孫明麗，陳美璞，王艷軍

(山東聊城第二人民醫(yī)院 1血液科，2風(fēng)濕科，山東 聊城 252601)

中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶活性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡病情活動(dòng)的研究

孫明麗1※，陳美璞2，王艷軍1

(山東聊城第二人民醫(yī)院1血液科，2風(fēng)濕科，山東 聊城 252601)

目的探討系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者的中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶活性與病情活動(dòng)的關(guān)系。方法100例SLE患者根據(jù)SLE疾病活動(dòng)指數(shù)計(jì)分按病情分為穩(wěn)定組、輕度活動(dòng)組、中度活動(dòng)組及重度活動(dòng)組，采用AS-BI法對外周血涂片進(jìn)行中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶(NAP)染色，觀察NAP陽性率及陽性積分，并與對照組進(jìn)行比較。結(jié)果穩(wěn)定組與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但輕度活動(dòng)組、中度活動(dòng)組、重度活動(dòng)組顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。輕度活動(dòng)組NAP陽性率及陽性積分低于穩(wěn)定組，高于中度活動(dòng)組及重度活動(dòng)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。中度活動(dòng)組與重度活動(dòng)組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。SLE各組總體與對照組相比NAP陽性率、陽性積分均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論NAP活性可反映SLE患者病情活動(dòng)的程度，是評定治療反應(yīng)與效果的重要參考指標(biāo)之一。

紅斑狼瘡;系統(tǒng)性;中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶;病情活動(dòng)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是一種以過量產(chǎn)生多種自身抗體和多器官受累為特征的自身免疫性疾病。SLE患者血液系統(tǒng)常受累，可伴發(fā)白細(xì)胞減少。對粒細(xì)胞功能的研究發(fā)現(xiàn)，SLE患者不僅粒細(xì)胞數(shù)目降低，粒細(xì)胞的吞噬和調(diào)理功能也異常［1］。中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶的活性與粒細(xì)胞吞噬功能有關(guān)。本研究對2003年1月至2009年12月我院就診的SLE患者，根據(jù)SLE疾病活動(dòng)指數(shù)進(jìn)行分組，并對各組患者中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶(neutyophil alkaline phosphatase，NAP)活性進(jìn)行分析研究，旨在探討NAP活性在SLE發(fā)生中的意義及與疾病活動(dòng)性的關(guān)系，為SLE的臨床診治提供一種新的參考指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 我院自2003年起對確診為SLE并納入NAP檢測初步研究階段的患者進(jìn)行跟蹤，資料完整的SLE患者共計(jì)100例次納入研究，其中，女87 例次，男13 例次，年齡(29.76 ±9.20)歲。所有病例符合美國風(fēng)濕病學(xué)會(ACR)1997年修正的SLE分類診斷標(biāo)準(zhǔn)［2-3］。疾病活動(dòng)度判斷根據(jù)SLE 疾病活動(dòng)指數(shù)計(jì)分法［4］，參照 Gladman 等［5］制訂的標(biāo)準(zhǔn)判斷：0～4分為基本無活動(dòng);5～9分為輕度活動(dòng);10～14分為中度活動(dòng)，≥15分為重度活動(dòng)。對照組為2005年我院健康查體者30例，年齡(28.2±8.6)歲。

1.2 方法

1.2.1 病例分組 根據(jù)SLE疾病活動(dòng)指數(shù)計(jì)分，按病情把這些病例分為4組：穩(wěn)定組、輕度活動(dòng)組、中度活動(dòng)組及重度活動(dòng)組。所有病例均于確診當(dāng)日采新鮮血涂片行中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶檢測。中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶檢測采用AS-BI法染色?；颊呙?周門診復(fù)診一次，除常規(guī)檢查狼瘡活動(dòng)性指標(biāo)外，均常規(guī)檢查NAP陽性率及陽性積分，同時(shí)記錄有無感染經(jīng)過及用藥情況。對照組為2005年我院健康查體者30例。

將上述病例資料分類輸入SPSS 11.5版本軟件中并建立數(shù)據(jù)庫。從中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶積分及血常規(guī)相關(guān)項(xiàng)水平來分析總結(jié)各組中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶積分及血常規(guī)的變化特點(diǎn)。

1.2.2 治療方法 確診后的患者均首先應(yīng)用糖皮質(zhì)激素治療，根據(jù)病情特點(diǎn)分別選用靜脈或口服?；颊卟∏檩^嚴(yán)重或口服藥物有禁忌者選用靜脈方案：甲潑尼龍40～80 mg，1次/d，靜脈滴注;危重患者甚至應(yīng)用500 mg/d，靜脈滴注沖擊治療;一般患者門診口服潑尼松，15～60 mg，1次/d。同時(shí)根據(jù)病情需要應(yīng)用免疫抑制劑環(huán)磷酰胺、硫唑嘌呤、硫酸羥基氯奎、來氟米特、嗎替麥考酚酯、環(huán)孢素等，治療過程中根據(jù)患者情況給予補(bǔ)鈣，保護(hù)胃黏膜及其他對癥處理的藥物。所有患者無論住院或門診詳細(xì)記錄病情及有無感染史。

1.2.3 觀察指標(biāo)以NAP陽性率與NAP陽性積分作為NAP活性的觀察指標(biāo) 實(shí)驗(yàn)操作均在本院血液實(shí)驗(yàn)室由同一人按照本室質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行標(biāo)本取材、染色、閱片，每例標(biāo)本均取3張以上血涂片，選取材、涂片、染色良好者統(tǒng)計(jì)算分。觀察組與對照組均采用新鮮血涂片，采用AS-BI法［6-7］染色。每例標(biāo)本染色時(shí)采用細(xì)菌性感染患者的新鮮血涂片作對照，對照血片染色呈強(qiáng)陽性時(shí)，認(rèn)為觀察標(biāo)本染色無誤差。NAP陽性率(%)：計(jì)數(shù)100個(gè)成熟中性粒細(xì)胞(包括中性桿狀核細(xì)胞)，記錄呈陽性反應(yīng)的細(xì)胞數(shù)。陽性反應(yīng)為胞質(zhì)中可見藍(lán)色顆粒。陽性反應(yīng)強(qiáng)度分級標(biāo)準(zhǔn)見表1。

表1 NAP陽性反應(yīng)強(qiáng)度分級標(biāo)準(zhǔn)

1.3 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用F檢驗(yàn)，各組間比較采用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各調(diào)查組間NAP陽性率及陽性積分的比較SLE各組總體與對照組相比NAP陽性率、陽性積分均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)(表2)。

表2 病情活動(dòng)組與對照組間NAP陽性率及陽性積分的比較

2.2 各組間NAP陽性率及陽性積分比較 各組間NAP陽性率及陽性積分比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。穩(wěn)定組與對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，輕度活動(dòng)組、中度活動(dòng)組、重度活動(dòng)組顯著低于對照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。輕度活動(dòng)組NAP陽性率及陽性積分低于穩(wěn)定組，高于中度活動(dòng)組及重度活動(dòng)組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。中度活動(dòng)組與重度活動(dòng)組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表3、表4)。

表3 各組NAP陽性率的兩兩比較

表4 各組NAP陽性積分的兩兩比較

3 討論

NAP存在于成熟的中性粒細(xì)胞的胞質(zhì)中，其活性與白細(xì)胞總數(shù)無關(guān)，與細(xì)胞的成熟程度有關(guān)。關(guān)于NAP的調(diào)節(jié)，目前尚不十分明了。本研究通過總結(jié)文獻(xiàn)及臨床觀察，認(rèn)為有以下幾點(diǎn)可以證實(shí)NAP活性與粒細(xì)胞吞噬功能有關(guān)：①電鏡下發(fā)現(xiàn)中性粒細(xì)胞的胞質(zhì)中存在一種區(qū)室，而NAP只存在于粒細(xì)胞的這種區(qū)室的膜上，是其膜標(biāo)志，同時(shí)發(fā)現(xiàn)這種區(qū)室代表了中性粒細(xì)胞的吞噬泡的特征［8］，可以說區(qū)室是中性粒細(xì)胞吞噬功能的基本單位，NAP可能是這種吞噬功能的基本成分。②眾所周知，中性粒細(xì)胞越成熟，其吞噬功能越強(qiáng)，同時(shí)，研究證明，中性粒細(xì)胞越成熟，NAP活性越高，間接證明以上觀點(diǎn)。③文獻(xiàn)表明，NAP活性與腎上腺皮質(zhì)激素、性激素有關(guān)［9］。在各種應(yīng)激狀態(tài)下，垂體腎上腺皮質(zhì)功能加強(qiáng)，NAP活性相應(yīng)增強(qiáng)，同時(shí)其中性粒細(xì)胞的吞噬功能也是活躍的［10］。因此，從理論上講，中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶活性應(yīng)該與SLE的病情變化有一定相關(guān)性。

SLE引起粒細(xì)胞減少的病因可能有：①藥物反應(yīng)，即治療SLE的免疫抑制劑如環(huán)磷酰胺、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤等所致的粒細(xì)胞減少。②粒細(xì)胞抗體導(dǎo)致粒細(xì)胞破壞及骨髓產(chǎn)生粒細(xì)胞減少。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在SLE患者的粒細(xì)胞表面能檢測到高水平的IgG，提示粒細(xì)胞減少系抗體介導(dǎo)所致。其次，體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)SLE患者T細(xì)胞能抑制骨髓粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞集落形成單位，而致粒細(xì)胞產(chǎn)生減少，此系細(xì)胞免疫異常所致。同時(shí)對粒細(xì)胞功能研究發(fā)現(xiàn)，活動(dòng)期SLE患者粒細(xì)胞的趨化因子產(chǎn)生減少，吞噬和調(diào)理功能降低［1］。

此外，SLE多見于生育期的女性，性激素在SLE的發(fā)病機(jī)制和病程中發(fā)揮重要的作用。在SLE的女性和男性患者及他們的一級親屬中，16α羥雌酮和雌三醇增高，16α羥雌酮為活性很強(qiáng)的雌激素，與蛋白結(jié)合后有很強(qiáng)的抗原性，可影響細(xì)胞功能并產(chǎn)生抗雌激素抗體。NAP的活性受腎上腺皮質(zhì)激素、雌激素等的影響較大，凡使上述物質(zhì)增多的因素都可使NAP活性增高［11］。由此推斷，SLE患者NAP活性應(yīng)該是增高的，但事實(shí)并非如此。研究還發(fā)現(xiàn)，16α羥雌酮的水平與SLE的活動(dòng)性并無關(guān)系，而SLE的活動(dòng)性與雄激素水平的低下有關(guān)。睪酮的17位碳的氧化速度加快，使代謝產(chǎn)物活性降低。SLE婦女雄激素水平下降，狼瘡活動(dòng)時(shí)水平最低。雄激素水平下降，對機(jī)體的影響減低，相對地表現(xiàn)出雌激素對機(jī)體的影響提高。因此，是否可以認(rèn)為NAP活性降低主要與雄激素水平降低有關(guān)，而不是與雌激素水平相對升高有關(guān)，還需要進(jìn)一步研究證實(shí)。

新近的研究顯示，SLE患者外周血B細(xì)胞和單核細(xì)胞自身產(chǎn)生的白細(xì)胞介素(interleukin，IL)-10較正常對照組明顯升高;外周血單個(gè)核細(xì)胞中非T細(xì)胞亞群的IL-10轉(zhuǎn)錄表達(dá)增加，而且，SLE患者血清中IL-10水平較對照組也高［12］(878)。而IL-10可抑制腫瘤壞死因子α、IL-1β和IL-8的釋放，還破壞IL-1β從脂多糖激活的中性粒細(xì)胞上轉(zhuǎn)錄。IL-1β可促使髓過氧化物酶釋放，IL-8是一種非常強(qiáng)效的中性粒細(xì)胞吸引劑和激活劑，因此IL-10對中性粒細(xì)胞促進(jìn)炎癥進(jìn)程起限制作用［8］(794)。上述因素是否是NAP活性降低的原因，有待進(jìn)一步考證。

本研究結(jié)果顯示，NAP活動(dòng)度及陽性積分在SLE患者穩(wěn)定組與對照組中比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，輕度活動(dòng)組、中度活動(dòng)組、重度活動(dòng)組均顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。中度活動(dòng)組、重度活動(dòng)組與輕度活動(dòng)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。中度活動(dòng)組與重度活動(dòng)組比較無明顯差異。隨著SLE病情加重，NAP陽性率和陽性積分降低。這提示NAP活性可在一定程度上反映SLE的病情變化。

本研究中，對病情活動(dòng)度的分類采用了等級分類法，更能客觀地評價(jià)和反映病情的真實(shí)活動(dòng)性，而以往相關(guān)文獻(xiàn)絕大多數(shù)把病情活動(dòng)度分為活動(dòng)期與穩(wěn)定期(是疾病活動(dòng)譜的兩個(gè)極端)來統(tǒng)計(jì)分析的，有可能增加組間差異。當(dāng)然，僅憑NAP活性來判斷SLE的病情活動(dòng)性是有限的，必須結(jié)合臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)(如血常規(guī)、紅細(xì)胞沉降率、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4)對每位患者病情活動(dòng)性進(jìn)行綜合評價(jià)，才能客觀地評價(jià)和反映病情的真實(shí)活動(dòng)性。

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Study of the Relationship between Neutrophilic Alkaline Phosphatase Activity and the Disease Activi-ty of the Systemic Lupus Eryhematosus

SUN Ming-li1，CHEN Mei-pu2，WANG Yan-jun1.(1.Department of Hematology，2.Department of Rheumatology，Liaocheng Second People's Hospital，Liaocheng252601，China)

ObjectiveTo study the relationship between neutrophilic alkaline phosphatase activity and the disease activity of the systemic lupus erythematosus(SLE).Methods100 SLE cases were divided into 4 groups according to the disease activity based on SLE DAI，i.e.basically inactive group，slightly active group，moderately active group and heavily active group.AS-BI method was used to NAP staining of peripheral blood smear，positive rate and positive score of NAP was observed，and compared with the control group.ResultsThe positive rate and positive score of NAP in basically inactive group and the control group were not statistically different(P＞0.05)，but those in slightly active group，moderately active group and heavily active group were decreased than the control group(P＜0.01).The positive rate and positive score of NAP in slightly active group were decreased than that in basically inactive group but improved than those in moderately active group and heavily active group(P＜0.01).That had no statistical significance in moderately active group than that in heavily active group(P＞0.05).Their levels had statistical significance in different groups of SLE and the control group(P＜0.01).ConclusionNAP activity can reflect disease active degree of SLE patients，which is one of the important reference indexes for judging the treatment response and effectiveness.

Erythema lupus;Systematical;Neutrophilic alkaline phosphatase;Disease activity

R593.241

A

1006-2084(2012)13-2113-03

2011-12-05

2011-01-28 編輯：樓立理