黃國勝

隨著分子生物學的發(fā)展，生長因子及其受體在指導肺癌的治療和判斷患者的預后中發(fā)揮了重要的作用。我們應用免疫組化法對非小細胞肺癌患者組織中的表皮生長因子受體(EGFR)和Ki-67進行檢測，以研究它們在肺癌組織中的表達及其意義。

1 資料與方法

1.1資料 收集我院2011年58例非小細胞肺癌手術(shù)患者的組織標本，男32例，女26例，年齡42～65歲;其中鱗癌22例，腺癌36例;Ⅲ期7例，Ⅳ期51例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16例。

1.2方法 對腫瘤蠟塊切片，進行免疫組化染色。應用二甲苯、乙醇脫蠟水化;3%雙氧水封閉內(nèi)源性酶，漂洗5 min后再用PBS漂洗15 min。抗原修復:將切片置于pH值為6的檸檬酸鹽緩沖液中，微波加熱至95℃，Ki-67修復30 min，EGFR修復5 min，自然冷卻至室溫，PBS緩沖液漂洗;用濃度為5%的小牛血清封閉內(nèi)源性酶，加抗EGFR及抗Ki-67，在37℃環(huán)境中濕盒培育1 h，PBS漂洗;最后用Zymed系統(tǒng)檢測后進行DAB顯色。

1.3結(jié)果判定 EGFR按陽性細胞所占的百分比分級:陰性為(-)，陽性 ＜30%為(+)，30% ～50%為(++)，50% ～75%為(+++)，＞75%為(++++)，對應分值為0～4分。Ki-67根據(jù)陽性腫瘤細胞的百分比分級，陰性為(-)，陽性 ＜25%為(+)，25% ～50%為(++)，50% ～75%為(+++)，＞75%為(++++)，對應分值分別為0～4分。

1.4統(tǒng)計學處理 采用SPSS 11.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料行χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1EGFR及Ki-67在肺癌組織中的表達 EGFR及Ki-67(見后插頁圖)在肺癌組織中表達的陽性率分別為60.34%和89.66%，與正常組織的陽性率分別為0和5.56%，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 EGFR及Ki-67在肺癌組織及肺部正常組織中的表達

3.2EGFR及Ki-67在肺癌組織中的陽性共表達情況，Ki-67與EGFR之間有明顯相關(guān)性(P＜0.05)。見表2。

表2 EGFR及Ki-67在肺癌組織中的陽性共表達情況

圖1 Ki-67在中分化鱗癌中的高表達(S-P×200)

圖2 EGFR在肺鱗癌細胞膜、細胞質(zhì)中表達(S-P×200)

3 討論

表皮生長因子受體(EGFR)是一種跨膜蛋白，含有118個氨基酸，細胞外的配體結(jié)合區(qū)含621個氨基酸，配體結(jié)合位點主要在294～543位氨基酸之間［1］。研究表明，Ki-67的表達科準確反映腫瘤細胞的增殖率，與多種腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移、預后有關(guān)［2］。本研究顯示，Ki-67在肺癌組織中陽性表達率為89.66%，而且在低分化腺癌組織中的表達較在中高分化腺癌組織的表達明顯升高，這表明Ki67染色陽性程度與組織學分期有一定的相關(guān)性，故Ki-67的檢測可作為判斷NSCLC預后的一種指標。

腫瘤的形成和發(fā)展是跟多因素、多基因相關(guān)，Ki-67與EGFR呈正相關(guān)，說明兩者在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中有一定的協(xié)同作用，其機制可能是EGFR的酪氨酸激酶活性使細胞內(nèi)酪氨酸殘基的磷酸化引起多種效應，包括蛋白激酶活化，蛋白質(zhì)和DNA合成增加，導致細胞增殖［3］。分子靶向治療在腫瘤的治療中顯現(xiàn)出療效確切、安全性好的優(yōu)勢，采用免疫組化法檢測肺癌中的多種生物指標可為臨床提供重要信息，并為肺癌患者接受分子靶向治療提供理論依據(jù)，而且簡易可行，值得臨床推廣使用。

［1］LAX I，BURGESS W H，BELLOT F.Localization of amajor receptor binding domain for epidermal growthfactor by affinity labeling.Mol Cell Biol，2008，8(4):1831-1834.

［2］Yang SX，He witt SM，Steinberg SM，et al.Expression levels ofe IF4E，VEGF，and cyclin D1，and correlation of eIF4E with VEGF and cyclin D1 in multitum or tissue microarray.Oncol Rep，2008，17(2):281-287.

［3］田韌，龔涌靈，楊勁松，等.胰腺癌組織中腫瘤生長因子-α和表皮生長因子受體的表達與胰周神經(jīng)侵犯的相關(guān)性研究.醫(yī)學研究生學報，2006，19(12):1105-1106.