夠減輕膿毒血癥大鼠的肺損傷。雖然其具體的機(jī)制尚有待于進(jìn)一步研究，但為將來(lái)臨床治療因膿毒血癥所導(dǎo)致ALI的藥物研究提供了一定的理論基礎(chǔ)。

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