鄭松柏，莊 艷，肖 立，項 平，季大年，張 偉，殷于磊，陳敏敏

（復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院老年醫(yī)學(xué)科, 上海 200040）

組織器官的衰老或老化（或稱增齡變化）規(guī)律對闡明老年病發(fā)病機制、指導(dǎo)老年病合理診治具有重要意義。衰老一般表現(xiàn)為組織結(jié)構(gòu)退化、器官功能減退，因此，過去一直認(rèn)為胃酸的分泌也是隨增齡而下降的，即老年人是缺少胃酸的。但自20世紀(jì)90年代初起，陸續(xù)有學(xué)者對健康老年人的胃酸進(jìn)行了深入研究，發(fā)現(xiàn)并非如此，研究表明，健康老年人的胃酸分泌與中青年人相當(dāng)。本研究試圖通過研究“相對正常胃”的胃底腺組織學(xué)和壁細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)増齡變化，進(jìn)一步闡明老年人仍有良好的泌酸功能這一事實。

1 對象與方法

1.1 對象

2010年5月至2010年9月，因消化不良癥狀在復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院擬行胃鏡檢查的并符合下列條件的患者列為研究對象：（1）既往無胃十二指腸潰瘍、胃十二指腸惡性腫瘤、胃泌素瘤以及胃十二指腸手術(shù)等病史；（2）胃鏡檢查前2周內(nèi)未服用過質(zhì)子泵抑制劑及H2受體拮抗劑、抗血小板藥物（阿司匹林、氯吡格雷）、抗凝藥（肝素、華法林等）、糖皮質(zhì)激素和其他非甾體抗炎藥物；（3）吸煙每天≤5支，每日飲酒折合酒精量≤25g；（4）胃鏡檢查前2周內(nèi)未服用人參、螺旋藻等保健品；（5）胃鏡下無明顯充血、水腫、糜爛及潰瘍（包括活動期、愈合期和疤痕期）等病變且經(jīng)常規(guī)活檢病理證實無活動性炎癥、腸化、癌前病變（異型增生）；（6）胃鏡下活檢胃黏膜標(biāo)本Giemsa染色、快速尿素酶試驗及13C尿素呼氣試驗幽門螺桿菌檢測結(jié)果均為陰性；（7）胃體黏膜組織學(xué)檢查無明顯炎癥。符合上述條件者共有50例，按年齡分組，其中中青年組（20～59歲）19例, 老年組（≥60歲）31例。老年組中包括60～69歲組11例,70～79歲組10例, ≥80歲組10例。

1.2 方法

1.2.1 取材 胃鏡檢查前1天晚上20：00后禁食、禁飲，當(dāng)日上午7：00至8：30行胃鏡檢查。經(jīng)仔細(xì)觀察符合前述內(nèi)鏡下入選條件后，在胃鏡下活檢胃體和胃竇黏膜各2塊，胃竇2塊取自距幽門2～3cm處的大彎和小彎各1塊，胃體2塊取自距賁門8 cm處的大彎(約胃體大彎中上部)，大小約2mm×2mm，深達(dá)黏膜肌層。胃竇2塊標(biāo)本做常規(guī)病理檢查，胃體1塊標(biāo)本做常規(guī)病理組織學(xué)檢查，另1塊胃體標(biāo)本做電子顯微鏡檢查。

1.2.2 光學(xué)顯微鏡標(biāo)本制作及觀察 活檢標(biāo)本置10%中性緩沖福爾馬林固定8 h，經(jīng)梯度乙醇脫水，石蠟包埋后冷卻，組織切片機切成4μm石蠟切片，HE染色，二甲苯脫蠟，樹脂封片，將其在zeiss顯微鏡 Scope.A1下觀察。同時測定以下數(shù)值：（1）低倍視野（×100）下采集圖像，用i-SolutionTM軟件系統(tǒng)，測定固有膜厚度，從上皮到黏膜肌層以上（不包括黏膜肌層），單位μm，每個標(biāo)本取不同部位3個，計算平均值，同一軟件系統(tǒng)測出固有膜內(nèi)腺體實質(zhì)占固有膜的面積百分比；（2）高倍視野（×400）下采集圖像，隨機觀察5個胃底腺，計算每個胃底腺中含壁細(xì)胞個數(shù)和細(xì)胞總數(shù)的比例，然后取平均值。

1.2.3 電子顯微鏡標(biāo)本制作及觀察 胃鏡活檢標(biāo)本置2.5%戊二醛電鏡固定液4℃ 2h，0.1mol/L磷酸緩沖液漂洗15 min×3次，用1%OsO4后固定1 h，接著0.1mol/L磷酸緩沖液漂洗15 min×3次，50%、70%、90%乙醇溶液， 90%乙醇和90%丙酮混合液，90%丙酮溶液， 100%丙酮室溫下各脫水15 min×3次。純丙酮+618環(huán)氧樹脂包埋劑（2︰1）混合室溫浸透3 h，純丙酮+618環(huán)氧樹脂包埋劑（1︰2）混合室溫浸透過夜，618環(huán)氧樹脂包埋劑37℃浸透2 h。LKB-1型超薄切片機（瑞典Leica）切片，切片厚度50 nm。枸櫞酸鉛和醋酸雙氧鈾雙染色。CM120透射電子顯微鏡觀察并拍照。每個標(biāo)本隨機選取3個壁細(xì)胞，SigmaScan Pro 5圖像分析軟件分別測定壁細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)面積、線粒體面積和管泡系統(tǒng)面積，計算出線粒體面積分?jǐn)?shù)和管泡系統(tǒng)面積分?jǐn)?shù)，取其平均值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS16.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。多組間比較采用單因素方差分析或Kruskal-Wallis秩和檢驗，兩組間采用獨立樣本t檢驗或Kruskal-Wallis秩和檢驗。P值均為雙側(cè)檢驗,且P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 胃底腺組織學(xué)的增齡變化

共收集符合前述要求的標(biāo)本50例，常規(guī)病理檢查結(jié)果顯示胃竇部多為慢性非萎縮性胃炎，少數(shù)為慢性萎縮性胃炎。光學(xué)顯微鏡下胃體黏膜可看到固有膜組織，表面小凹長度約為固有膜的1/4，其下為排列緊密的胃底腺體。在胃底腺的底部主要由分泌胃蛋白酶原的主細(xì)胞組成，主細(xì)胞呈立方狀，細(xì)胞核位于基底部，可見一至多個小核仁，胞質(zhì)呈淡嗜堿性顆粒狀。腺體的峽部主要含有略呈三角狀、基部位于基底膜的壁細(xì)胞，細(xì)胞核位于中央，染色質(zhì)均勻，胞質(zhì)嗜酸性顆粒狀。而在腺體的頸部是由主細(xì)胞、壁細(xì)胞和頸粘液細(xì)胞混合組成。在各年齡組，固有膜腺體的形態(tài)和細(xì)胞的分布無明顯差異。在固有腺體之間是少量血管纖維間質(zhì)，散在少量淋巴細(xì)胞（圖1）。

所測各年齡組的固有膜厚度、腺體實質(zhì)比及壁細(xì)胞比例見表1。各年齡組間固有膜平均厚度采用單因素方差分析，F(xiàn)＝2.639，P＝0.061，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。各年齡組間胃底腺實質(zhì)比例均值采用Kruskal-Wallis秩和檢驗，Chi-square＝8.752，P＝0.033，認(rèn)為各組在分布上不相同，60～69歲組和≥80歲組實質(zhì)比較高。各年齡組間壁細(xì)胞細(xì)胞數(shù)目占胃底腺細(xì)胞總數(shù)比例均值采用單因素方差分析，F(xiàn)＝1.066，P＝0.373，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

圖1 各年齡組胃體黏膜顯微圖片F(xiàn)igure 1 Microphotographs of gastric mucosal sections from gastric corpus

表1 各年齡組的固有膜厚度、腺體實質(zhì)比及壁細(xì)胞比例比較Table 1 Comparison of the lamina propria thickness, average ratio of Np to Na and Ap to Af among four groups (±s)

表1 各年齡組的固有膜厚度、腺體實質(zhì)比及壁細(xì)胞比例比較Table 1 Comparison of the lamina propria thickness, average ratio of Np to Na and Ap to Af among four groups (±s)

注: 在不同年齡組間兩兩比較，*P＜0.05

組別 n 固有膜厚度(μm) 實質(zhì)比(%)* 壁細(xì)胞比例(%)20～59歲組 19 1014±203 80±7 55±14 60～69歲組 11 944±191 86±4 57±15 70～79歲組 10 910±181 78±12 51±14≥80歲組 10 816±125 83±13 63±18

中青年組和老年組固有膜平均厚度為(1014±203)μm 和(892±172)μm，兩組間采用獨立t檢驗，t＝2.262,P＝0.022，提示中青年組固有膜較老年組增厚。中青年組胃底腺實質(zhì)比例均值為(80±7)%，老年組為(83±10)%，兩組間采用 Kruskal-Wallis秩和檢驗，z＝－1.969，P＝0.049，老年組略高于中青年組。中青年組壁細(xì)胞細(xì)胞數(shù)目占胃底腺細(xì)胞總數(shù)比例均值為(55±14)%，老年組為(57±16)%，兩組間采用獨立t檢驗，t＝－0.425，P＝0.673，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

2.2 電子顯微鏡下壁細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的增齡變化

電子顯微鏡制片成功的有 35例，其中青年組（20～59歲組）11例, 老年組（≥60歲）24例。老年組中包括60～69歲組8例, 70～79歲組8例, ≥80歲組8例。透射電子顯微鏡下可以觀察到胃壁細(xì)胞體積大，核圓位于中央。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含豐富的短桿狀線粒體，嵴細(xì)密，基質(zhì)中等電子密度，有較多小泡散在分布，核周可見分泌管?？梢婌o止期和分泌期兩種細(xì)胞。靜止期細(xì)胞分泌小管表面光滑、少微絨毛，微管泡系統(tǒng)發(fā)達(dá)；而分泌期則微絨毛密集管腔相對狹窄，微管泡系統(tǒng)的管泡數(shù)下降。各組壁細(xì)胞的超微形態(tài)未見明顯差異，但中青年組的壁細(xì)胞中可見到髓樣體（圖2A），而在老年組中較少見髓樣體，可見到大量的空泡（圖2B,C,D），尤其在≥80歲組中，8例中有6例可以看到多個面積巨大的空泡，最大直徑為3.5μm。

各年齡組所測線粒體面積分?jǐn)?shù)和管泡系統(tǒng)面積分?jǐn)?shù)比較見表2，增齡變化趨勢見圖3。各年齡組間線粒體面積分?jǐn)?shù)均值采用單因素方差分析，F(xiàn)＝2.307，P＝0.096，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。各年齡組間管泡系統(tǒng)面積分?jǐn)?shù)均值采用單因素方差分析，F(xiàn)＝0.622，P＝0.606，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

中青年組線粒體面積分?jǐn)?shù)均值為（48±8）%，老年組為（51±8）%，兩組間采用獨立t檢驗，t＝－0.775，P＝0.444，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。中青年組管泡系統(tǒng)面積分?jǐn)?shù)均值為（14±4）%，老年組為（12±5）%，兩組間采用獨立t檢驗，t＝0.984，P＝0.332，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

3 討 論

人在衰老過程中不可避免的要受到環(huán)境因素的影響，所以，為控制環(huán)境因素的影響，既往關(guān)于老化的研究均以實驗動物為載體，但是動物不能完全代表人體的情況，故本研究在收集研究對象時，盡量排除了對泌酸功能可能產(chǎn)生影響的各種因素（如幽門螺桿菌感染，服用抑酸劑，既往有胃十二指腸病史等），試圖以“正常胃”為研究對象，研究人體胃泌酸結(jié)構(gòu)的增齡性改變。按國內(nèi)的60歲以上為老年人的定義分為老年組和中青年組。同時，因為老化是個漸進(jìn)的過程，為了更好地研究隨齡變化，又分成了 20～59歲組, 60～69歲組, 70～79歲組, ≥80歲組。

圖2 各年齡組胃體黏膜顯微圖片F(xiàn)igure 2 Transmission electron microphotographs of gastric parietal cell

經(jīng)過近20年的國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，衰老對泌酸功能的影響并不明顯，80%～90%的老年人泌酸能力與中青年人相當(dāng)，具有良好的酸化胃內(nèi)容物的能力,10%～20%的老年人存在低胃酸,主要是由嚴(yán)重的萎縮性胃體胃炎或幽門螺桿菌感染所致[1-3]。結(jié)構(gòu)是功能的基礎(chǔ)，胃泌酸功能的載體主要是胃底腺，主要分布于胃體和胃底，腺體內(nèi)含有具有分泌 HCl功能的壁細(xì)胞。壁細(xì)胞有逆250萬倍梯度分泌H+的能力，其泌酸功能與數(shù)量、形態(tài)學(xué)改變相關(guān)[4,5]。

表2 各年齡組的線粒體面積分?jǐn)?shù)和管泡系統(tǒng)面積分?jǐn)?shù)比較Table 2 Comparison of the average ratio of Am to Ac and At to Ac among four groups (%,±s)

表2 各年齡組的線粒體面積分?jǐn)?shù)和管泡系統(tǒng)面積分?jǐn)?shù)比較Table 2 Comparison of the average ratio of Am to Ac and At to Ac among four groups (%,±s)

組別 n 線粒體面積分?jǐn)?shù) 管泡系統(tǒng)面積分?jǐn)?shù)20～59歲組 11 48±8 14±4 60～69歲組 8 51±7 12±5 70～79歲組 8 46±7 13±5≥80歲組 8 55±7 11±4

圖3 各年齡組的線粒體面積分?jǐn)?shù)和管泡系統(tǒng)面積分?jǐn)?shù)的増齡變化趨勢Figure 3 Tendency of the average ratio of Am to Ac and At to Ac according to age

一般認(rèn)為，正常的泌酸功能有賴于正常形態(tài)、數(shù)量的胃底腺和壁細(xì)胞。Majumdar等[6]報道24月齡的大鼠較 4月齡鼠的胃黏膜厚度高，但腺體高度降低32%。Farinati等[7]等研究正常人的胃黏膜活檢標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)隨著年齡增加，胃體壁細(xì)胞數(shù)量增加。本研究從光學(xué)顯微鏡下定性觀察，見不同年齡組胃底腺的形態(tài)和細(xì)胞的分布均無明顯差異，定量測定發(fā)現(xiàn)老年組固有膜厚度低于中青年組（P＝0.022），但老年組胃底腺實質(zhì)比例較中青年組略增多（P＝0.049），壁細(xì)胞比例在各年齡組之間沒有顯著差異（P＝0.373）。固有膜主要是黏膜中的上皮和固有層，完全包含了胃底腺，可以認(rèn)為老年組的胃底腺厚度下降，同時由于老年組胃底腺實質(zhì)比例增高，壁細(xì)胞數(shù)目并未減少，與以往報道相仿，所以從組織形態(tài)結(jié)構(gòu)上可支持正常老年人仍有良好的泌酸功能這一現(xiàn)象。

在超微結(jié)構(gòu)中，壁細(xì)胞的管泡系統(tǒng)是承載泌酸功能的主要細(xì)胞器，是由兩種特征性的質(zhì)膜系統(tǒng)構(gòu)成，一種由壁細(xì)胞的腔面質(zhì)膜向細(xì)胞內(nèi)凹陷、折疊而形成特殊網(wǎng)管結(jié)構(gòu)，稱為分泌小管，常見于分泌期。另一種是由滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和囊泡狀膜性結(jié)構(gòu)組成的管狀和泡狀的管泡結(jié)構(gòu)，常見于靜止期。Ogata等[8]對靜止?fàn)顟B(tài)和四肽胃泌素刺激狀態(tài)下的大鼠胃壁細(xì)胞質(zhì)膜系統(tǒng)進(jìn)行研究，在掃描電鏡下清晰地觀察到管泡膜與小管膜之間的連結(jié)，證實了兩種膜系統(tǒng)之間的聯(lián)系。泌酸功能的實現(xiàn)，能量供給必不可少，線粒體是細(xì)胞能量工廠，是細(xì)胞內(nèi)氧化磷酸化和形成 ATP的主要場所，其數(shù)量與代謝活動相關(guān)。在本研究中發(fā)現(xiàn)這兩種細(xì)胞器在形態(tài)和數(shù)量上未見隨齡變化（P＞0.05），從壁細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)上支持正常老年人具有良好的泌酸功能。此外，在壁細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的觀察中發(fā)現(xiàn)老年組尤其是≥80歲組中有大量空泡，空泡可能是初級溶酶體與多個吞飲小泡融合而成，常在細(xì)胞受損時出現(xiàn)，體現(xiàn)了老年人的壁細(xì)胞容易受損的特點，有文獻(xiàn)報道[9]老化的胃黏膜對損傷的修復(fù)能力下降，使得損傷時間延長，可能是空泡增多的原因，也可能是壁細(xì)胞老化的標(biāo)志之一，有待進(jìn)一步證實。

總之，通過對“正常胃”胃底腺組織學(xué)和壁細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的増齡變化的初步研究表明,胃底腺和壁細(xì)胞在數(shù)量和形態(tài)上沒有發(fā)生明顯退化，為闡明老年人仍有良好的泌酸功能提供了一定的科學(xué)依據(jù)。

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