楊秀榮,孫淑琴,田濤

摘要：對(duì)影響生防細(xì)菌B579生長(zhǎng)的農(nóng)藥、化肥及作物因子進(jìn)行研究，結(jié)果表明，土壤中現(xiàn)存的農(nóng)藥及化肥不會(huì)影響B(tài)579的生長(zhǎng)和繁殖，此外，番茄、黃瓜等植物能夠明顯促進(jìn)該菌的生長(zhǎng)。

關(guān)鍵詞：生防細(xì)菌B579；農(nóng)藥；化肥；植物；影響

中圖分類(lèi)號(hào)：TQ440.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：ADOI編碼：10.3969/j.issn.1006－6500.2012.02.040

Effect of Pestcide, Fertilizer and Plant on Biocontrol Bacterium B579

YANG Xiu-rong，SUN Shu-qin，TIAN Tao

（Tianjin Institute of Plant Protection，Tianjin 300112，China）

Ａｂｓｔｒａｃｔ: Influence of pesticide, fertilizer and plant on biocontrol bacterium B579 was studied, the results showed that pesticide and fertilizer could not effect the growth and breed of B579, moreover, the plants such as potato and cucumber could promote the growth of B579.

Key words: biocontrol bacterium B579；pesticide；fertilizer；plants；effect

生防菌是植物病害防治中一類(lèi)重要的生物資源，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中對(duì)一些重要病害，尤其是土傳病害的防治起著重要作用，但作為活體使用的生防菌也面臨著生防效果不夠穩(wěn)定[3]、藥效作用緩慢的困擾。隨著現(xiàn)代農(nóng)業(yè)的發(fā)展，土壤中不可避免的農(nóng)藥、化肥等外來(lái)物質(zhì)的添加及殘留，對(duì)生防細(xì)菌是否有殺傷作用，生防細(xì)菌對(duì)不同寄主是否有選擇性，寄主植物根、莖、葉不同部位對(duì)生防細(xì)菌的生長(zhǎng)、繁殖又有何影響都不清楚。因此，探明非生物因素（如農(nóng)藥、化肥）及生物因素（不同寄主及寄主的不同部位）對(duì)生防細(xì)菌的影響，是闡明生防菌作用機(jī)制并提高作用效果的重要方面，為提高和穩(wěn)定菌劑的生防效果、制訂科學(xué)的施用技術(shù)具有重要意義。

生防細(xì)菌B579是天津市植物保護(hù)研究所從天津地區(qū)土壤中篩選出來(lái)的，它對(duì)土傳病原菌具有較好的抑制作用。筆者旨在利用適當(dāng)?shù)姆椒ù龠M(jìn)生防菌在土壤中的定殖和繁殖，達(dá)到操縱管理植株微生態(tài)環(huán)境中微生物群落合理分布、惡化病原菌生存環(huán)境。因此為了達(dá)到這一目的，首先要了解生防細(xì)菌施入土壤以后的微生態(tài)行為，它與宿主植物的關(guān)系，土壤中的農(nóng)藥化肥對(duì)該菌的影響，為生防菌的產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1材料和方法

1.1材 料

1.1.1供試藥劑50%福美雙可濕性粉劑 、80%多菌靈可濕性粉劑、70%甲基托布津可濕性粉劑、75%百菌清可濕性粉劑、25%甲霜靈可濕性粉劑、30%惡霉靈水劑、722 g· L-1霜霉威水劑，以上為防治土傳病害常用藥劑，均為市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)。

1.1.2供試化肥46%尿素、64%二銨、60%氯化鉀、48%復(fù)混肥（16-16-16），均為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上常用肥料，由天津市資源環(huán)境研究所提供。

1.1.3供試作物番茄、辣椒、黃瓜、甘藍(lán)、茄子5種作物長(zhǎng)至2～3片真葉時(shí)備用。

1.1.4供試菌株生防細(xì)菌B579，從天津地區(qū)土壤中篩選獲得，現(xiàn)保存于天津市植物保護(hù)研究所生防室。

1.2方 法

1.2.1化學(xué)農(nóng)藥對(duì)B579的影響采用平板涂布法測(cè)試化學(xué)藥劑對(duì)生防細(xì)菌B579生長(zhǎng)的影響，將生防細(xì)菌在肉汁胨斜面培養(yǎng)基上28 ℃培養(yǎng)24～48 h后，加入無(wú)菌水搖勻，制備成菌懸液，分別在制備好的PDA帶毒平板上滴加B579懸浮液100 μL，之后刮平、涂勻，以無(wú)藥培養(yǎng)基為對(duì)照，每處理重復(fù)3次，置于28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h觀察菌落生長(zhǎng)情況，菌落數(shù)與對(duì)照無(wú)差異為能正常生長(zhǎng)，平板上只有少數(shù)菌落，與對(duì)照有顯著差異為零星生長(zhǎng)，平板上無(wú)菌落即為不能生長(zhǎng)。

1.2.2 化學(xué)肥料對(duì)B579的影響 將化學(xué)肥料用研缽研磨，過(guò)0.15 mm篩，換算成有效濃度，稱(chēng)取一定質(zhì)量溶于100 mL的無(wú)菌水中，制成100倍母液，另外用250 mL三角瓶配制100 mL LB培養(yǎng)基121 ℃滅菌20 min，按照不同比例將肥料母液加入到培養(yǎng)基中，混勻后按照1%接重量接種生防細(xì)菌B579,在180 r·min-1，29 ℃條件下震蕩培養(yǎng)，24 h后用分光光度計(jì)測(cè)量培養(yǎng)液的OD值。

1.2.3植物對(duì)B579的影響將番茄、黃瓜、甘藍(lán)、辣椒、茄子幼苗用清水洗凈，放置于烘干箱內(nèi)烘干，取出用研缽進(jìn)行研磨，過(guò)篩，備用，配制LB培養(yǎng)基，按照要求稱(chēng)取一定量于培養(yǎng)基中，混勻后接種B579,在180 r·min-1，29 ℃條件下震蕩培養(yǎng)，24 h后用分光光度計(jì)測(cè)量培養(yǎng)液的OD值。

1.2.4植物的根、莖、葉對(duì)生防細(xì)菌B579的影響方法同1.2.3。

2結(jié)果與分析

2.1化學(xué)藥劑對(duì)生防細(xì)菌B579生長(zhǎng)的影響

由表1可以看出，只有福美雙對(duì)生防細(xì)菌B579生長(zhǎng)影響較大，而福美雙近年來(lái)由于比較容易出現(xiàn)藥害，生產(chǎn)上作為土壤處理較少使用，而其他6種化學(xué)藥劑在低濃度下對(duì)B579生長(zhǎng)無(wú)任何影響，在高濃度下雖然出現(xiàn)抑制作用，但是生產(chǎn)上使用量根本達(dá)不到這么高的濃度，因此認(rèn)為以上化學(xué)藥劑（福美雙除外）對(duì)生防細(xì)菌B579生長(zhǎng)無(wú)影響。

2.2化肥對(duì)生防細(xì)菌B579生長(zhǎng)的影響

如圖1示，二銨在一定濃度范圍內(nèi)，可以促進(jìn)B579的生長(zhǎng)，當(dāng)濃度為40 mg·L-1時(shí)，B579的生長(zhǎng)量達(dá)到最大。在一般土壤中氨態(tài)氮含量約為10 mg·L-1，因此土壤中存在的氨態(tài)氮可以促進(jìn)B579定殖和生長(zhǎng)。

氯化鉀濃度在4～800 mg·L-1之間既不會(huì)促進(jìn)也不會(huì)抑制生防細(xì)菌B579的生長(zhǎng)，一般土壤中速效鉀的最高含量約為700 mg·L-1[2]，因此土壤中氯化鉀的存在不會(huì)影響B(tài)579生長(zhǎng)和繁殖。

尿素在一定濃度下可以促進(jìn)B579的生長(zhǎng)，濃度在40 mg·L-1時(shí)，B579的生長(zhǎng)量達(dá)到最高，在400 mg·L-1時(shí)與未添加尿素時(shí)B579的生長(zhǎng)量相當(dāng)。一般土壤中硝態(tài)氮含量約為100 mg·L-1，因此不僅不會(huì)抑制B579的生長(zhǎng)，相反有一定的促進(jìn)作用。

復(fù)混肥在4～600 mg·L-1濃度下，B579菌量雖然有下降趨勢(shì)，但是均高于未添加復(fù)混肥情況下的菌量，因此，在這個(gè)濃度范圍內(nèi)可以促進(jìn)B579的生長(zhǎng)，濃度在40 mg·L-1時(shí)B579的生長(zhǎng)量達(dá)到最高，一般土壤中硝態(tài)氮含量為100 mg·L-1，氨態(tài)氮含量為10 mg·L-1，速效磷含量為300～500 mg·L-1，因此土壤中復(fù)混肥的存在不會(huì)影響B(tài)579定殖和生長(zhǎng)，相反有一定的促進(jìn)作用。

2.3植物對(duì)生防細(xì)菌B579生長(zhǎng)的影響

由圖2可以看出，5種作物對(duì)B579生長(zhǎng)均有不同的促進(jìn)作用，其中黃瓜、番茄有明顯的促生作用，而茄子對(duì)B579影響最小。

2.4黃瓜、番茄的根、莖、葉對(duì)B579生長(zhǎng)的影響

由圖2可知黃瓜、番茄對(duì)B579的生長(zhǎng)有明顯的促進(jìn)作用，選用這兩種作物的根、莖、葉對(duì)B579進(jìn)行處理，結(jié)果見(jiàn)圖3，黃瓜、番茄的根、莖、葉對(duì)B579生長(zhǎng)影響不同，依次為黃瓜的莖、葉、根，番茄的葉、莖、根，不論哪個(gè)部位均顯著高于清水對(duì)照，因此，黃瓜及番茄的根莖葉均能促進(jìn)生防細(xì)菌B579的生長(zhǎng)和繁殖，可以為生防細(xì)菌B579施用方法如莖葉噴霧、土壤處理等提供依據(jù)。

3討 論

隨著現(xiàn)代農(nóng)業(yè)的發(fā)展，設(shè)施蔬菜長(zhǎng)期大量地使用農(nóng)藥、化肥，使得土壤板結(jié)、土壤微生物區(qū)系嚴(yán)重惡化（病原微生物逐年累積，有益微生物日益減少）。我們選用生產(chǎn)上頻繁大量使用的防治土傳病害的化學(xué)藥劑及必不可少的化學(xué)肥料，明確了這些藥劑、肥料對(duì)生防細(xì)菌B579影響的濃度范圍，通過(guò)大量查閱文獻(xiàn)并結(jié)合當(dāng)?shù)卦O(shè)施蔬菜農(nóng)藥化肥的使用情況，了解目前本地設(shè)施菜田土壤中農(nóng)藥化肥的含量，兩者進(jìn)行了比較，可以排除農(nóng)藥、化肥兩個(gè)因素為影響生防細(xì)菌防效的主要因素。另外，通過(guò)本研究我們可以將化學(xué)藥劑與生防菌按照一定的比例進(jìn)行混用，作為生防菌應(yīng)用的一個(gè)指導(dǎo)。

通過(guò)不同蔬菜種類(lèi)及同一種蔬菜不同部位對(duì)生防細(xì)菌B579的影響，我們可以看出選用的5種蔬菜均能不同程度的促進(jìn)該菌的生長(zhǎng)，其中番茄、黃瓜最為明顯，且番茄的葉子比根、莖促進(jìn)作用更強(qiáng)，應(yīng)用時(shí)可以考慮葉面噴霧防治番茄葉部病害，而黃瓜的莖、葉、根均有較強(qiáng)的促進(jìn)作用，因此，考慮該菌株更適合應(yīng)用在黃瓜上。

生防細(xì)菌在土壤中定殖受到諸多因素的影響，也是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程，筆者所探討的因素只是其中的一些方面，希望為生防菌劑的應(yīng)用提供參考。

參考文獻(xiàn)：

[1] 葛紅蓮，紀(jì)秀娥，喬傳英. 根圍細(xì)菌防治植物土傳病害的研究進(jìn)展[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005（8）：21-24.

[2] 高偉，朱靜華，高寶巖，等.天津市設(shè)施蔬菜不同種植年限土壤及地下水養(yǎng)分特征[J].華北農(nóng)學(xué)報(bào)，2010，25（2）:206-211.

[3] 楊秀榮，劉水芳，孫淑琴，等.生防細(xì)菌B579的分離篩選及鑒定[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008（3）：91-94

[4] 楊秀榮，王雪蓮，王敏,等.生防細(xì)菌B579對(duì)土傳病害的防治效果及促長(zhǎng)作用[J].中國(guó)生物防治，2008，24（S）：59-61.

[5] 葛紅蓮，陳龍，紀(jì)秀娥，等. 植物內(nèi)生細(xì)菌作為生防因子的研究進(jìn)展[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006（11）：12-15.

[6] 郝保平，于志勇. 當(dāng)前農(nóng)藥使用中存在的主要問(wèn)題與對(duì)策探討[J]. 山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007（1）：58-60.

[7] 葉云峰，付崗，袁高慶，等. 植物土傳病害安全防控技術(shù)[J]. 山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009（7）：64-66.

[8] 張艷麗，劉春元，袁虹霞，等. 生防菌株對(duì)地黃枯萎病的防治效果及其促生作用[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005（4）：46-48.