馮元璋，古飛霞，袁朝霞，張雅君，劉勝洪，徐 磊，胡浪浪

(仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，廣東廣州510225)

多糖物質(zhì)不僅可增強(qiáng)畜禽的免疫力，降低疾病發(fā)生率，還具有促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，改善胴體品質(zhì)，增強(qiáng)抗病力，促進(jìn)免疫器官發(fā)育，增強(qiáng)免疫功能等生理活性，是一種很有發(fā)展前途的無(wú)公害新型添加劑［1～3］.蘆薈多糖(Aloe polysaccharide，AP)具有廣泛的免疫調(diào)節(jié)、免疫增強(qiáng)作用，以及抗病毒、抗腫瘤、殺菌、消炎、抗輻射、降血糖、降血脂和促進(jìn)傷口愈合等眾多生物學(xué)活性［4，5］，是醫(yī)學(xué)上研究及臨床應(yīng)用較為廣泛的一種植物多糖，目前已經(jīng)在治療肝腫瘤及肝臟損害等多種疾病上得到應(yīng)用［6］.蘆薈干粉及AP作為飼料添加劑在促進(jìn)畜禽生長(zhǎng)、提高生產(chǎn)性能，促進(jìn)貿(mào)易器官發(fā)育和提高新城疫(Newcastle disease，ND)抗體水平等方面已有不少研究［7～10］.馮元璋等［11，12］將 AP 制成注射劑，于接種ND疫苗時(shí)注射黃羽肉雞，發(fā)現(xiàn)一定質(zhì)量濃度的AP溶液可促進(jìn)肉雞生長(zhǎng)、提高生產(chǎn)性能、改善肉雞免疫器官的發(fā)育，提高ND疫苗免疫效果，并可以作為免疫促進(jìn)劑與ND疫苗同時(shí)使用.但AP對(duì)肉雞血液生化指標(biāo)的影響則罕見(jiàn)報(bào)道.本試驗(yàn)在接種ND疫苗的同時(shí)采用AP溶液皮下注射，觀察AP對(duì)黃羽肉雞血液生化指標(biāo)的影響，旨在研制出一種具有免疫促進(jìn)作用，對(duì)肉雞無(wú)毒副作用，對(duì)血液生化指標(biāo)無(wú)不良影響，并且能夠與ND活疫苗或滅活疫苗配合使用的一種AP制劑，希望能夠?yàn)橄嚓P(guān)研究和AP在肉雞生產(chǎn)中的應(yīng)用提供參考.

1 材料與方法

1.1 AP溶液的制備

準(zhǔn)確稱取適量AP干粉(總糖含量710 mg·g－1，由中國(guó)科學(xué)院華南植物園提供)，以適量無(wú)菌生理鹽水溶解，并分別按2 000 IU·mL－1加入青霉素、鏈霉素(北京鼎國(guó)生物技術(shù)有限公司)，以無(wú)菌生理鹽水分別制得含不同質(zhì)量濃度的AP溶液，混勻，4℃冰箱保存?zhèn)溆?

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

將450只1日齡粵禽皇快大型黃雞(購(gòu)自廣東省粵禽有限公司)隨機(jī)分成甲組和乙組.其中甲組(1次AP處理)又分為A，B，C，D 4個(gè)處理和E(無(wú)菌生理鹽水)對(duì)照，每處理3次重復(fù)，各15只雛雞，所有試驗(yàn)雞均在5日齡用新支二聯(lián)活疫苗(乾元浩南京生物藥廠)滴鼻免疫，同時(shí)頸部皮下注射0.25 mL·只－1ND滅活苗(廣東永順生物制藥有限公司)和不同質(zhì)量濃度的 AP溶液0.1 mL·只－1.乙組(2次 AP處理)又分為Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ 4個(gè)處理和Ⅴ(無(wú)菌生理鹽水)對(duì)照，每處理3個(gè)重復(fù)，各15只雛雞，所有試驗(yàn)雞均分別在5日齡和20日齡采用新支二聯(lián)活疫苗滴鼻免疫的同時(shí)于頸部皮下注射不同質(zhì)量濃度的AP溶液0.25 mL·只－1.甲組(A～E)、乙組(Ⅰ～Ⅴ)各處理AP實(shí)際注射量分別為每次 3.75，7.50，11.25，15.00，0 mg·只－1.

除ND疫苗外，試驗(yàn)雞其他疫苗按常規(guī)免疫程序免疫.所有試驗(yàn)雞在1～3周齡期間飼喂德勝101快大小雞配合飼料，4～5周齡飼喂德勝102快大中雞配合飼料(佛山市順德區(qū)食品有限公司德勝飼料廠).所有試驗(yàn)雞飼養(yǎng)管理方式一致，常規(guī)飼養(yǎng).

1.3 血液生化指標(biāo)測(cè)定

在20日齡和35日齡時(shí)，分別從每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取5只雞，翼下靜脈(或心臟)采血2 mL·只－1，分離血清，－20℃保存待測(cè).血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、尿素氮(BUN)、甘油三酯(TG)和總膽固醇(CHO)等，采用日立7170型全自動(dòng)生化分析儀(日本日立株式會(huì)社)測(cè)定.

1.4 數(shù)據(jù)處理

所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用 SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件中的ANOVA模塊進(jìn)行單因素方差分析和Duncan’s多重比較，試驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示.

2 結(jié)果與分析

2.1 AP對(duì)肉雞血清蛋白和尿素氮含量的影響

2.1.1 AP 1次注射對(duì)肉雞血清蛋白和尿素氮含量的影響 在5日齡接種ND疫苗時(shí)1次注射AP溶液后15 d(20日齡)，不同質(zhì)量濃度的AP處理雛雞的血清總蛋白、白蛋白和球蛋白含量均低于對(duì)照組，但除球蛋白外，與對(duì)照相比差異均不顯著;在AP 處理后15 d(20 日齡)，3.75 mg·只－1(A)處理的尿素氮含量顯著高于其余各處理及對(duì)照組(P＜0.05)，其余各處理之間以及與對(duì)照之間血清尿素氮含量無(wú)顯著差異(表1).而在AP注射處理后30 d(35 日齡)，除 15.00 mg·只－1(D)處理的血清總蛋白、白蛋白和球蛋白含量高于對(duì)照外，其余各處理的總蛋白、白蛋白和球蛋白含量均低于對(duì)照;除 AP 7.50 mg·只－1(B)處理外，其余各處理血清尿素氮含量均高于對(duì)照，但各處理之間以及與對(duì)照之間差異不顯著(表1).

2.1.2 AP 2次注射對(duì)肉雞血清蛋白和尿素氮含量的影響 在5日齡第1次注射AP后15 d(20日齡)，AP各處理的總蛋白、白蛋白和球蛋白基本上均高于對(duì)照組，只有11.25 mg·只－1(Ⅲ)處理的總蛋白和球蛋白含量與對(duì)照相比差異顯著(P＜0.05);AP各處理肉雞的血清尿素氮含量差異不顯著(表2).而第2次AP處理后15 d(35日齡)，除15.00 mg·只－1(Ⅳ)處理的白蛋白外，其余各處理的總蛋白、白蛋白和球蛋白含量均高于對(duì)照;除 AP 3.75 mg·只－1(Ⅰ)和 7.50 mg·只－1(Ⅱ)處理外，另外2個(gè)處理雛雞的尿素氮含量均低于對(duì)照，但只有15.00 mg·只－1(Ⅳ)處理與對(duì)照相比差異顯著(P ＜0.05)(表2).

表1 AP 1次注射對(duì)肉雞血清蛋白和尿素氮含量的影響Table 1 The effect of AP injected once on the content of blood proteinss and urea nitrogen in broiler

表2 AP 2次注射對(duì)肉雞血清蛋白和尿素氮含量的影響Table 2 The effect of AP injected twice on the content of blood proteinss and urea nitrogen in broiler

2.2 AP對(duì)肉雞血清轉(zhuǎn)氨酶含量的影響

2.2.1 AP 1次注射對(duì)肉雞血清轉(zhuǎn)氨酶含量的影響 經(jīng)5日齡AP 1次注射處理后15 d(20日齡)，各處理之間以及與對(duì)照之間谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量差異不顯著，但谷草轉(zhuǎn)氨酶則以3.75 mg·只－1(A)處理的含量最低，與C，D處理以及與對(duì)照相比差異顯著(P＜0.05);而在AP處理后30 d(35日齡)，各處理與對(duì)照之間的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶含量差異不顯著(表3).

2.2.2 AP 2次注射對(duì)肉雞血清轉(zhuǎn)氨酶含量的影響 在5日齡和20日齡接受2次AP溶液處理的乙組，于第1次處理后15 d(20日齡)，AP各處理的谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量差異不顯著(P＞0.05);除11.25 mg·只－1(Ⅲ)處理外，其余各處理的谷草轉(zhuǎn)氨酶含量與對(duì)照相比差異不顯著(P＞0.05);而第2次AP處理后15 d(35日齡)，各處理的谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶含量與對(duì)照差異不顯著(P＞0.05)(表4).

表3 AP 1次注射對(duì)肉雞血清轉(zhuǎn)氨酶含量的影響Table 3 The effect of AP injected once on the content of blood transaminase in broiler

表4 AP 2次注射對(duì)肉雞血清轉(zhuǎn)氨酶含量的影響Table 4 The effect of AP injected twice on the content of blood transaminase in broiler

2.3 AP對(duì)肉雞血清甘油三酯和總膽固醇含量的影響

2.3.1 AP 1次注射對(duì)肉雞血清甘油三酯和總膽固醇含量的影響 在5日齡1次注射AP溶液后15 d(20 日齡)，除 3.75 mg·只－1(A)處理外，其余AP處理甘油三酯含量均低于對(duì)照，并且所有AP各處理之間以及與對(duì)照之間血清甘油三酯含量無(wú)顯著差異;各處理雛雞的血清總膽固醇含量均低于對(duì)照，并且 AP 3.75 ～11.25 mg·只－1(A ～ C)處理的總膽固醇含量與對(duì)照相比差異顯著(P＜0.05)(表5).而在AP注射后30 d(35日齡)，各處理血清甘油三酯含量均低于對(duì)照，且差異顯著(P＜0.05)，但4個(gè)處理之間則無(wú)顯著差異;各處理血清總膽固醇含量均低于對(duì)照，除15.00 mg·只－1(D)處理外，AP 3.75 ～11.25 mg·只－1(A ～C)處理的血清總膽固醇含量與對(duì)照相比差異顯著(P＜0.05)(表5).由此看來(lái)，AP處理可降低肉雞血清的甘油三酯和總膽固醇含量.

2.3.2 AP 2次注射對(duì)肉雞血清甘油三酯和總膽固醇含量的影響 在5日齡和20日齡分別采用AP皮下注射的乙組雛雞，于第1次AP處理后15 d(20日齡)，AP各處理肉雞的血清甘油三酯含量差異不顯著;各處理肉雞的血清總膽固醇含量均低于對(duì)照，但只有 7.50 mg·只－1(Ⅱ)和 15.00 mg·只－1(Ⅳ)處理與對(duì)照存在顯著差異(P＜0.05).而在第2次注射AP后15 d(35日齡)，除個(gè)別處理外，各處理雛雞的甘油三酯和膽固醇含量均低于對(duì)照，且除15.00 mg·只－1(Ⅳ)處理肉雞外，其余各處理肉雞的血清甘油三酯和總膽固醇含量與對(duì)照無(wú)顯著性差異(表6).

表5 AP 1次注射對(duì)肉雞血清甘油三酯和總膽固醇含量的影響Table 5 The effect of AP injected once on the content of blood triglyceride and total cholesterol in broiler

表6 AP 2次注射對(duì)肉雞血清甘油三酯和總膽固醇含量的影響Table 6 The effect of AP injected twice on the content of blood triglyceride and total cholesterol in broiler

3 討論

3.1 AP對(duì)肉雞血清蛋白和尿素氮含量的影響

血清總蛋白有白蛋白和球蛋白2類，血清總蛋白和白蛋白的含量在一定程度上可以反映機(jī)體蛋白質(zhì)的合成與代謝狀況，而血清球蛋白含量高低則與機(jī)體的免疫水平有密切關(guān)系［13］.總蛋白和白蛋白含量的增加，表明體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成代謝加強(qiáng)，不僅有利于家禽的利用，而且降低了飼料消耗.血清中的球蛋白是機(jī)體內(nèi)主要參與免疫反應(yīng)的蛋白質(zhì)，其升高可能意味著機(jī)體體液免疫功能的加強(qiáng)，其含量高低是評(píng)價(jià)機(jī)體免疫水平，特別是體液免疫水平的一個(gè)重要標(biāo)志.在本試驗(yàn)中，以AP 1次注射的甲組，盡管在初期(20日齡)AP各處理雛雞的血清總蛋白、白蛋白和球蛋白含量均低于對(duì)照組(P＞0.05)，但到后期(35 日齡)，15 mg·只－1處理的血清總蛋白、白蛋白和球蛋白含量均高于對(duì)照;而在采用AP 2次注射的乙組，除個(gè)別處理外，AP各處理的總蛋白、白蛋白和球蛋白含量均高于對(duì)照，這與此前馮元璋等［12］有關(guān)AP處理雞ND HI抗體滴度高于對(duì)照的結(jié)果基本吻合，并且這可能與AP促進(jìn)了肉雞的蛋白質(zhì)同化代謝，加快血清蛋白質(zhì)在肉雞體內(nèi)肌肉組織中的沉積有關(guān).

有研究認(rèn)為，營(yíng)養(yǎng)不良時(shí)血清總蛋白、白蛋白會(huì)降低;高蛋白飲食會(huì)引起尿素氮的增加.血清白蛋白含量與動(dòng)物生長(zhǎng)速度密切相關(guān)，其含量升高標(biāo)志著肉雞生長(zhǎng)加快［14］，馮元璋等［11］在接種 ND 疫苗時(shí)注射AP溶液，也觀察到AP可使肉雞生長(zhǎng)加快、體重增加.本試驗(yàn)表明，于接種ND疫苗時(shí)皮下注射一定質(zhì)量濃度的AP溶液，尤其是在接種疫苗時(shí)2次注射一定濃度的AP溶液，可升高肉仔雞的血清總蛋白、白蛋白和球蛋白含量.這可能是與AP能夠改善和提高肉雞對(duì)飼料中氮的吸收作用，因而促進(jìn)蛋白質(zhì)的吸收和利用，促進(jìn)肉雞的生長(zhǎng)發(fā)育有關(guān).另外也與AP所具有的殺菌、抑菌作用，以及免疫促進(jìn)作用和促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收，提高畜禽健康水平有關(guān).有研究認(rèn)為，血清尿素氮含量與蛋白質(zhì)的利用率之間存在顯著的負(fù)相關(guān)，當(dāng)肝臟中蛋白質(zhì)代謝和腎臟排泄功能正常時(shí)，其在血清中的含量通常維持在一定范圍內(nèi)，因而尿素氮是機(jī)體蛋白質(zhì)分解代謝的主要終末產(chǎn)物，血液中的尿素氮在腎臟經(jīng)過(guò)腎小球和腎小管的濾過(guò)與吸收，最終通過(guò)尿液排出體外［15］.所以尿素氮在一定程度上可以反映機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)的利用程度情況.有研究報(bào)道，血清尿素氮濃度與動(dòng)物蛋白質(zhì)代謝和氨基酸平衡有關(guān)，并在一定程度上可以反映動(dòng)物體內(nèi)蛋白質(zhì)的代謝和日糧氨基酸的平衡情況，蛋白質(zhì)代謝和氨基酸平衡良好時(shí)，血清尿素氮濃度降低;若血清尿素氮含量升高，則意味著體內(nèi)蛋白質(zhì)分解代謝增強(qiáng)，氮沉積減少或腎功能不正常，或動(dòng)物處于發(fā)病或亞健康狀態(tài)［16］.本試驗(yàn)中，在接種ND疫苗時(shí)1次注射AP的甲組，除3.75 mg·只－1處理外，其余各AP處理尿素氮含量與對(duì)照相比差異不顯著(P＞0.05).而在AP 2次處理的乙組，除個(gè)別處理外，AP各處理尿素氮的含量雖分別略高或略低于對(duì)照，但差異不顯著(P＞0.05).說(shuō)明一定質(zhì)量濃度的AP對(duì)肉雞的尿素氮含量無(wú)任何不良影響.盡管僅從血清總蛋白、白蛋白、球蛋白和尿素氮等4個(gè)指標(biāo)并不能充分說(shuō)明AP對(duì)肝功能的影響，但至少可以從一個(gè)側(cè)面反映一定質(zhì)量濃度的AP注射處理，總體上對(duì)肉雞的蛋白質(zhì)代謝無(wú)任何不良影響，對(duì)試驗(yàn)肉雞的肝、腎功能無(wú)不良影響.

3.2 AP對(duì)肉雞血清轉(zhuǎn)氨酶含量的影響

血清中的轉(zhuǎn)氨酶在機(jī)體蛋白質(zhì)代謝中起重要作用，其含量增加往往與組織中的變化相平行，間接反映組織細(xì)胞蛋白質(zhì)代謝的狀況.動(dòng)物體內(nèi)有多種轉(zhuǎn)氨酶，其中GPT和GOT是動(dòng)物體內(nèi)兩種重要的轉(zhuǎn)氨酶.GPT主要存在于各種組織的細(xì)胞中，尤以肝臟細(xì)胞中含量最多，并且是在氨基酸的合成與分解代謝中起重要作用的轉(zhuǎn)氨酶之一，其在血清中的含量與肝臟細(xì)胞的完整性有密切關(guān)系.當(dāng)肝細(xì)胞受損、細(xì)胞膜通透性增大時(shí)，其可逸出細(xì)胞外，增加血漿中的含量，輕微的肝細(xì)胞受損可使其酶活性提高1倍，因而血清中的GPT活性是反映肝細(xì)胞損害的敏感指標(biāo)［17］，是肝功能受損害最靈敏的試驗(yàn)之一，可反映肝臟的功能.而GOT則是肝臟細(xì)胞中存在的并參與氨基酸代謝的一種轉(zhuǎn)氨基活性最高的酶，當(dāng)肝臟出現(xiàn)病變或肝細(xì)胞受損時(shí)，其可大量逸入血清，導(dǎo)致血清的轉(zhuǎn)氨酶活性升高.于是可以根據(jù)血清中GOT活性的這種變化，作為判斷肝臟功能正常與否的依據(jù)之一.呂峰等［18］的研究發(fā)現(xiàn)，薏苡仁多糖可明顯抑制肝細(xì)胞GOT，GPT的活性.本試驗(yàn)結(jié)果表明，在接種ND疫苗時(shí)1次，或2次注射AP溶液，除個(gè)別處理(11.25 mg·只－1)的GOT含量略高于對(duì)照且差異顯著外，盡管個(gè)別處理GPT和GOT含量略高于對(duì)照，但總體上與對(duì)照組相比差異不顯著，說(shuō)明AP對(duì)肉雞肝臟無(wú)毒副作用，不會(huì)引起雞肝臟和心臟功能損傷，對(duì)肉雞血清轉(zhuǎn)氨酶(GPT和GOT)含量和肝臟功能無(wú)不良影響.

3.3 AP對(duì)肉雞血清甘油三酯和總膽固醇含量的影響

有研究表明，復(fù)方黃芪多糖注射液在3～6 mL·頭－1內(nèi)對(duì)仔豬血液生化指標(biāo)沒(méi)有明顯影響，對(duì)血液生理指標(biāo)有明顯改善作用［19］.張利娟等［20］的研究顯示，黃芪多糖和小檗堿復(fù)合制劑能夠增強(qiáng)蛋雞的免疫水平，降低血清中甘油三酯和膽固醇的含量.劉會(huì)娟等［21］的試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，于蛋用雛雞飲水中加入不同劑量的米糠多糖，可以促進(jìn)雛雞的生長(zhǎng)性能，降低雛雞血液中甘油三醋和膽固醇水平，并以每天100 mg·kg－1劑量處理者效果最為明顯.本試驗(yàn)在接種ND疫苗時(shí)1次或2次注射不同質(zhì)量濃度的AP，除個(gè)別處理外，AP各處理與對(duì)照組相比，甘油三酯和膽固醇含量均低于對(duì)照，且差異顯著(P＜0.05).這說(shuō)明AP具有降低肉雞血清總膽固醇和具有良好的降血脂作用.這可能與AP能夠減少膽固醇內(nèi)源性合成、減少膽固醇的吸收、促進(jìn)脂類轉(zhuǎn)運(yùn)和排泄有關(guān)，另外也可能與植物多糖能夠抑制膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶的活性，阻止日糧中膽固醇的吸收和肝臟中脂蛋白裝配，增強(qiáng)肝臟中膽固醇的分解利用以及膽汁的排泄作用有關(guān).

由于目前罕見(jiàn)家禽的正常血液生化指標(biāo)值標(biāo)準(zhǔn)，尚難對(duì)本試驗(yàn)AP處理組肉雞的血液生化指標(biāo)值進(jìn)行評(píng)判，但通過(guò)設(shè)置空白對(duì)照，在一定程度上可反映AP處理與空白處理組之間血液生化指標(biāo)值之間的關(guān)系.總體看來(lái)，在本試驗(yàn)條件下，AP對(duì)肉雞的血液生化指標(biāo)無(wú)不良影響，對(duì)肝臟、腎臟的功能無(wú)不良影響，可作為注射劑安全應(yīng)用于肉雞.

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