董學(xué)君 金龍金 呂建新

乳腺癌發(fā)病率占婦科腫瘤的31%，病死率在腫瘤中居第2位;近年來乳腺癌發(fā)病率有升高趨勢。乳腺癌早期診斷和早期治療，是降低病死率的有效方法，但至今為止仍缺乏有效的早期實(shí)驗(yàn)室診斷指標(biāo)。CA15-3是目前應(yīng)用最多的乳腺癌指標(biāo)，但只有不足10%的早期乳腺癌和30%～75%的晚期乳腺癌患者出現(xiàn)陽性結(jié)果［2，3］。在乳腺癌血清學(xué)指標(biāo)的研究中，除CA153外，還涉及hMAM、NF-κB、OPN和MMP-13等，但這些指標(biāo)對(duì)乳腺癌診斷的臨床價(jià)值尚無明確的結(jié)論，本文就這些指標(biāo)在乳腺癌診斷中的價(jià)值做進(jìn)一步驗(yàn)證和比較。

材料與方法

1.臨床資料:乳腺癌女性患者血清標(biāo)本共59例，患者平均年齡43.6(31～58)歲，均取自浙江省紹興市人民醫(yī)院就診患者;同時(shí)取正常對(duì)照的健康女性外周血標(biāo)本35例，對(duì)照者平均年齡40(18～50)歲。各取每例外周血5ml，3000g/min離心5min，上層血清轉(zhuǎn)移至EP管中，-80℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?9例乳腺癌患者均經(jīng)病理確診，分期為:Ⅰ期15例、Ⅱ期19例、Ⅲ期19例和Ⅳ期6例。

2.主要試劑:hMAM、NF-κB、OPN 和 MMP-13采用ELISA法檢測，試劑產(chǎn)于美國RD公司;CA153采用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀檢測，試劑產(chǎn)于美國雅培公司。

3.主要設(shè)備:MK-3酶標(biāo)儀(國鼎環(huán)科技術(shù)有限公司)，i2000免疫化學(xué)分析儀(美國雅培公司)，超低溫冰箱(SANYO公司)。

4.檢測方法:hMAM、NF-κB、OPN 和 MMP-13的 ELISA檢測方法，均參照說明書，以空白為對(duì)照，450nm波長測量OD值，標(biāo)準(zhǔn)品定標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，換算出血清中各指標(biāo)的濃度。血清CA15-3濃度采用美國雅培i2000免疫化學(xué)分析儀進(jìn)行檢測，按說明書操作進(jìn)行。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:運(yùn)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料應(yīng)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)來描述，陽性率的比較采用卡方檢驗(yàn);ROC曲線評(píng)價(jià)各指標(biāo)的診斷價(jià)值，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1.乳腺癌患者血清5種指標(biāo)檢測結(jié)果:乳腺癌和正常對(duì)照組5項(xiàng)指標(biāo)陽性率的比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的有 hMAM、NF-κB、CA153和 OPN(表1)。

表1 5項(xiàng)指標(biāo)在乳腺癌和正常對(duì)照組的陽性率［n(%)］

2.5 種指標(biāo)診斷乳腺癌的臨床價(jià)值:5項(xiàng)指標(biāo)經(jīng)ROC曲線分析(圖1)，獲得診斷的cut-off值及診斷敏感性和特異性(表2)。根據(jù)診斷效能排列，診斷價(jià)值從高到低的順序?yàn)?hMAM、NF-κB、CA153、OPN和MMP-13。

3.5種指標(biāo)與乳腺癌不同分期的關(guān)系:不同病理分期各指標(biāo)診斷效能的統(tǒng)計(jì)分析，CA153和OPN最好，用于與其他期的區(qū)分具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表3)。

圖1 5項(xiàng)指標(biāo)ROC曲線分析

表2 5項(xiàng)指標(biāo)cut-off值及敏感性和特異性

討 論

本組結(jié)果顯示，診斷乳腺癌的綜合效能hMAM和NF-κB的效果更佳，其次是CA153、OPN和MMP-13。

hMAM基因的cDNA序列長503bp，其中開放閱讀框279bp，共編碼93個(gè)氨基酸，相對(duì)分子質(zhì)量10.5kDa。原發(fā)性乳腺癌hMAM表達(dá)約有81%陽性，有23%hMAM過度高表達(dá)，有的高出正常乳腺組織10倍;hMAM表達(dá)與腫瘤分級(jí)、分期、組織學(xué)分類和激素受體狀況無明顯相關(guān)性［4］。但也有不同的結(jié)果，原發(fā)和繼發(fā)性乳腺癌活檢組織中有70%～80%為hMAM表達(dá)陽性;原發(fā)性乳腺癌細(xì)胞hMAM表達(dá)高達(dá)97%，hMAM與親脂素B的表達(dá)在雌激素受體(ER)陽性癌中更多見［5］。免疫組化技術(shù)和反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測hMAM均有報(bào)道，不同方法學(xué)的hMAM表達(dá)陽性率有一定差異，但非乳腺癌組織中均未見hMAM表達(dá)。本文作者曾建立并報(bào)道了定量RT-PCR檢測外周血中hMAM表達(dá)的方法，其靈敏度達(dá)到每104～105個(gè)血細(xì)胞中1個(gè)乳腺癌細(xì)胞的水平［6，7］;觀察到乳腺癌不同細(xì)胞株hMAM表達(dá)程度存在較大的差異。本研究是應(yīng)用ELISA方法檢測hMAM的表達(dá)，方法學(xué)更簡便易行，但結(jié)果仍提示對(duì)乳腺癌有較好的診斷價(jià)值。NF-κB是具有多種生物學(xué)活性的轉(zhuǎn)錄因子，正常細(xì)胞中NF-κB主要存在于胞質(zhì)中，與IκB結(jié)合形成無活性的三聚體。當(dāng)細(xì)胞受刺激時(shí)，NF-κB主要通過p65亞基在細(xì)胞核中調(diào)控多種基因的表達(dá)，在腫瘤形成和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用［8］。目前國內(nèi)外多數(shù)研究表明，乳腺癌組織 NF-κB表達(dá)與乳腺癌的轉(zhuǎn)移及HER2高表達(dá)相關(guān);本組結(jié)果中，乳腺癌患者NF-κB高表達(dá)，可能也是相同的原因。OPN是細(xì)胞外基質(zhì)中一種分泌性磷酸化糖蛋白，最初分離于骨基質(zhì)和牙齒中［9］。近年來越來越多的研究發(fā)現(xiàn)OPN與全身多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后相關(guān)，是一種惡性腫瘤生長的血清學(xué)指標(biāo)［10］;本組結(jié)果顯示，OPN與CA153在不同病理分期(Ⅰ～Ⅳ期)間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并為晚期升高更明顯，說明這2個(gè)指標(biāo)在乳腺癌早期表達(dá)陽性率低，提示當(dāng)前應(yīng)用最多的CA153用于早期診斷的價(jià)值有限。對(duì)乳腺癌診斷應(yīng)用中，MMP-13的價(jià)值相對(duì)較差。

表3 5項(xiàng)指標(biāo)在不同病理分期的陽性率［n(%)］

目前，早期乳腺癌診斷仍無理想的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，本組各指標(biāo)對(duì)Ⅰ～Ⅳ期乳腺癌的區(qū)分效果分析顯示，CA153和OPN指標(biāo)的價(jià)值較大，但如何提高診斷的靈敏度，做到更早期診斷，還需進(jìn)一步研究。

1 Liu SH，Liu YF，Liou SH，et al.Mortality and cancer incidence among physicians of traditional Chinese medicine:a 20-year national follow-up study［J］.Occup Environ Med，2010，67(3):166-169

2 Catto JW，Abbod MF，Wild PJ，et al.The application of artificial intelligence to microarray data:identification of a novel gene signature to identify bladder cancer progression［J］.Eur Urol，2010，57(3):398-406

3 Barraclough DL，Sewart S，Rudland PS，et al.Microarray analysis of suppression subtracted hybridisation libraries identifies genes associated with breast cancer progression［J］.Cell Oncol，2010，32(1-2):87-99

4 Gal S，F(xiàn)idler C，Lo YM，et al.Detection of mammaglobin mRNA in the plasma of breast canaer patients［J］.Ann N Y Acad Sci，2001，945:192-194

5 潘自鐵.人乳腺珠蛋白的研究進(jìn)展［J］.國外醫(yī)學(xué):臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè)，2004，25(3):249-251

6 O'Brien N，Maguire TM，O'Donovan N，et al.Mammakglobin a:a promising marker for breast cancer［J］.Clin Chem，2002，48(8):1362-1364

7 董學(xué)君，黃黎明，施長根，等.人乳房珠蛋白外周血表達(dá)RT-PCR檢測及乳腺癌診治應(yīng)用［J］.醫(yī)學(xué)研究通訊，2005，34(10):12-14

8 周潔，陳虎，鄭海，等.Celecoxib可通過抑制核轉(zhuǎn)錄因子-κB活性誘導(dǎo)SGC7901/ADR細(xì)胞的凋亡［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2010，9:1269-1271

9 Sodek J，Ganss B，McKee MD.Osteopontin［J］.Crit Rev Oral Biol Med，2000，11(3):279-303

10 Chaudary N，Hill RP.Increased expression of metastasis-related genes in hypoxic cells sorted from cervical and lymph nodal xenograft tumors［J］.Lab Invest，2009，89(5):587-596