亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        考馬斯亮藍染色法測定大豆莖葉中蛋白質(zhì)含量

        2012-04-29 10:55:01楊正坤王秀麗龍施華郝再彬單展展周菲菲
        湖北農(nóng)業(yè)科學 2012年20期

        楊正坤 王秀麗 龍施華 郝再彬 單展展 周菲菲

        摘要:應用考馬斯亮藍染色法測定大豆莖葉中蛋白質(zhì)含量。結(jié)果表明,該法測定大豆莖葉中蛋白質(zhì)含量是可行的,其RSD為0.25%~1.27%,回收率為94.9%~106.4%,大豆莖葉蛋白質(zhì)平均含量為7.673%和11.315%。該方法簡便快速,靈敏度高、重現(xiàn)性好、準確率相對較高,可用于微量可溶性蛋白質(zhì)含量的測定。

        關(guān)鍵詞:大豆莖葉;蛋白質(zhì)含量;考馬斯亮藍染色法

        中圖分類號:TS63文獻標識碼:A文章編號:0439-8114(2012)20-4610-03

        蛋白質(zhì)是一項質(zhì)量和資源評價的重要指標[1],用一種快速、準確、方便的方法來檢測蛋白質(zhì)含量是必不可少的。近年來,許多學者用考馬斯亮藍染色法和其他方法對蛋白質(zhì)含量進行了測定[2-9]。蛋白質(zhì)中的酰胺基團與考馬斯亮藍染料中的陰離子結(jié)合使溶液顯藍色,測定效果可通過測定顯色穩(wěn)定性等多個性狀指標進行全面客觀地評價。本試驗采用盆栽大豆,對大豆的莖葉蛋白質(zhì)含量與大豆產(chǎn)量進行考察,通過分析它們之間的影響與關(guān)系,為今后大豆育種工作提供試驗方法。

        1材料與方法

        1.1材料

        供試樣品為大豆莖葉(實驗室自制)。

        牛血清白蛋白(進口分裝),購于上海億欣生物科技有限公司;考馬斯亮藍G-250(進口分裝),購于中國醫(yī)藥(集團)上?;瘜W試劑公司;其他試劑均為國產(chǎn)分析純試劑。

        1.2儀器

        SHB-IIIS循環(huán)水式多用真空泵和抽濾裝置(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)、EL303型電子天平[梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司];Cary50紫外分光光度計(美國瓦里安有限公司)。

        1.3方法

        1.3.1蛋白質(zhì)標準溶液的配制 準確稱取牛血清白蛋白100.0 mg,用去離子水定容至100 mL,即為

        1 mg/mL蛋白質(zhì)標準液,4 ℃保存待用。

        1.3.2考馬斯亮藍G-250溶液的制備稱取考馬斯亮藍G-250 100.0 mg于研缽中,取體積分數(shù)為95%的乙醇(下同)50 mL,從中取約10 mL加入研缽,將考馬斯亮藍G-250研成粉并溶解;輕輕將上層液體轉(zhuǎn)入500 mL燒杯中,再取10 mL乙醇溶液于研缽中研磨,同法收集,重復洗滌3次。最后用20 mL乙醇分次洗滌研缽,合并液體于燒杯中。取體積分數(shù)為85%濃磷酸100 mL分次加入燒杯再轉(zhuǎn)入

        1 L容量瓶,定容,抽濾,得考馬斯亮藍G-250溶液。

        1.3.3標準曲線的繪制分別吸取0.2~1.0 mL標準蛋白質(zhì)溶液于10 mL試管中,各管補加0.15 mol/L NaCl溶液至1 mL,各取0.1 mL于新試管中并加入5 mL考馬斯亮藍 G-250溶液,搖勻,放置 2 min,于595 nm 處測定其吸光度[7]。

        1.3.4樣品中蛋白質(zhì)含量的測定取樣品溶液0.1 mL,按上述方法測定其吸光度,再根據(jù)標準曲線方程計算出樣品的蛋白質(zhì)含量[8]。

        2結(jié)果

        2.1標準曲線回歸方程的建立

        用紫外分光光度計,以0.15 mol/L的NaCl溶液作空白對照,在595 nm處測定對照品溶液吸光度。以吸光度為縱坐標,蛋白濃度為橫坐標,繪制標準曲線見圖1。

        通過測定不同濃度牛血清白蛋白的吸光度得其線性回歸方程式:Y=0.478 3X+0.070 3,R2=0.999 3。

        2.2樣品蛋白質(zhì)含量測定結(jié)果

        按蛋白質(zhì)含量測定方法,同時做3個重復,大豆莖的吸光度為0.434 2、0.440 2和0.437 5 a.u.,大豆葉的吸光度為0.611 4、0.611 0和0.612 1 a.u.。計算大豆莖的蛋白質(zhì)含量為7.608%、7.734%和7.677%,平均含量為7.673%;大豆葉的蛋白質(zhì)含量為11.313%、11.305%和11.328%,平均含量為11.315%。

        2.3穩(wěn)定性試驗

        量取同一樣品溶液 1 mL,每隔 10 min 測定1次,觀測其穩(wěn)定性,結(jié)果見表1,表明在顯色1 h 內(nèi)吸光度穩(wěn)定,RSD分別為0.04%和0.39%。

        2.4重復性試驗

        按上述方法,分別測定大豆莖和葉蛋白提取液的吸光度,檢驗該方法的重現(xiàn)性,結(jié)果見表2,RSD分別為0.83%和1.27%,小于5%,表明重現(xiàn)性較好。

        2.5精密度試驗

        準確吸取牛血清白蛋白溶液(1 mg/mL)0.5 mL進行精密度試驗,連續(xù)測定其吸光度6次,其RSD為0.25%,小于5%,表明精密度較好,結(jié)果見表3。

        2.6回收率測定

        取已配制好的1 mg/mL牛血清白蛋白溶液0.1 mL,加入1 mL大豆莖(或葉)樣品溶液,然后再加入5 mL考馬斯亮藍染色液,搖勻,靜置2 min左右,于595 nm處測定其吸光度,以不加牛血清白蛋白溶液作為空白對照,根據(jù)標準曲線算出相應濃度,然后計算加入樣品蛋白的量,并計算回收率[9],結(jié)果見表4。結(jié)果表明,該方法準確度較高,可滿足大豆莖葉中蛋白含量的快速定量分析。

        3討論

        蛋白質(zhì)分子均具有酰胺基團,棕紅色的考馬斯亮藍G-250染料上的陰離子與蛋白質(zhì)的酰胺基團結(jié)合,使溶液變?yōu)樗{色,由于溶液在595 nm處吸光度與蛋白質(zhì)含量成正比,因此595 nm處測定吸光度,可計算出樣品中蛋白質(zhì)含量[6]。上述結(jié)果表明,考馬斯亮藍與蛋白質(zhì)中的酰胺基團結(jié)合生成的藍色非常穩(wěn)定,在1 h之內(nèi)吸光度值變化很小,重復性較好,精密度較高,同時該方法測定蛋白含量的回收率符合大豆莖葉蛋白質(zhì)含量的測定要求。大豆莖蛋白質(zhì)提取液中蛋白質(zhì)含量在0.7~1.0 mg/mL范圍內(nèi);大豆葉蛋白質(zhì)提取液中蛋白質(zhì)含量在1.1~2.0 mg/mL范圍內(nèi),用考馬斯亮藍染色法測定大豆莖葉蛋白質(zhì)的含量優(yōu)于其他傳統(tǒng)方法[10,11]。但另一方面,該法線性范圍窄,低濃度樣品易受影響,因此,在測定時所用試管須經(jīng)酸浸泡,洗凈后應經(jīng)高溫烘干。當樣品濃度大于一定濃度時,須稀釋測定,另外,可用乙醇和去離子水清洗比色皿上粘染的色素[12]。綜上所述,該法準確率較高且簡便靈敏,對設(shè)備要求低,受干擾小,適宜于測定大豆莖葉的蛋白質(zhì)含量。

        參考文獻:

        [1] 王孝平,邢樹禮.考馬斯亮藍法測定蛋白含量的研究[J].天津化工,2009,23(3):40-41.

        [2] 馬丹.凱氏定氮法測定食品中蛋白質(zhì)含量[J].計量與測試技術(shù),2008,35(6):57-58.

        [3] 孫士青,王少杰,李秋順,等.考馬斯亮藍法快速測定乳品中蛋白質(zhì)含量[J].山東科學,2011,24(6):53-55.

        [4] 馮昕,王吉中,堯俊英,等.考馬斯亮藍法測定乳與乳制品中蛋白質(zhì)含量[J].糧食與食品工業(yè),2010,17(3):57-59.

        [5] 黃婉玉,曹煒,李菁,等.考馬斯亮藍法測定果汁中蛋白質(zhì)的含量[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2009,35(5):160-162.

        [6] 王文平,郭祀遠,李琳,等.考馬斯亮藍法測定野木瓜多糖中蛋白質(zhì)的含量[J].食品研究與開發(fā),2008,29(1):115-117.

        [7] 裴顯慶.用考馬斯亮藍染色方法測定蛋白質(zhì)含量[J].肉類研究,1990(1):36-37.

        [8] 李娟,張耀庭,曾偉,等.應用考馬斯亮藍法測定總蛋白含量[J].中國生物制品學雜志,2000,13(2):118-120.

        [9] 劉小華,張美霞,于春梅,等.考馬斯亮蘭法測定殼聚糖中蛋白的含量[J].中國交通醫(yī)學雜志,2006,20(2):159-160.

        [10] 王愛軍,王鳳山,王友聯(lián),等.低濃度蛋白質(zhì)含量測定方法的研究[J].中國生化藥物雜志,2003,24(2):78-80.

        [11] 王淡兮,孫秀蘭.蛋白質(zhì)定量檢測方法的探討[J].糧食與食品工業(yè),2009(4):49-52.

        [12] 徐杰偉,溫少磊,蔡早育.考馬斯亮藍法測定微量蛋白的條件探討[J].江西醫(yī)學檢驗,2003,21(5):353-354.

        免费人成黄页网站在线一区二区| 综合网在线视频| 中文国产成人精品久久一区| 精品国产日韩亚洲一区在线| 亚洲综合激情另类小说区| 成全高清在线播放电视剧| chinese国产在线视频| 91九色精品日韩内射无| 人人妻人人澡人人爽国产| 男同gay毛片免费可播放| 久久久99精品成人片中文字幕| 白色白色在线视频播放平台| 国产精品一区二区三区卡 | 美女脱了内裤洗澡视频| 亚洲乱码日产精品一二三| 国产精品亚洲五月天高清| 日韩精品免费在线视频| 91九色最新国产在线观看| 国产性生交xxxxx无码| 久久天天爽夜夜摸| 一本色道久久综合亚州精品| 日本在线一区二区三区不卡| 亚洲欧美激情在线一区| 日韩精品一区二区三区四区| 国产精品美女主播一区二区| 亚洲精品天天影视综合网| 欧美性猛交xxxx乱大交蜜桃| 精品一区二区三区中文字幕在线| 国产实拍日韩精品av在线| 漂亮人妻被中出中文字幕久久| 无码人妻AⅤ一区 二区 三区| 亚洲一区二区三区精彩视频| 99久久精品免费看国产一区二区三区| 国产精品黄在线观看免费软件| 97精品国产高清自在线看超| 国产中文字幕亚洲精品| 精品无码国产一区二区三区av| 亚洲成年网站在线777| 丰满人妻一区二区三区52| 免费国产黄网站在线观看视频| 亚洲最大中文字幕无码网站|