周曉明 王曉琴 李 波

(1.內(nèi)蒙古呼倫貝爾市食品藥品檢驗所，內(nèi)蒙古 呼倫貝爾 021008;2.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110)

塔日努蘇木朱爾散劑是由波葉大黃、狼毒、白礬3味藥組成的蒙藥復(fù)方制劑，具有清熱燥濕、殺蟲止癢的功效，用于治療皮炎、牛皮癬、濕疹、皮膚瘙癢。其中波葉大黃為方中主藥。波葉大黃(Rheum undulatum)，又名山大黃，為蓼科大黃屬藥用植物，屬呼倫貝爾市地產(chǎn)蒙藥材，有破積滯，行瘀血的作用，可用于癰腫疔毒，跌打瘀痛，口瘡糜爛等癥[1]。其根及根莖主要含有以大黃酚和大黃素為苷元的結(jié)合型蒽醌和游離型蒽醌;其中，游離型蒽醌中主要為大黃酚和大黃素甲醚[2]。為了保證產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量，本文選擇大黃酚作為質(zhì)量控制指標(biāo)，參照“中國藥典”2010年版一部“大黃”項下的含量測定方法[3]，采用高效液相色譜法建立了大黃酚的含量測定方法。并經(jīng)過方法學(xué)考察及陰性對照實驗，表明該方法重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)，方中其它組分對大黃酚的測定無干擾，可作為該復(fù)方制劑的質(zhì)控方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器:島津LC－2010A HT高效液相色譜儀;CBM－20A型控制器;SPD－10Avp型檢測器，LC solution色譜工作站。Sartorius Bp121S(0.1mg)、Bp211D(0.01mg)電子天平。

1.2 試劑與試藥:大黃酚對照品由中國藥品生物制品檢定所提供(批號110796－2003120);甲醇為色譜純;水為高純水，其它試劑均為分析純。蒙成藥塔日努蘇木朱爾散劑由呼倫貝爾市新巴爾虎右旗蒙醫(yī)醫(yī)院提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件:Diamonsil RP－C18色譜柱(250× 4.6mm，5μm);流動相為甲醇 －0.1%磷酸(85﹕ 15);柱溫30℃;檢測波長254nm;流速1mL·min－1;進(jìn)樣量10μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備:精密稱取大黃酚對照品適量，加甲醇制成每1mL含32.16μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備:取本品粉末約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液5mL，置燒瓶中，揮去溶劑，加8%鹽酸溶液10mL，超聲處理2min，再加三氯甲烷10mL，加熱回流1h，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10mL，合并三氯甲烷液，減壓回收溶劑至干，殘渣加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性空白對照溶液的制備:按處方比例并以相同工藝制備不含波葉大黃的空白樣品，按供試品溶液制備法制得陰性對照溶液。

圖1 HPLC色譜圖

2.3 空白陰性實驗:分別精密吸取對照品溶液、陰性空白對照溶液、供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果陰性空白對照溶液色譜圖中在與大黃酚對照品及供試品色譜圖相對應(yīng)的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，表明處方中其它組分對大黃酚的測定無干擾，在此條件下，大黃酚和相鄰成分完全分離。

2.4 線性關(guān)系考察:精密稱取大黃酚對照品約10mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度;精密量取0.5、2、3、4、5mL置25mL量瓶中，加甲醇稀釋到刻度，搖勻，各取10μL進(jìn)樣，按上述色譜條件測定，以峰面積對進(jìn)樣量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果大黃酚在 0.00804～0.0804μg·mL－1濃度范圍內(nèi)與封面積呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程為Y=518724X －1711.3，r=0.9995。

2.5 穩(wěn)定性試驗:取樣品含量測定項下制備的供試品溶液1份，分別于0、4、8、12、16、24h 進(jìn)樣測定，結(jié)果大黃酚峰面積基本不變，RSD為0.27%(n=6)。試驗結(jié)果表明，大黃酚在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 精密度試驗:精密吸取對照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積積分值，RSD為0.4%。試驗結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗:取同一批號樣品6份，約1.0g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法制得樣品溶液，按“2.1”項下的色譜條件分析，測得平均含量為1.457mg·g－1，RSD為1.8%，實驗結(jié)果表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.8 加樣回收率試驗:精密稱取已知大黃酚含量(含量為1.457mg·g－1)的樣品 9份，每份約 0.6g，分別精密加入濃度為0.143m·mL－1的大黃酚對照品甲醇溶液5mL、10mL、15mL，制成低、中、高3種濃度的溶液各3份，按供試品溶液的制備方法制得樣品溶液，按“2.1”項下的色譜條件分析，計算回收率。結(jié)果平均回收率為100.4%，RSD%為1.96%。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果

2.9 樣品的含量測定:取本品3個批號共6份，各約1.2g，按供試品溶液的制備方法處理，分別精密吸取供試品溶液與對照溶液各10μL注入液相色譜儀，按外標(biāo)法計算含量。三批樣品的測定結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 檢測波長的選擇:取大黃酚對照品溶液，于紫外－可見分光光度計上，自190nm－600nm做光譜掃描，結(jié)果大黃酚在255.5nm和428.5nm處有最大吸收，在428.5nm波長下，基線不穩(wěn)，結(jié)合“中國藥典”一部大黃酚含量測定項下的測定方法，選擇254nm作為檢測波長。

表2 樣品中大黃酚的含量測定結(jié)果

3.2 提取條件的選擇:參照《“中國藥典”2010年版一部“大黃”項下的含量測定方法，考慮到大黃酚易溶于三氯甲烷等低極性有機(jī)溶劑，故選擇用甲醇加熱回流提取，然后用三氯甲烷萃取。實驗中考察了提取3次、4次、5次、6次等不同提取次數(shù)對提取效率的影響，結(jié)果表明提取4次后供試品中大黃酚的含量最高，故將提取次數(shù)定為4次。

本實驗精密度及回收率試驗結(jié)果表明，該方法具有較好的準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性，可作為該制劑的含量測定方法。

[1]國家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會.中華本草[M]，第六卷.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999:2705.

[2]肖培根.大黃屬的植物親緣關(guān)系、化學(xué)成分與療效間聯(lián)系性的初步研究[J].藥學(xué)學(xué)報，1980，(1):33－39.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010版(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:22.