鄭欣 吳嚴等

[摘要]目的：觀察含維生素C／E及阿魏酸的抗氧化劑復(fù)合物對模擬目光照射所致皮膚急性日曬傷的保護作用。方法：招募12名健康志愿者，在背部分別選取4個試驗區(qū)域。區(qū)域1和區(qū)域2分別涂抹抗氧化劑復(fù)合物和基質(zhì)共4天，第4天涂抹產(chǎn)品半小時后予1～5倍最小紅斑量的模擬目光照射；區(qū)域3僅予照光而不涂抹任何產(chǎn)品(陽性對照)；區(qū)域4不予照光亦不涂抹任何產(chǎn)品(空白對照)。對各區(qū)域留取大體照片，測量皮膚紅斑指數(shù)。結(jié)果：隨光照劑量增加，各區(qū)域紅斑顏色逐漸加深、紅斑指數(shù)均值逐漸升高。區(qū)域1的紅斑程度及紅斑指數(shù)差值顯著低于區(qū)域2或區(qū)域3。結(jié)論：外用含維生素C／E及阿魏酸的抗氧化劑復(fù)合物可有效保護模擬日光照射引起的急性日曬傷。

[關(guān)鍵詞]抗氧化劑；紫外線照射；日曬傷

[中圖分類號]R758.14

[文獻標識碼]A[文章編號]1008-6455(2012)07-1170-03

紫外線(ultraviolet，UV)照射是引起皮膚氧化應(yīng)激的一個因素。過度的uV照射造成細胞內(nèi)活性氧基團的生成增加，損傷細胞內(nèi)的脂質(zhì)、蛋白和核酸，從而導(dǎo)致皮膚出現(xiàn)曬傷、光老化、免疫抑制、基因突變甚至皮膚腫瘤。局部應(yīng)用抗氧化劑能調(diào)節(jié)這些事件的啟動和進展，消除uV照射引起的皮膚氧化損傷。研究表明，維生素C／E是重要的抗氧化劑，可協(xié)同清除自由基。也有研究表明，阿魏酸具有很強的抗氧化活性，對過氧化氫、超氧自由基、羥自由基、過氧化亞硝基都有強烈的清除作用。本研究旨在探討含維生素C／E及阿魏酸的抗氧化劑復(fù)合物對模擬日光照射引起皮膚日曬傷的保護作用。

1材料和方法

1.1志愿者：招募12名健康女性志愿者，年齡18～60歲，皮膚類型為FitzpatrickⅢ～Ⅳ，每位志愿者均簽署知情同意書。入選標準：無系統(tǒng)性疾病或皮膚??；未接受系統(tǒng)性治療及皮膚局部治療；無光敏史：非妊娠或哺乳婦女；自愿遵守研究方案與指導(dǎo)。該研究經(jīng)中國醫(yī)科大學醫(yī)學倫理委員會審批。實驗于1～3月(北方冬季)進行，以盡量減少外界環(huán)境中uV的影響。

1.2試驗產(chǎn)品：抗氧化劑復(fù)合物(抗壞血酸、生育酚、阿魏酸、氫氧化鈉、溶液／水、雙丙二醇、丙三醇、聚乙二醇單十二醚一23、苯氧乙醇、透明質(zhì)酸鈉)和基質(zhì)(溶液／水、雙丙二醇、丙三醇、聚乙二醇單十二醚23、苯氧乙醇、透明質(zhì)酸鈉)均由美國歐萊雅公司提供。

1.3試驗儀器

1.3.1數(shù)碼相機(Coolpix 5700，Nikon，日本)。

1.3.2日光模擬器：采用Multiport目光模擬器GS-2006(Aohua Co，中國北京)。此日光模擬器有450W氙氣燈和一個雙色性的鏡子。照射光將被WG320與UGll(Schott，C1ichy，法國)濾過傳輸出連續(xù)波長為290～400nm的光。WG320為1mm厚的短的切斷濾光鏡，UGll為lmm厚的長的切斷濾光鏡(Schott)。皮膚表面的光輻照度由校準的SUN5數(shù)字分光輻射度計(中國北京國家測量部)進行測量。此日光模擬器可發(fā)射出15倍太陽強度的模擬日光。

1.3.3窄譜分光光度計(Mexameter MX18，COURAGE+KHAZAKA公司，德國)。

1.4具體操作步驟

1.4.1在志愿者背部取4個非曝光區(qū)域。區(qū)域1和區(qū)域2分別涂抹抗氧化劑復(fù)合物和基質(zhì)各75ml，連續(xù)4天，第4天涂抹產(chǎn)品半小時后予1～5倍最小紅斑量(minimal erythemadose，MED)的模擬日光照射；區(qū)域3僅予上述模擬日光照射而不涂抹任何產(chǎn)品(陽性對照)；區(qū)域4不予照光亦不涂抹任何產(chǎn)品(空白對照)。詳見圖1。

1.4.2于試驗開始前(D1)和照光24h后(D5)分別對受試區(qū)域的各部位留取大體照片。同時，測量皮膚紅斑指數(shù)(erythema index，EI)，每個部位測三次，取平均值。

1.5數(shù)據(jù)處理：EI差值=EI均值-EI均值

1.6統(tǒng)計學分析：應(yīng)用SPSS軟件包進行統(tǒng)計學分析。符合正態(tài)分布資料采用t檢驗進行數(shù)據(jù)分析，非正態(tài)分布資料采用非參數(shù)檢驗進行分析。P<0.05認為具有統(tǒng)計學差異。

2結(jié)果

2.1肉眼所見紅斑：經(jīng)模擬日光照射后，除區(qū)域1的1MED部位未出現(xiàn)紅斑，其它所有照光部位均出現(xiàn)了不同程度的紅斑(圖2)。區(qū)域2和區(qū)域3的1MED部位僅見淡紅斑，與區(qū)域1的2MED部位紅斑程度相同。隨著照光強度的增加，3個區(qū)域的紅斑顏色較前逐漸加深，區(qū)域2和區(qū)域3的5MED部位紅斑顏色最深，呈深紅色甚至伴有輕度水腫，區(qū)域1的5MED部位紅斑程度僅與區(qū)域2和區(qū)域3的3MED部位相當。

2.2各部位EI差值：試驗開始前各區(qū)域EI均值無顯著差異(P>0.05)。經(jīng)1～5倍IVIED的模擬日光照射，各照光部位EI均值逐漸升高。但區(qū)域1的各部位EI差值顯著低于區(qū)域2或區(qū)域3的相應(yīng)部位差值，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，詳見圖3。

3討論

正常皮膚具有相對完善的抗氧化體系，可以消除氧化應(yīng)激，但長期反復(fù)暴露于UV中會產(chǎn)生過多的氧自由基，因不能完全清除而造成氧化損傷。有研究表明，遮光劑僅部分阻止UV進入皮膚，而抗氧化劑的活性可在皮膚內(nèi)維持數(shù)天，通過啟動細胞內(nèi)的保護機制，從皮膚內(nèi)部起到防光作用。在護膚品中加入抗氧化劑可能起到防止UV誘發(fā)的皮膚炎癥、光老化的作用，甚至抑制皮膚腫瘤的發(fā)生。

本研究中，經(jīng)急性模擬日光照射后，陽性對照區(qū)域及基質(zhì)對照區(qū)域的紅斑顏色隨UV劑量增大而逐漸加深，提示UV所致的急性日曬傷呈劑量依賴性。外用含維生素C／E及阿魏酸的抗氧化劑復(fù)合物后，這種劑量依賴性在3～5MED部位表現(xiàn)不再明顯。外用抗氧化劑很好地抑制了uV所致急性日曬傷，1MED的UV不能誘發(fā)紅斑，2MED僅誘發(fā)了隱約可見的紅斑，5MED誘發(fā)的紅斑僅與陽性對照區(qū)域的3MED誘發(fā)的紅斑程度相當。應(yīng)用窄譜分光光度計測得的皮膚表面的EI值可間接檢測皮膚中血紅蛋白的含量，該指標可客觀反映由于毛細血管擴張所致紅斑引起的皮膚顏色的變化，EI值越大提示皮膚越紅。我們的研究測得的EI值與上述肉眼所見的紅斑結(jié)果有相似之處。陽性對照區(qū)域與抗氧化劑區(qū)域的EI差值基本相差一個MED梯度，例如陽性對照區(qū)域2MED的EI差值與抗氧化劑區(qū)域3MED的EI差值相當，以此類推。在同一個MED劑量下，陽性對照區(qū)域或基質(zhì)對照區(qū)域的EI差值顯著高于抗氧化劑區(qū)域的EI差值，進一步提示抗氧化劑對于UV誘導(dǎo)的皮膚變紅起到了抑制作用。

維生素c和維生素E是兩種基本的營養(yǎng)物質(zhì)，可有效清除自由基和阻止氧化壓力誘導(dǎo)的細胞損害。維生素E，主要是a-生育酚，是生物脂質(zhì)相主要的過氧化氫自由基清除者，它的抗氧化作用主要是通過抑制脂質(zhì)過氧化實現(xiàn)的。維生素C，又稱抗壞血酸，通過與過氧化物陰離子或羥氫氧基反應(yīng)來干擾UV誘發(fā)的氧化壓力產(chǎn)生，從而清除細胞和循環(huán)系統(tǒng)水相中的自由基。復(fù)合物中的阿魏酸是植物界普遍存在的一種酚酸，具有潛在的抗氧化活性。它既能抑制與自由基生成相關(guān)酶的產(chǎn)生或活性，又能促進與自由基清除相關(guān)酶的生成或活性，從而清除自由基。當阿魏酸加入到維生素C和維生素E中后，兩種維生素的外用傳輸能力進一步提高，化學穩(wěn)定性提升，對于日光照射的光保護作用成倍提高。

綜上，本研究表明含維生素C／E及阿魏酸的抗氧化劑復(fù)合物可對模擬日光照射誘發(fā)的急性日曬傷起到抑制作用。