張智軍 崔 華 馬久太

(1彬縣食品藥品監(jiān)督管理局，陜西省彬縣西大街老政府院內(nèi)，713500;2陜西摩美得制藥有限公司;3陜西步長(zhǎng)制藥有限公司)

抗骨增生片由熟地黃、鹿銜草、骨碎補(bǔ)、雞血藤、淫羊藿、肉蓯蓉、萊菔子等七味中藥組成，具有補(bǔ)腎、活血、止痛的功能，主治肥大性脊椎炎、頸椎病、跟骨刺、增生性關(guān)節(jié)炎、大骨節(jié)病，效果良好［1］。為了更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，我們?cè)谄湓|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，對(duì)骨碎補(bǔ)中的有效成分柚皮苷進(jìn)行了含量測(cè)定，并對(duì)方法學(xué)進(jìn)行了研究，報(bào)道如下。

1 儀器與試劑

高效液相色譜儀(島津LC-20AD);色譜工作站(島津LC-solution);紫外檢測(cè)器(島津SPD-M20A);電子天平(梅特勒-奧豪斯AR1140);超聲波清洗器(昆山KQ-250V)。

柚皮苷對(duì)照品(購于中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)110722-200809，供含量測(cè)定用);抗骨增生片(陜西摩美得制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)050615、050616、050617);乙腈為色譜純;用水為重蒸水;其他試劑為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;檢測(cè)波長(zhǎng)283nm;乙腈-水-冰醋酸(14∶86∶4)為流動(dòng)相;流速 1.0mL·min-1;柱溫40℃;理論塔板數(shù)以柚皮苷計(jì)算應(yīng)不低于2000。在此色譜條件下供試品分離度高，陰性無干擾。

2.2 供試品溶液的制備 取本品10片，研細(xì)，取0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，回流提取60min，取出，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察 精密稱取柚皮苷對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含7.1μg的溶液，搖勻，作為對(duì)照品溶液，分別精密吸取對(duì)照品溶液 4、6、8、10、12、14μL，分別注入液相色譜儀，記錄峰面積，結(jié)果見表1。以C代表進(jìn)樣量、A代表峰面積，計(jì)算回歸方程為 A=3325664.59C-7467.15，r=0.9999;柚皮苷在 0.0284～0.0994μg之間有良好的線性關(guān)系。

表1 柚皮苷線性關(guān)系考察結(jié)果

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取柚皮苷對(duì)照品溶液(7.1μg·mL-)10μL，按照上述色譜條件，注入液相色譜儀中，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果見表2。結(jié)果對(duì)照品溶液峰面積RSD為1.01%，表明本方法精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品(批號(hào)050615)適量，制備供試品溶液，按照上述色譜條件，分別于 0、2、4、8、16h，注入液相色譜儀中，記錄峰面積，結(jié)果見表3。結(jié)果表明，供試品溶液峰面積在16h內(nèi)RSD為1.72%，表明本方法穩(wěn)定性良好。

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取樣品(批號(hào)050615)適量，6份，制備供試品溶液，按照上述色譜條件，制備供試品溶液，按照上述色譜條件，注入液相色譜儀中，記錄峰面積，結(jié)果見表4。結(jié)果表明，樣品含量RSD為1.77%，表明本方法重現(xiàn)性良好。

表4 柚皮苷重現(xiàn)性試驗(yàn)

2.7 回收率試驗(yàn) 取樣品(批號(hào)050615)0.2g，各6份，精密稱定，同時(shí)加入樣品中含量80%、100%和120%的柚皮苷對(duì)照品，制備供試品溶液，按照上述色譜條件，注入液相色譜儀中，記錄峰面積，結(jié)果見表5。結(jié)果表明，平均回收率為98.76%，RSD為0.68%，表明本方法回收率良好。

表5 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品測(cè)定 按照上述方法制備供試品溶液，參照上述色譜條件操作，測(cè)定含量，結(jié)果見表6。藥品的質(zhì)量，受藥材、設(shè)備、工藝等多種因素影響，根據(jù)3批抗骨增生片的含量測(cè)定結(jié)果，在其含量平均值0.66mg·g-1的基礎(chǔ)上，以70%轉(zhuǎn)移率計(jì)算，暫定抗骨增生片中柚皮苷含量限度為每1片不得低于0.66×0.4×70%=0.18mg，從而保證了產(chǎn)品的安全與有效。

表6 抗骨增生片柚皮苷含量測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

1)骨碎補(bǔ)為抗骨增生片中的臣藥，柚皮苷為其主要有效成分，具有補(bǔ)肝腎強(qiáng)筋骨的作用，可促進(jìn)骨損傷骨質(zhì)生長(zhǎng)、預(yù)防激素性骨質(zhì)疏松、抗炎、鎮(zhèn)痛、降血脂作用、強(qiáng)心、鎮(zhèn)靜［2］。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒有含量測(cè)定項(xiàng)目，為了更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，我們對(duì)骨碎補(bǔ)中的有效成分進(jìn)行了含量測(cè)定。

2)柚皮苷含量測(cè)定方法有分光光度法［3］、薄層掃描法［4］、高效液相色譜法［5］等，本產(chǎn)品采用高效液相色譜法對(duì)抗骨增生片中的柚皮苷進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果平均回收率為98.76%，RSD為0.68%，方法靈敏、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。

3)實(shí)驗(yàn)中［5-6］曾選用甲醇-醋酸-水(35:4:65)、乙腈-水-冰醋酸(20∶80∶4)、乙腈-水 -冰醋酸(14∶86∶4)為流動(dòng)相，結(jié)果前2個(gè)條件未能達(dá)到滿意分離效果;后者分離度好，陰性無干擾，所以實(shí)驗(yàn)最終選用后者為流動(dòng)相。

試驗(yàn)研究［7-8］中曾考察了柚皮苷的不同提取方法，結(jié)果以回流提取法＞索氏提取法＞超聲提取法，說明溫度較高條件下柚皮苷容易提取;同時(shí)回流提取60min，能夠?qū)⒖构窃錾需制ぼ仗崛⊥耆?/p>

［1］抗骨增生片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)WS3-B-1338-93).中華人民共和國衛(wèi)生部部頒標(biāo)準(zhǔn)《中藥成方制劑》第七冊(cè)［S］.1993:74.

［2］陳順，關(guān)延彬.骨碎補(bǔ)藥理作用的研究進(jìn)展［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2006，25(7):685-687.

［3］范曉清，李雪婷，王沛.紫外分光光度法測(cè)定痛風(fēng)寧微丸中柚皮苷的含量［J］.中國衛(wèi)生工程學(xué)，2011，10(3):247-248.

［4］李曉光，林勵(lì)，陳志霞.薄層掃描法測(cè)定化橘紅中柚皮苷的含量［J］.浙江中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，27(1):82.

［5］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2010年版一部［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，239.

［6］郭麗紅，鄭國鈞，苗愛東.高效液相色譜法測(cè)定解表清肺丸中柚皮苷、橙皮苷、黃芩苷的含量［J］.藥物分析雜志，2009，29(9):1493-1495.

［7］于宏偉，谷維娜，李娜.柚皮苷的提取方法及其應(yīng)用研究進(jìn)展［J］.湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，50(8):1516-1518.

［8］陳永剛，林勵(lì)，魏燕華.超聲波提取法與索氏提取法提取化橘紅柚皮苷的比較研究［J］.中藥新藥與臨床藥理，2008，19(4):309-311.