通常消費(fèi)化妝品無(wú)需擔(dān)心生殖和發(fā)育毒性的問(wèn)題，但是近年來(lái)塑化劑、雙酚A等具有潛在生殖毒性的化合物引起的安全事件頻繁發(fā)生，使消費(fèi)者對(duì)于長(zhǎng)期使用化妝品的安全性越來(lái)越擔(dān)憂(yōu)。一方面是化妝品質(zhì)量參差不齊，消費(fèi)者擔(dān)心各種非法添加和禁限用物質(zhì)的超標(biāo)使用，另一方面，受制于傳統(tǒng)評(píng)估方法的局限，人們對(duì)大量新化合物的長(zhǎng)期慢性毒性根本來(lái)不及評(píng)估，因認(rèn)識(shí)不足而加劇這種擔(dān)擾。因此，開(kāi)發(fā)低成本高通量新的體外方法并與體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)整合運(yùn)用可提高化妝品原料生殖與發(fā)育毒性的安全性評(píng)估與科學(xué)認(rèn)知。

生殖是使種族延續(xù)的各種生理過(guò)程的總稱(chēng)，包括配子（精子與卵子）發(fā)生、交配、卵細(xì)胞受精、著床、胚胎形成與發(fā)育、胎仔發(fā)育、分娩和哺乳等階段。生殖毒性指的是一種物質(zhì)在繁殖周期的任何一個(gè)階段中所產(chǎn)生的毒副作用，既包括外源物質(zhì)對(duì)親代生殖功能的影響，也包括對(duì)子代發(fā)育過(guò)程的有害影響。如今年以來(lái)愈演愈烈的塑化劑事件，導(dǎo)致危機(jī)的鄰苯二甲酸酯類(lèi)就屬于對(duì)生殖發(fā)育的各個(gè)階段均有可能產(chǎn)生危害瓦特的一類(lèi)化合物。研究表明鄰苯二甲酸酯類(lèi)在人體和動(dòng)物體內(nèi)發(fā)揮著類(lèi)似雌性激素的作用，可干擾內(nèi)分泌，影響男性生殖系統(tǒng)的功能，嚴(yán)重的會(huì)導(dǎo)致睪丸癌。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表現(xiàn)為腎臟和睪丸重量減輕、流產(chǎn)、胚囊植入率降低、多臟器發(fā)育畸形。鄰苯二甲酸酯類(lèi)普遍存在于化妝品中，指甲油的鄰苯二甲酸酯含量最高，很多化妝品的芳香成分也含有該物質(zhì)。化妝品中的這種物質(zhì)會(huì)通過(guò)女性的呼吸系統(tǒng)和皮膚進(jìn)入體內(nèi)，如果過(guò)多使用，會(huì)增加女性患乳腺癌的幾率，還會(huì)危害到她們未來(lái)生育的男嬰的生殖系統(tǒng)。因此，日化工業(yè)的高速發(fā)展不能忽視可能日趨嚴(yán)重的生殖和發(fā)育毒性危害。

生殖毒性的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

化學(xué)物的生殖發(fā)育毒性有兩個(gè)顯著的特點(diǎn)：一是生殖系統(tǒng)較機(jī)體的其他系統(tǒng)對(duì)化學(xué)物的毒作用更為敏感，二是損害作用不僅影響接觸化學(xué)物質(zhì)的母體本身，還可影響其后代。鑒于哺乳類(lèi)動(dòng)物繁殖過(guò)程的復(fù)雜性，對(duì)繁殖過(guò)程的各個(gè)方面進(jìn)行毒理學(xué)分析都是必須的，包括致畸性、內(nèi)分泌干擾、母細(xì)胞突變、生育受損等。為了檢測(cè)化學(xué)物質(zhì)對(duì)生殖周期內(nèi)不同靶細(xì)胞/器官的毒副作用，OECD發(fā)布了8個(gè)試驗(yàn)指導(dǎo)，這些指南大多數(shù)是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法。2009年OECD認(rèn)可了TG 455（雌二醇受體轉(zhuǎn)錄試驗(yàn)），這是首個(gè)發(fā)布的生殖毒性試驗(yàn)替代方法。還有3項(xiàng)體外試驗(yàn)方法已完成驗(yàn)證，進(jìn)入法規(guī)認(rèn)可程序。發(fā)育和生殖毒性的試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)還見(jiàn)于美國(guó)試驗(yàn)和材料學(xué)會(huì)（ASTM）、美國(guó)環(huán)保局（USEPA）等的方法指南中。

傳統(tǒng)的生殖毒性檢測(cè)以動(dòng)物試驗(yàn)為主，包括分娩前發(fā)育毒性研究（OECD TG 414）、一代動(dòng)物毒性研究（OECD TG 415）、二代動(dòng)物毒性研究（OECD TG 416）、生殖毒性/發(fā)育毒性篩選檢測(cè)（OECD TG421）、重復(fù)劑量毒性研究結(jié)合生殖毒性/發(fā)育毒性篩選檢測(cè)（OECD TG 422），以及2009年發(fā)布的Hershberger試驗(yàn)（TG411）和目前正在討論中的發(fā)育神經(jīng)毒性試驗(yàn)（TG426）。我國(guó)列入各類(lèi)商品（藥品、食品、藥妝品、化學(xué)品）毒性測(cè)試指南的標(biāo)準(zhǔn)方法均來(lái)源于OECD。完整的生殖毒性研究應(yīng)包括成年動(dòng)物從受孕到子代性成熟的各個(gè)發(fā)育階段接觸受試物的反應(yīng)。測(cè)試時(shí)間應(yīng)連續(xù)通過(guò)一個(gè)完整的生命周期，即從親代受孕到子一代受孕。最常用的三段生殖毒性試驗(yàn)由生育力和早期胚胎發(fā)育毒性試驗(yàn)、胚體—胎體毒性試驗(yàn)（致畸試驗(yàn)）和出生前后發(fā)育毒性試驗(yàn)（圍產(chǎn)期毒性試驗(yàn)）三部分組成。對(duì)于人類(lèi)反復(fù)接觸的化學(xué)物，如食品添加劑、農(nóng)藥、環(huán)境污染物及某些化妝品原料等，僅做三段生殖毒性試驗(yàn)是不夠的，應(yīng)進(jìn)行多代生殖試驗(yàn)。

2008年OECD提出了一項(xiàng)新的試驗(yàn)指南，稱(chēng)為延長(zhǎng)一代生殖毒性研究，用于代替一代和二代動(dòng)物毒性研究（OECD 415，416）以及其它特定發(fā)育毒性研究（OECD 426，414）。試驗(yàn)設(shè)計(jì)體現(xiàn)了3R法規(guī)的要求，更加靈活和有效，優(yōu)化了實(shí)驗(yàn)過(guò)程和檢測(cè)指標(biāo)，增加了發(fā)育神經(jīng)毒性和免疫毒性的評(píng)價(jià)，減少了動(dòng)物使用。

體外替代方法的研究策略

鑒于哺乳類(lèi)動(dòng)物繁殖過(guò)程的復(fù)雜性，試圖通過(guò)體外系統(tǒng)模擬整個(gè)繁殖周期來(lái)檢測(cè)某種化合物的生殖毒性還不可能。因此，將整個(gè)繁殖過(guò)程分成數(shù)個(gè)連續(xù)的生物學(xué)部分，分別對(duì)其進(jìn)行單獨(dú)或聯(lián)合研究，可最大化鑒定出某種物質(zhì)的靶細(xì)胞、組織或器官。根據(jù)這一思路，已建立了許多有前景的體外模型和方法。例如內(nèi)分泌干擾物的篩查方法、報(bào)告基因檢測(cè)方法、計(jì)算機(jī)輔助精子檢測(cè)方法等。這些體外方法的組合應(yīng)用有助于生殖毒性的安全性評(píng)價(jià)和機(jī)制研究。

1. 雄性和雌性繁殖力和受精方面

目前研發(fā)的方法覆蓋了許多毒性作用終點(diǎn)，如睪丸支持細(xì)胞和生精細(xì)胞毒性，卵泡發(fā)生（FBA檢測(cè)），生殖細(xì)胞成熟，精子運(yùn)動(dòng)性和形態(tài)學(xué)（CASA檢測(cè)），精子DNA損傷（ReProComet檢測(cè)），甾體生成（FBA和粒層細(xì)胞檢測(cè)），內(nèi)分泌系統(tǒng)干擾（MELN，CALUX、PALM試驗(yàn)），授精（小鼠和牛體外授精檢測(cè)），著床前胚胎發(fā)育（小鼠和牛體外著床前檢測(cè)），胎盤(pán)形成（絨毛膜和周邊細(xì)胞培養(yǎng)，胎盤(pán)表面灌注，滋養(yǎng)層細(xì)胞檢測(cè)），子宮功能（內(nèi)膜、血管膜、基質(zhì)細(xì)胞和移植物檢測(cè)）等。目前，比較成熟的體外試驗(yàn)方法約有15項(xiàng)，涉及生殖和發(fā)育毒性的多個(gè)方面。

2. 著床方面

由于化學(xué)物質(zhì)可能損傷著床過(guò)程，進(jìn)而造成其它生殖系統(tǒng)異常，因此，著床毒性作用研究是生殖毒性的重要方面。體外方法主要集中于對(duì)離體人組織和組織移植物的研究，其中最重要的靶組織是子宮內(nèi)膜，其次是毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞。此外還可利用人胎盤(pán)進(jìn)行化合物的轉(zhuǎn)運(yùn)研究。

3. 胚胎發(fā)育方面

現(xiàn)有的方法是全胚胎培養(yǎng)（W E C）、小鼠胚胎干細(xì)胞試驗(yàn)（EST）和微團(tuán)試驗(yàn)。小鼠EST試驗(yàn)以分化為博動(dòng)的心肌細(xì)胞為檢測(cè)終點(diǎn)。歐洲一些科學(xué)家提出了用人的胚胎干細(xì)胞（hES）用于檢測(cè)神經(jīng)發(fā)育毒性物質(zhì)的替代方法，避免了因毒性反應(yīng)的種間差異引起的化學(xué)物錯(cuò)誤分類(lèi)。關(guān)于著床機(jī)制的數(shù)學(xué)模型也取得了進(jìn)展，QSAR模型開(kāi)發(fā)用于預(yù)測(cè)化學(xué)物的胎盤(pán)轉(zhuǎn)移、可能的內(nèi)分泌紊亂活性作用和代謝方式等。毒性基因組學(xué)結(jié)合功能性指標(biāo)（如表型錨定）用于評(píng)價(jià)受體介導(dǎo)以及分化過(guò)程中基因表達(dá)變化的相關(guān)性和一致性。

已驗(yàn)證的生殖和發(fā)育毒性替代方法

20 03年，三項(xiàng)胚胎毒性替代試驗(yàn)通過(guò)了歐洲替代方法驗(yàn)證中心（ECVAM）的驗(yàn)證，這些實(shí)驗(yàn)是：用于檢測(cè)胚胎毒性的全胚胎培養(yǎng)試驗(yàn)（WEC）、微團(tuán)培養(yǎng)試驗(yàn)（MM）和胚胎干細(xì)胞試驗(yàn)（EST）。2009年雌二醇受體轉(zhuǎn)錄試驗(yàn)被OECD認(rèn)可為指南TG 455，用于內(nèi)分泌干擾物篩查。這些方法不僅可用于篩選試驗(yàn)，還可用于發(fā)育機(jī)制的研究，或作為試驗(yàn)策略的組成部分，或與整體動(dòng)物試驗(yàn)相結(jié)合，或與其它體外試驗(yàn)相結(jié)合，提供有價(jià)值的資料，減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用。

1. 雌二醇受體轉(zhuǎn)錄檢測(cè)

雌二醇受體（ER）是一個(gè)誘導(dǎo)靶基因轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄因子，利用ER的這一特性，將雌二醇受體調(diào)控的DNA序列與容易檢測(cè)的報(bào)告基因連接起來(lái)，這樣可以直接對(duì)雌激素類(lèi)化合物進(jìn)行篩選。如MCF-7、Hela、HepG等細(xì)胞均可作為轉(zhuǎn)染載體成為檢測(cè)細(xì)胞。體外雌二醇受體轉(zhuǎn)錄檢測(cè)（TAs）主要用來(lái)鑒定在體內(nèi)具有激動(dòng)劑或拮抗劑效應(yīng)且能夠影響雌二醇活性的化合物。2009年被OECD認(rèn)可的指南455使用來(lái)自人的宮頸癌并經(jīng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系hERa-HeLa-9903，細(xì)胞暴露于非細(xì)胞毒性濃度的受試物20～24小時(shí)以誘發(fā)報(bào)告基因的產(chǎn)生，每個(gè)試驗(yàn)同時(shí)檢測(cè)4種參考化學(xué)物質(zhì)，強(qiáng)雌激素（17-β雌二醇）、弱雌激素（17-α雌二醇）、極弱雌激素（17-α-甲基睪酮）和陰性對(duì)照（皮質(zhì)甾酮）。熒光素酶活性的測(cè)定采用液閃儀。如果誘發(fā)的最高反應(yīng)相當(dāng)或超過(guò)陽(yáng)性對(duì)照（1 nM 17-α-雌二醇）反應(yīng)的10%則可判定為陽(yáng)性物質(zhì)。

2. 胚胎干細(xì)胞試驗(yàn)（EST）

Laschinski等于1991年將ES細(xì)胞用于體外致畸實(shí)驗(yàn)研究，通過(guò)比較化合物對(duì)ES細(xì)胞和小鼠成纖維細(xì)胞的細(xì)胞毒性，對(duì)致畸物的胚胎毒性進(jìn)行評(píng)估。Heuer等于1994年首次將ES細(xì)胞的分化過(guò)程用于胚胎毒性的檢測(cè)。1997年德國(guó)動(dòng)物試驗(yàn)替代方法評(píng)價(jià)中心（ZEBET）Spielmann等首次建立了利用小鼠細(xì)胞系（成纖維細(xì)胞3T3和胚胎干細(xì)胞D3），確立了兩種細(xì)胞三個(gè)檢測(cè)終點(diǎn)的胚胎干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)法。之后，經(jīng)過(guò)方法優(yōu)化，2003年完成全部驗(yàn)證過(guò)程，被ECVAM認(rèn)可為替代動(dòng)物胚胎毒性試驗(yàn)的方法，該方法廣東檢驗(yàn)檢疫局已將其轉(zhuǎn)化為行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)并用于日常檢測(cè)。

3. 全胚胎培養(yǎng)試驗(yàn)（WEC）

來(lái)源于小鼠、大鼠和兔等哺乳類(lèi)動(dòng)物的胚胎培養(yǎng)可用于檢測(cè)具有發(fā)育毒性的物質(zhì)。大鼠全胚胎培養(yǎng)是從孕期第9～10天大鼠子宮取出胚胎，剝?nèi)eichert膜，放入培養(yǎng)液中加入受試物，在含O₂、CO₂和N₂環(huán)境中旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)。觀察胚胎發(fā)育情況，記錄胚胎存活，檢測(cè)胚芽、卵黃囊直徑、體節(jié)和體長(zhǎng)等情況。以胚胎的心跳和血液循環(huán)是否存在作為胚胎存活的指標(biāo)；以卵黃囊直徑、顱臀長(zhǎng)和頭長(zhǎng)、體節(jié)數(shù)和胚胎重作為胚胎生長(zhǎng)發(fā)育的指標(biāo)；根據(jù)Brown評(píng)分對(duì)器官形態(tài)分化作出評(píng)價(jià)。該方法可用于篩查化學(xué)物的發(fā)育毒性、探討其劑量反應(yīng)關(guān)系和作用機(jī)制。

4. 微團(tuán)培養(yǎng)

微團(tuán)培養(yǎng)（MM）比全胚胎培養(yǎng)簡(jiǎn)單得多，胚胎肢芽細(xì)胞可取自雞、兔或大、小鼠，細(xì)胞一般分離自器官形成中期胚胎的肢體或頭部組織。制成單細(xì)胞懸液后，以高密度接種培養(yǎng)，通過(guò)分析受試物暴露后細(xì)胞分化情況，對(duì)確定的毒理學(xué)終點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。微團(tuán)培養(yǎng)模型可用于體外觀察細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育和分化，探索外源性化合物的致畸作用、細(xì)胞毒性作用及作用機(jī)理研究。

生殖和發(fā)育毒性的替代方法

1.計(jì)算機(jī)輔助精子檢測(cè)

計(jì)算機(jī)輔助精子檢測(cè)（CASA）是通過(guò)觀察化學(xué)物質(zhì)對(duì)牛精子細(xì)胞的毒副作用，評(píng)估化學(xué)物對(duì)雄性生殖力的影響。試驗(yàn)前先進(jìn)行劑量范圍確定試驗(yàn)，然后計(jì)算IC50（與對(duì)照相比，精子總的運(yùn)動(dòng)性下降50%的化學(xué)物濃度），還包括對(duì)精子的生育能力、生存能力、活力、速率、活動(dòng)、精液形態(tài)學(xué)等檢測(cè)指標(biāo)作實(shí)時(shí)分析。CASA方法類(lèi)似于男性的臨床生殖體檢，系統(tǒng)可自動(dòng)得出系列參數(shù)，如曲線速度、直線速度、平均路徑速度、精子頭側(cè)擺幅度、平均移動(dòng)角度等，用于檢測(cè)結(jié)果描述和判定。

2.睪丸間質(zhì)細(xì)胞毒性試驗(yàn)

睪丸間質(zhì)細(xì)胞（Leydig細(xì)胞）分布于生精小管之間的疏松結(jié)締組織中，其主要功能是分泌睪酮。睪丸Leydig細(xì)胞分泌睪酮受到丘腦－垂體－性腺軸的調(diào)節(jié)。研究表明，外源化學(xué)物質(zhì)會(huì)直接損傷萊迪希細(xì)胞影響睪酮分泌。運(yùn)用體外培養(yǎng)的Leydig細(xì)胞，檢測(cè)受試物作用后睪酮分泌量，該方法可作為實(shí)驗(yàn)策略的組成單元，用于雄性生殖毒性的篩查和機(jī)制研究。

3.睪丸支持細(xì)胞毒性試驗(yàn)

睪丸支持細(xì)胞（Sertoli細(xì)胞）是生精小管的主要細(xì)胞，對(duì)精子的發(fā)生非常重要，支持細(xì)胞能合成和分泌多種活性蛋白質(zhì)和多肽因子，如抑制素、激動(dòng)素、雄激素結(jié)合蛋白等。體外培養(yǎng)的Sertoli細(xì)胞，用不同濃度的化學(xué)物作用，檢測(cè)細(xì)胞活性和功能變化，可用于評(píng)價(jià)化學(xué)物對(duì)睪丸支持細(xì)胞的毒性作用。可用兩種細(xì)胞系統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn)，大鼠原代Sertoli細(xì)胞和Sertoli細(xì)胞系（SerW3）。細(xì)胞在37℃培養(yǎng)形成單層，直接將不同濃度的受試物加入細(xì)胞培養(yǎng)液中孵育2～24小時(shí)。孵育結(jié)束后吸出培養(yǎng)基，試驗(yàn)終點(diǎn)包括細(xì)胞毒性（MTT法）、培養(yǎng)液中抑制素B水平測(cè)定（ELISA法）、計(jì)算EC50的值、判斷化學(xué)物對(duì)Sertoli功能的影響。

4.顆粒細(xì)胞甾體生成試驗(yàn)

顆粒細(xì)胞甾體生成試驗(yàn)用于檢測(cè)雌性生殖毒性，細(xì)胞可選用永生化的小鼠顆粒細(xì)胞系NT-1和變異株NT-1- hAROM（表達(dá)人芳香化酶基因），研究受試物對(duì)顆粒細(xì)胞甾體生成水平的影響。如檢測(cè)對(duì)孕酮生成的影響，可將NT-1細(xì)胞與不同濃度受試物孵育，免疫法測(cè)定上清液中孕酮含量，貼壁細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞毒性測(cè)定（MTT檢測(cè)）。如檢測(cè)對(duì)雌二醇生成的影響，可將NT-1-hAROM細(xì)胞與芳香化酶的底物雄烯二酮共孵育，酶聯(lián)免疫法測(cè)定培養(yǎng)液中雌二醇的產(chǎn)量，貼壁細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞毒性測(cè)定（MTT檢測(cè)）。

5.卵泡培養(yǎng)檢測(cè)

卵細(xì)胞的生長(zhǎng)和發(fā)育依賴(lài)于其周?chē)С旨?xì)胞的健康與發(fā)育狀況（即卵泡的形成）。在卵泡的漫長(zhǎng)生長(zhǎng)過(guò)程中，其組成部分在各個(gè)發(fā)育階段對(duì)化學(xué)損傷都是非常敏感的，這些損傷使卵細(xì)胞質(zhì)量下降，可能導(dǎo)致卵細(xì)胞減數(shù)分裂異常、受精失敗或胚胎發(fā)育不良。卵泡檢測(cè)（FBA）利用體外生長(zhǎng)的卵泡試驗(yàn)系統(tǒng)模擬卵巢形態(tài)學(xué)特征，將其暴露于化學(xué)物，通過(guò)形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)和功能指標(biāo)檢驗(yàn)分析化學(xué)物對(duì)卵泡發(fā)生、甾體形成和卵子發(fā)生的影響。可用于對(duì)卵巢功能具有抑制作用或激活作用的化學(xué)物的篩查，用于內(nèi)分泌干擾物的篩查，以用于化合物干擾雌性生殖和受精能力的作用機(jī)制研究。可供檢測(cè)的試驗(yàn)終點(diǎn)很多，如檢測(cè)卵泡存活、分化和反應(yīng)性（排卵感應(yīng)性）；檢測(cè)雄烯二酮/睪酮、雌二醇和孕酮水平；檢測(cè)卵子產(chǎn)量、核成熟度和發(fā)育能力等。

6.芳香化酶測(cè)試

芳香化酶具有將雄性激素轉(zhuǎn)化成雌性激素的功能，卵巢和胎盤(pán)中該酶活性很高，而大部分的殺蟲(chóng)劑和黃體類(lèi)似物都有抑制芳香化酶的活性。體外芳香化酶檢測(cè)（Aromatase tests）通過(guò)測(cè)量芳香化酶對(duì)標(biāo)記的雄烯二酮的代謝能力，判斷受試物是否干擾芳香化酶的活性，可用于篩選環(huán)境干擾物質(zhì)。目前有兩種體外檢測(cè)系統(tǒng)，分別是JEG-3和JAR絨毛癌細(xì)胞系。此外，還可以運(yùn)用人類(lèi)胎盤(pán)微粒體的體外亞細(xì)胞手段檢測(cè)芳香化酶的活性。

7.雌激素受體結(jié)合試驗(yàn)

雌激素受體結(jié)合試驗(yàn)用于檢測(cè)能夠與雌二醇受體（ER）結(jié)合的化合物。雌二醇受體是屬于核激素受體超家族的轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白，其在調(diào)控轉(zhuǎn)錄活化和/或抑制雌二醇應(yīng)答基因方面發(fā)揮重要作用。雌二醇受體結(jié)合試驗(yàn)可檢測(cè)雌激素激動(dòng)劑和拮抗劑，但不能將二者區(qū)分。雌二醇受體體外競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)是通過(guò)定量檢測(cè)受試物和17β-雌二醇與雌激素受體的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合能力，檢測(cè)受試物是否能與ER結(jié)合發(fā)揮雌激素作用或干擾正常雌激素活性。雌激素受體結(jié)合試驗(yàn)可作為實(shí)驗(yàn)策略的組成部分，替代子宮增重動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。

8.雄性激素受體結(jié)合試驗(yàn)

雄性激素受體結(jié)合試驗(yàn)是設(shè)計(jì)用來(lái)檢測(cè)待測(cè)底物與雄性激素受體（AR）的親和力。雄激素受體屬于核激素受體超家族的一種轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白，與甾體類(lèi)激素受體家族的成員高度同源，這些成員包括黃體激素、糖皮質(zhì)激素和鹽皮質(zhì)激素的受體。5α雙氫睪酮（DHT）是雄激素受體的天然配體，一些外源化學(xué)物質(zhì)可能通過(guò)模擬或阻斷DHT發(fā)揮雄激素受體介導(dǎo)的內(nèi)分泌干擾作用。如果外源化學(xué)物質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)與DHT相似，就可能與雄激素受體結(jié)合或干擾DHT與雄激素受體的結(jié)合，從而導(dǎo)致正常生殖生理過(guò)程的紊亂。有些化學(xué)物可直接與雄激素受體結(jié)合，阻斷DHT引發(fā)的細(xì)胞內(nèi)過(guò)程，成為DHT拮抗劑。雄性激素受體親和力檢測(cè)能夠檢驗(yàn)出激動(dòng)劑和拮抗劑，但不能區(qū)分兩者。該試驗(yàn)方法可單獨(dú)運(yùn)用或作為試驗(yàn)策略的組成部分。

9.雄性激素受體轉(zhuǎn)錄檢測(cè)

與雌二醇受體轉(zhuǎn)錄檢測(cè)（TAs）一樣，雄性激素受體轉(zhuǎn)錄檢測(cè)主要用來(lái)鑒定在體內(nèi)具有激動(dòng)劑或抗結(jié)劑效應(yīng)而能夠影響雄激素活性的化合物。這些檢測(cè)方法都是以基因工程細(xì)胞系為基礎(chǔ)，檢測(cè)受雄性激素調(diào)控的報(bào)告基因產(chǎn)物（例如熒光素酶）。試驗(yàn)過(guò)程與雌二醇受體轉(zhuǎn)錄檢測(cè)類(lèi)似，成熟的方法經(jīng)驗(yàn)證后有望通過(guò)OECD的認(rèn)可。

結(jié)語(yǔ)

隨著工業(yè)化的發(fā)展，人們的日常生活已被各種化學(xué)物質(zhì)包圍，越來(lái)越多的具有內(nèi)分泌干擾毒性或生殖發(fā)育毒性的化學(xué)物質(zhì)被科學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，如雙酚A、鄰苯二甲酸酯類(lèi)、壬基酚、尼泊金酯等常見(jiàn)于化妝品的物質(zhì)。因此，在科學(xué)合理使用化學(xué)物質(zhì)的同時(shí)，也應(yīng)加強(qiáng)對(duì)這些物質(zhì)可能存在的生殖毒性進(jìn)行研究，特別是研發(fā)和應(yīng)用快速、特異、敏感和高通量的方法。

可喜的是近年來(lái)國(guó)內(nèi)外對(duì)這個(gè)領(lǐng)域越來(lái)越重視，國(guó)際社會(huì)加快了有效的體內(nèi)或體外方法的標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)程。此外，尚有不少體外檢測(cè)方法有望在3-5年內(nèi)轉(zhuǎn)化成為預(yù)測(cè)外源物質(zhì)生殖發(fā)育毒性的標(biāo)準(zhǔn)方法。當(dāng)然也應(yīng)認(rèn)識(shí)到人類(lèi)生殖發(fā)育過(guò)程的極端復(fù)雜性，有一些毒理學(xué)作用，如生殖行為、分娩、出生后的機(jī)能發(fā)育和促性腺激素的分泌的檢測(cè)，即使是體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也沒(méi)有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。因此，人類(lèi)的生殖過(guò)程中，哪一個(gè)靶器官和生殖生理機(jī)制對(duì)化學(xué)物的損傷較為敏感，以及哪一個(gè)合適的體外模型能覆蓋這一敏感范圍，都必須進(jìn)行評(píng)估和達(dá)成共識(shí)。只有那些科學(xué)性和相關(guān)性明確的方法才有進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和驗(yàn)證的價(jià)值。

致謝：本項(xiàng)目得到廣東省科技攻關(guān)項(xiàng)目的資助（2009B060300013）