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        酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測基礎(chǔ)免疫兒童破傷風(fēng)抗體水平

        2012-04-26 08:39:06朱路平李東麗
        中國全科醫(yī)學(xué) 2012年18期
        關(guān)鍵詞:保護(hù)率試劑盒疫苗

        羅 君,朱路平,李東麗

        破傷風(fēng)是由破傷風(fēng)桿菌 (clostridium tetani)侵入傷口生長繁殖產(chǎn)生毒素而引起的一種急性特異性感染。破傷風(fēng)可在任何年齡發(fā)病,病死率高。為了解0~7歲兒童破傷風(fēng)疫苗全程足量免疫后抗體水平,本研究收集了鄭州市262份0~7歲基礎(chǔ)免疫兒童血清樣品,用國內(nèi)和國外兩種酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (ELISA)試劑盒進(jìn)行破傷風(fēng)IgG抗體定量檢測,并且評價(jià)破傷風(fēng)IgG ELISA試劑的檢測效率和可靠性。

        1 對象與方法

        1.1 研究對象 收集2010年8月—2011年3月鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院0~7歲基礎(chǔ)免疫兒童血清樣本262份,其中男140份,女122份。檢測前所有標(biāo)本-20℃保存。

        1.2 樣本采集

        1.2.1 免疫程序 根據(jù)我國2005年《預(yù)防接種工作規(guī)范》中規(guī)定[1],百白破疫苗為國家免疫規(guī)劃中基礎(chǔ)免疫疫苗,常規(guī)免疫程序?yàn)榘侔灼埔呙缃臃N5劑次,前3劑次為基礎(chǔ)免疫,第4劑次為加強(qiáng)免疫,第5劑次使用疫苗加強(qiáng)免疫1劑次。新生兒出生后3個(gè)月開始接種百白破疫苗第1針,連續(xù)接種3針,每針間隔時(shí)間最短不得少于28 d,在1歲半至2周歲時(shí)再用百白破疫苗加強(qiáng)免疫1針,7周歲時(shí)用精制白喉疫苗或精制白破二聯(lián)疫苗加強(qiáng)免疫1針。

        1.2.2 樣本采集 262份血清樣本抽樣采集于鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院的基礎(chǔ)免疫兒童,包括未接種疫苗的新生兒樣本,及接種疫苗后不同年齡段樣本,抽取的樣本待自然凝固后高速離心,取上層血清于1.5 ml試管中冷凍備檢,并編號。

        1.3 檢測試劑 使用兩種檢測試劑盒,分別是鄭州市安圖綠科生物工程有限公司生產(chǎn)的破傷風(fēng)毒素IgG抗體定量檢測試劑盒 (批號:20101001,簡稱“安圖試劑”)和德國MPBiomedicals Germany GmbH生產(chǎn)的獲得CE注冊的破傷風(fēng)類毒素IgG抗體檢測試劑盒 (批號:TT-204,簡稱“MP試劑”)。

        1.4 檢測方法 ELISA間接法檢測。將血清1∶100稀釋后加入包被有破傷風(fēng)類毒素的96孔酶標(biāo)反應(yīng)板,按照操作程序顯色后450 nm下讀取吸光度 (A)值。使用定量試劑盒提供的含量為0.1、0.2、0.4、0.8和2.0 U/ml的標(biāo)準(zhǔn)血清繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)回歸方程,根據(jù)樣品A值計(jì)算出IgG抗體含量(U/ml);同時(shí)以0.1 U/ml標(biāo)準(zhǔn)血清對應(yīng)的A值為臨界值(Cutoff),確定IgG抗體的陰性或陽性。262份兒童血清樣本用兩種試劑盒進(jìn)行平行檢測,試驗(yàn)中加樣試劑和洗板步驟分別由固定2人分工完成,試驗(yàn)過程嚴(yán)格按試劑盒推薦步驟操作。

        1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn),以p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 基礎(chǔ)免疫兒童血清破傷風(fēng)IgG抗體水平 262份樣本中,“MP試劑”檢出結(jié)果IgG抗體陽性154份,陽性率為58.78%;“安圖試劑”檢出結(jié)果IgG抗體陽性146份,陽性率為55.73%。兩種試劑盒的檢測陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (χ2=1.45,P=0.227,見表1)。

        表1 兒童血清破傷風(fēng)IgG抗體水平Table 1 Tetanus antibodies level of children with fundamental immunity

        2.2 不同年齡段兒童血清破傷風(fēng)IgG抗體水平 兩種試劑盒檢測的不同年齡段兒童血清破傷風(fēng)IgG抗體水平比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P>0.05,見表2)。且不同年齡段的基礎(chǔ)免疫兒童的破傷風(fēng)保護(hù)率達(dá)到了《計(jì)劃免疫管理規(guī)程》的相關(guān)規(guī)定。

        3 討論

        破傷風(fēng)是危險(xiǎn)性很高的感染性疾病,人體內(nèi)破傷風(fēng)IgG抗體的存在主要有兩個(gè)來源:一是新生兒由母親體內(nèi)傳遞來的或普通人群通過被動(dòng)免疫獲得,二是注射免疫后獲得。接種破傷風(fēng)疫苗是有效的預(yù)防手段,因此,我國一直把百白破疫苗列為基礎(chǔ)免疫疫苗,常規(guī)免疫程序?yàn)?劑次,首針接種時(shí)間為出生后3個(gè)月的嬰兒。了解人群特別是基礎(chǔ)免疫兒童的破傷風(fēng)保護(hù)抗體水平很有必要。

        ELISA法檢測因其具有快速、敏感、特異、簡便、結(jié)果容易判定等特點(diǎn),最近幾年被廣泛用于人血清中細(xì)菌抗體水平的檢測。有實(shí)驗(yàn)表明,ELISA法檢測血清破傷風(fēng)IgG抗體的靈敏度可達(dá)到0.004 U/ml[2]。采用間接 ELISA 法檢測百日咳、白喉和破傷風(fēng)抗體,在敏感性、快速性和結(jié)果客觀性及可操作性等方面均優(yōu)于間接血凝法,是代替?zhèn)鹘y(tǒng)的小鼠中和試驗(yàn)法的有效辦法。

        不同地區(qū)、不同種族的人群機(jī)體中破傷風(fēng)IgG抗體與試劑盒的反應(yīng)性強(qiáng)弱存在差異,各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)自己實(shí)際條件及接觸人群建立正常參考值。世界衛(wèi)生組織(WHO)認(rèn)為,ELISA法檢測時(shí),血清中的中和抗體≥0.1 U/ml才被認(rèn)為是陽性,該標(biāo)準(zhǔn)為人破傷風(fēng)抗毒素血漿的篩查工作,和百白破疫苗全程免疫后人體破傷風(fēng)抗毒素水平的檢測提供了重要參考依據(jù)。

        表2 基礎(chǔ)免疫不同年齡段兒童血清破傷風(fēng)IgG抗體水平Table 2 Tetanus antibodies level in different age children with fundamental immunity

        本次抽樣采集的262份0~7歲基礎(chǔ)免疫兒童血清樣品,分別用“安圖試劑盒”和“MP試劑盒”檢測破傷風(fēng)IgG抗體,在實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定時(shí),依據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn),確定0.1 U/ml作為破傷風(fēng)抗體最低保護(hù)濃度。檢測結(jié)果抗體陽性率分別為55.73%和58.78% ,兩種試劑盒檢測結(jié)果無差異。有資料報(bào)道,1~14歲兒童破傷風(fēng)IgG抗體達(dá)到保護(hù)水平 (≥0.1 U/ml)的比例可達(dá)到94.55%[3],而本研究結(jié)果顯示鄭州市0~7歲基礎(chǔ)免疫兒童破傷風(fēng)IgG抗體保護(hù)率僅達(dá)到55%左右,此結(jié)果提示今后加強(qiáng)兒童百白破三聯(lián)疫苗注射的必要性。

        根據(jù)衛(wèi)生部《計(jì)劃免疫管理規(guī)程》要求,新生兒出生后3個(gè)足月開始接種百白破疫苗第1針,說明該人群為破傷風(fēng)易感人群。此次的檢測結(jié)果均顯示,<3個(gè)月新生兒破傷風(fēng)的保護(hù)率在30%以內(nèi),這與文獻(xiàn)報(bào)道“新生兒出生時(shí)具有與母親相同或稍高的破傷風(fēng)抗體的滴度,從而可使新生兒短暫獲得對破傷風(fēng)的被動(dòng)免疫保護(hù)”相符[4];同時(shí),檢測結(jié)果也反映出兒童在未免疫的低月齡 (1~2個(gè)月)內(nèi)最易發(fā)病的實(shí)際情況。有關(guān)文獻(xiàn)建議將免疫程序中的百白破疫苗初免月齡由3個(gè)月齡提前到2個(gè)月齡,與國際上許多國家一致[5]。

        檢測結(jié)果中39名3個(gè)月齡兒童的破傷風(fēng)抗體保護(hù)率僅為15%左右,提示3個(gè)月左右未接種破傷風(fēng)疫苗的嬰兒自身抗體水平較低,體內(nèi)并不存在來自于母體的抗百日咳、抗白喉、抗破傷風(fēng)的三種特異抗體,完全不足以抵抗三種疾病的侵襲,使得未免疫嬰兒3個(gè)月齡內(nèi)患百日咳、白喉、破傷風(fēng)的危險(xiǎn)性增加。

        本研究中,34名4~6個(gè)月新生兒,均為破傷風(fēng)疫苗連續(xù)接種3針,完成了百白破疫苗的基礎(chǔ)免疫。檢測結(jié)果顯示,破傷風(fēng)抗體保護(hù)率達(dá)到82.29%,達(dá)到了《計(jì)劃免疫管理規(guī)程》規(guī)定的>75.0%的要求;54名6~18個(gè)月兒童的破傷風(fēng)的保護(hù)率也達(dá)到80%以上,與4~6個(gè)月的新生兒相比,破傷風(fēng)抗體濃度基本持平?!队?jì)劃免疫管理規(guī)程》規(guī)定,新生兒在1歲半至2周歲時(shí)再用百白破疫苗加強(qiáng)免疫1針,6周歲時(shí)用精制白喉疫苗或精制白破二聯(lián)疫苗加強(qiáng)免疫1針。本研究結(jié)果顯示,>1.5歲的新生兒,破傷風(fēng)的保護(hù)率均為85%左右,與6~18個(gè)月兒童相比,破傷風(fēng)保護(hù)率又有所提高,達(dá)到了《計(jì)劃免疫管理規(guī)程》規(guī)定的>75.0%的要求。

        本研究結(jié)果提示,本地區(qū)0~7歲基礎(chǔ)免疫兒童血清破傷風(fēng)IgG抗體保護(hù)率較低,加強(qiáng)人群破傷風(fēng)類毒素免疫很有必要。3個(gè)足月的新生兒應(yīng)及時(shí)按照規(guī)范要求,全程接種百白破疫苗,并按照規(guī)定接種加強(qiáng)針,以維持體內(nèi)足夠的抗體水平。

        1 衛(wèi)生部.預(yù)防接種工作規(guī)范[R].衛(wèi)疾控發(fā)〔2005〕373號.

        2 郭立君,邵華,楊麗華,等.破傷風(fēng)抗體IgG酶聯(lián)檢測試劑盒的研制 [J].中國生物制品學(xué)雜志,2003,16(4):225-226.

        3 沈月根,姜霞玲,顧謝君.嘉興市秀洲區(qū)健康人群百日咳、白喉、破傷風(fēng)抗體水平監(jiān)測 [J].中國計(jì)劃免疫,2004,10(1):37.

        4 孫月平.對育齡婦女破傷風(fēng)免疫狀況的分析[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2007,23(2):175.

        5 侯啟明.不同區(qū)域嬰兒抗百日咳、白喉、破傷風(fēng)母體抗體水平的調(diào)查 [J].中國計(jì)劃免疫,2006,12(3):209-211.

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