摘要：為了真實(shí)、準(zhǔn)確、有效的掌握啤酒灌裝各環(huán)節(jié)壓縮氣體的微生物情況，通過實(shí)驗(yàn)與傳統(tǒng)氣體檢測法——平皿接觸法，和目前所使用的水吸收法進(jìn)行對比，摸索出一種既簡單又經(jīng)濟(jì)的方法——套袖法。平皿接觸法容易受到外部各種環(huán)境的干擾，造成各項(xiàng)微生物指標(biāo)誤差較大。水吸收法在氣流調(diào)節(jié)不穩(wěn)定的情況下，氣體中的微生物有可能不會全部滯留在生理鹽水中，使檢測結(jié)果偏低，不能有效的反應(yīng)出真實(shí)情況。套袖法是用一個類似套袖的一端寬一端窄的布袋，套在取樣口上，起到了暫時與外界環(huán)境隔離的作用。使管路中的空氣直接沉降在平皿上，而免受外部環(huán)境的干擾。

關(guān)鍵詞：壓縮氣體 套袖法 平皿接觸法 水吸收法

0 引言

啤酒釀造過程中的壓縮氣體是微生物污染的主要途徑之一，通過麥汁充氧、二氧化碳備壓等環(huán)節(jié)可以將部分微生物帶入啤酒之中。因此，必須定期對無菌空氣、氮?dú)?、二氧化碳進(jìn)行檢查，以提供必要的參考數(shù)據(jù)，減少污染。目前，國家沒有一個統(tǒng)一的壓縮氣體檢測標(biāo)準(zhǔn)，每個啤酒廠只能根據(jù)原理制定檢測方法，但有的很難準(zhǔn)確地定量檢測壓縮氣體的含菌量。

我們所接觸過檢測氣體微生物的方法有四種：平皿接觸法、氣體取樣器法、NBB-B吸收富集法、水吸收法。在日常檢測過程中使用的方法分別是平皿接觸法和水吸收法。如何更加真實(shí)、準(zhǔn)確的反應(yīng)壓縮空氣的微生物各項(xiàng)指標(biāo)，有效的檢測方法是至關(guān)重要的。通過與目前使用的幾種方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)對比，我摸索出一種既簡單又經(jīng)濟(jì)的方法——套袖法。

1 實(shí)驗(yàn)器材及試劑

1.1 實(shí)驗(yàn)器材：壓縮氣體收集裝置、環(huán)境空氣取樣器、真空抽濾系統(tǒng)、培養(yǎng)皿、自制棉布套袖、無菌過濾膜、厭氧罐、生化培養(yǎng)箱。

1.2 試劑：培養(yǎng)基、0.85%生理鹽水

2 常用壓縮氣體的檢測方法

2.1 平皿接觸法

該法是比較傳統(tǒng)、原始的檢測方法。

實(shí)驗(yàn)步驟：將培養(yǎng)基水浴后于55℃倒入無菌平皿中，倒置幾小時去除表面水分后待用。將氣體取樣口滅菌后調(diào)節(jié)氣體流速，置平皿于取樣口下方，讓平板培養(yǎng)基暴露在氣體流中，旋轉(zhuǎn)使培養(yǎng)基的所有表面與氣體流接觸，氣體均勻沉降于培養(yǎng)基上2分鐘。直接置37℃恒溫培養(yǎng)2天，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，即為2分鐘氣體含菌量。

2.2 水吸收法

該方法是目前日常工作中正在運(yùn)用的取樣方法。

實(shí)驗(yàn)步驟：配置0.85%的生理鹽水200ml于取樣瓶中包裹滅菌待用。待氣體取樣口滅菌后調(diào)節(jié)氣體流速后，將取樣瓶上方的膠管與取樣閥連接，使氣體通過導(dǎo)管進(jìn)入0.85%的生理鹽水中，將氣體中的微生物溶于0.85%的生理鹽水中，被洗滌后的空氣通過排氣口排出，時間是2分鐘。在無菌室將洗滌水通過膜過濾的方法，使微生物附著于過濾膜上進(jìn)行培養(yǎng)。直接置37℃恒溫培養(yǎng)2天，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，即為2分鐘氣體含菌量。

2.3 套袖法

顧名思義形狀與套袖相似，所不同的是一頭寬一頭窄，平鋪呈梯形。在窄的一端穿上棉線控制其松緊，便于捆綁，它起到與外界環(huán)境隔離的作用。

實(shí)驗(yàn)步驟：在將取樣口滅菌后，將其套住取樣口，窄的一端向上，收緊棉線打結(jié)，然后再調(diào)節(jié)氣體的流速，流速為培養(yǎng)基剛好不被氣體吹起。置平皿于布袋中一只手（戴無菌手套）在里面拖住平皿旋轉(zhuǎn)，另一只手在外面隔著布袋打開里面的平皿蓋，時間是2分鐘。直接置37℃恒溫培養(yǎng)2天，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，即為2分鐘氣體含菌量。

3 結(jié)果與討論

3.1 不同檢測方法測結(jié)果的對比

3.1.1 以無菌空氣為例（好氧菌）

控制相同的氣體流速，取樣時間相同（2分鐘），用不同的方法對壓縮空氣進(jìn)行微生物檢測，同時用環(huán)境空氣取樣器（可以設(shè)定取樣空氣量）對環(huán)境空氣進(jìn)行微生物檢測。結(jié)果如下表：

3.1.2 以發(fā)酵風(fēng)包為例（好氧菌、厭氧菌）

3.2 討論

3.2.1 通過比較上圖中的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，根據(jù)8次數(shù)據(jù)的對比不難看出，好氧菌和厭氧菌的每種檢測數(shù)據(jù)的曲線形態(tài)基本吻合，三種方法的檢測結(jié)果趨勢完全吻合。平皿接觸檢測法的結(jié)果數(shù)值偏高，與周圍環(huán)境的影響有一定的關(guān)系。水吸收檢測法的數(shù)值偏低，是由于微生物沒有完全被滯留在水中，結(jié)果都與檢測方法的干擾有關(guān)。

3.2.2 由上表可見同一種壓縮氣體，取樣方法不同，檢測結(jié)果相差較大。

①平皿接觸法簡單易行，缺點(diǎn)是受環(huán)境影響因素較大，尤其是在細(xì)菌容易滋生的潮濕和溫度較高的環(huán)境中，在吹氣中，外界環(huán)境空氣形成很強(qiáng)的氣流，把環(huán)境空氣中的微生同時也帶入平板中，試驗(yàn)的數(shù)據(jù)會偏高，其中不乏周圍環(huán)境所造成的危害，導(dǎo)致影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性。

②水吸收法的前期準(zhǔn)備工作比較繁多，對設(shè)備的要求高必須是特別制作的。取樣時氣體速度調(diào)節(jié)不穩(wěn)定，不是氣體中所有的微生物都會被滯留在水中，試驗(yàn)的數(shù)據(jù)有可能偏低，不能有效的反應(yīng)出真實(shí)情況。后期需要回到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行膜過濾培養(yǎng)，成本較高。

③套袖法比平皿接觸法多了一個布袋，在簡單便捷的基礎(chǔ)上又可以使管路中排出的空氣在短時間內(nèi)與外界的污染環(huán)境相隔離，相對比較封閉。而與水吸收法相比，它省略了前期的殺菌、配置生理鹽水等工作，取而代之的是對套袖進(jìn)行滅菌，減少空間。

4 結(jié)論

4.1 平板接觸法，操作方便、簡單，但受外界環(huán)境空氣影響較大，檢測結(jié)果大大偏離實(shí)際（除環(huán)境空氣無菌），此方法不可取。

4.2 水吸收法實(shí)驗(yàn)前期準(zhǔn)備較復(fù)雜，后期處理樣品步驟繁瑣，過程中增加了對樣品的污染的可能，并且實(shí)驗(yàn)成本高。實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在一定的誤差，不提倡使用。

以上兩種方法均具有其不可取之處，實(shí)驗(yàn)結(jié)果均不能合理有效的正確指導(dǎo)生產(chǎn)。

4.3 套袖法比平皿接觸法多了一個布袋，在簡單便捷的基礎(chǔ)上又可以使管路中排出的空氣在短時間內(nèi)與外界的污染環(huán)境相隔離，相對比較封閉。而與水吸收法相比，它省略了前期的殺菌、配置生理鹽水等工作，取而代之的是對套袖進(jìn)行滅菌。此方法更能真實(shí)的反應(yīng)出壓縮氣體微生物的真實(shí)情況，能夠正確的指導(dǎo)生產(chǎn)，并且節(jié)省滅菌空間、操作簡單又比較經(jīng)濟(jì)，達(dá)到了數(shù)據(jù)真實(shí)有效的目的。是一種比較合理的、符合企業(yè)實(shí)際情況的理想檢測方法。

參考文獻(xiàn)：

[1]昆策.啤酒工藝實(shí)用技術(shù)[M].中國輕工業(yè)出版社.2008年9月.

[2]無錫輕工業(yè)大學(xué)、天津青工業(yè)大學(xué)聯(lián)合編制.食品微生物學(xué)[M].中國輕工業(yè)出版社. 2006年7月.

[3]付金泉等.中國釀酒微生物研究與應(yīng)用[M].中國輕工業(yè)出版社.2008年5月.

[4]孫黎瓊.幾種壓縮氣體微生物檢測方法的比較[J].啤酒科技.2002年第1期.