趙菊芬，李 茜，張 琴，楊柳風(fēng)，霍竹蕙，段麗婭

子宮頸癌是最常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一，在全球婦女癌癥死亡率中位居第二。高危型人乳頭狀瘤病毒 (HPV)的持續(xù)感染是宮頸癌及其癌前病變的直接原因，對(duì)HPV感染的檢測(cè)是診斷宮頸病變的重要依據(jù)［1］。HPV感染具有很強(qiáng)的地域性，不同國(guó)家與地區(qū)HPV感染基因分型的流行病學(xué)分布不同。為了解云南紅河和文山多民族地區(qū)HPV感染流行病學(xué)特征，我院采用凱普醫(yī)用核酸分子快速導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)，對(duì)來(lái)自云南紅河和文山多民族地區(qū)的2 887名女性進(jìn)行生殖道21種HPV感染基因亞型篩查，分析常見(jiàn)感染亞型及分布特點(diǎn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2009年3—9月在我院就診的來(lái)自云南省紅河和文山兩個(gè)多民族地區(qū)的女性2 887名，年齡20～79歲，平均年齡 (38.9±2.4)歲。均無(wú)盆腔放療、化療史。

1.2 儀器與試劑 HPV－DNA提取試劑盒、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增儀、凱普Hybrimax醫(yī)用核酸分子快速雜交儀，HPV基因微陣列分型檢測(cè)試劑盒。

1.3 標(biāo)本采集和處理 采用凱普公司配套專(zhuān)用宮頸刷置于宮頸口，沿順時(shí)針旋轉(zhuǎn)5周獲得足夠的移行區(qū)上皮細(xì)胞樣本取出，放入3 ml專(zhuān)用細(xì)胞保存液中，沿刷柄折痕處將宮頸刷柄折斷，旋緊管蓋，做好樣本標(biāo)記，立即送檢。

1.4 檢測(cè)方法 HPV感染基因亞型檢測(cè)步驟:(1)樣本DNA提取:取標(biāo)本500μl，以14 000 r/min離心1 min，棄上清液后，用試劑盒提取DNA。(2)PCR擴(kuò)增:將PCR試劑及Taq酶按比例混合后在反應(yīng)管加入24μl，混合后進(jìn)行PCR擴(kuò)增。每一批同時(shí)擴(kuò)增HPV 18型陽(yáng)性對(duì)照及陰性對(duì)照各一份。(3)核酸分子快速導(dǎo)流雜交:采用凱普醫(yī)用核酸分子快速雜交儀及配套試劑盒，在雜交平臺(tái)上放入標(biāo)記有21種HPV基因型寡核苷酸探針的低密度基因芯片雜交膜，按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行導(dǎo)流雜交，酶標(biāo)顯色。(4)結(jié)果判斷:肉眼觀察檢測(cè)結(jié)果，陽(yáng)性點(diǎn)為清晰可見(jiàn)的藍(lán)紫色圓點(diǎn)，根據(jù)膜條HPV分布圖，判斷陽(yáng)性點(diǎn)為何種類(lèi)型的HPV。本檢測(cè)將HPV分為21種基因亞型，其中13種高危亞型為:16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68，5種低危亞型為:6、11、42、43、44，中國(guó)人常見(jiàn)亞型為:53、66、CP8304。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，p＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV基因型分布 2 887名女性中有406名感染HPV，總陽(yáng)性率為14.1%，21種基因亞型均被檢出。HPV各亞型感染率分布從高到低依次為 HPV 68(24.1%，98/406)、16(19.5%，79/406)、52(13.5%，55/406)、58(9.6%，39/406)、18(9.1%，37/406)、31(8.1%，33/406)、6(6.8%，28/406)、33(5.7%，23/406)、CP8304(5.2%，21/406)、43(4.2%，17/406)、39(3.9%，16/406)、11(3.9%，16/406)、53(3.4%，14/406)、59(2.7%，11/406)、66 (2.0%，8/406)。44 (1.0%，4/406)、56(1.0%，4/406)、35(1.0%，4/406)、45(0.7%，3/406)、51(0.7%，3/406)、42(0.2%，1/406)型。高危型中排列前5位的是:68、16、52、58、18;低危型中最常見(jiàn)的是:6、43;中國(guó)人常見(jiàn)亞型:CP8304。

2.2 不同年齡組女性HPV感染基因亞型檢出情況比較2 887名女性按不同年齡段分為3組，20～35歲組1 328例、36～45歲組1 168例、＞45歲組391例。HPV感染人群中以高危亞型 (包括單純高危感染及高低?；旌细腥纠龜?shù))為主，占82.8%(336/406)。3組的HPV感染檢出率及類(lèi)型比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05，見(jiàn)表1)。

表1 不同年齡組女性HPV感染基因亞型檢出情況比較〔n(%)〕Table1 Comparison of HPV subtype detection between different age groups of women

2.3 不同年齡組女性HPV單一感染和多重感染率比較2 887名女性HPV感染陽(yáng)性406例，其中單一感染330例，占81.3%;二重感染57例，占14.0%;三重感染15例，占3.7%，四重感染3例，占0.7%，六重感染1例，占0.2%;無(wú)五重感染;感染最多的有6個(gè)亞基因型，僅有1例樣本。3組單一感染與多重感染率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05，見(jiàn)表2)。

表2 不同年齡組女性HPV單一感染和多重感染率比較〔n(%)〕Table 2 Comparison of HPV single infection and multiple infections between different age groups of women

3 討論

近年來(lái)，女性生殖道的HPV感染由于與宮頸癌密切相關(guān)而越來(lái)越受到人們的重視。HPV基因分型檢測(cè)方法在評(píng)價(jià)宮頸癌前病變和宮頸癌的流行及發(fā)生方面，被認(rèn)為是一種初篩宮頸癌較好的方法［2］。高危型HPV的持續(xù)感染是宮頸癌及其癌前病變的直接病因，沒(méi)有持續(xù)高危的HPV感染，便沒(méi)有可能發(fā)生宮頸癌。HPV感染的檢測(cè)已成為預(yù)防、診斷、處理宮頸病變的重要依據(jù)［1］。

3.1 HPV感染率及基因亞型存在地區(qū)差異 本研究利用導(dǎo)流雜交技術(shù)對(duì)云南省紅河和文山2個(gè)多民族地區(qū)的2 887名女性的宮頸HPV感染基因亞型進(jìn)行檢測(cè)，HPV感染406例，總感染率為14.1%，高于馮淑燕等［3］報(bào)道的福建廈門(mén)市思明區(qū)1 026例育齡婦女11.6%的感染率;低于沈艷紅等［4］報(bào)道的山西省子宮頸癌高發(fā)區(qū)30～50歲婦女27.55%的感染率和彭秀紅等［5］報(bào)道的廣東674例年輕女性23.33%的感染率以及周楊楊［6］報(bào)道的淮安457例婦女55.6%的感染率。與彭永排等［7］報(bào)道廣州市1 285例20～74歲女性17.7%的感染率相近。高危型HPV持續(xù)感染是宮頸癌及癌前病變發(fā)生發(fā)展的必要條件，在國(guó)際癌癥協(xié)會(huì) (IARC)的最新研究中，15種最常見(jiàn)的亞型分別為 16、18、45、31、33、52、58、35、59、51、73、68、66、53和83［8］。但上述研究未包括中國(guó)人。除16亞型外，18亞型感染率最高;居第3位的在非洲、南亞、歐洲、北美是45亞型，而在美國(guó)中南部則為31亞型;居第4位的在非洲北部是33和31，非洲南部則是33、58和56亞型，美國(guó)中南部是45和33亞型，南亞是52和58亞型，歐洲和北美是31和56、58亞型［9］。日本52亞型居第2位，韓國(guó)33和58亞型分別居第2、3位。目前，全世界HPV感染基因亞型最常見(jiàn)的是16，中國(guó)人中16、18、52、58、31、33是常見(jiàn)亞型［10］，其他常見(jiàn)亞型存在地區(qū)差異。本研究結(jié)果顯示，HPV 68感染率最高，HPV 16為第2位，HPV 52、58為第3、4位，與世界范圍的研究不太一致。但HPV 52、58僅次于HPV 16，這一點(diǎn)符合亞洲人群研究結(jié)果。與我國(guó)境內(nèi)其他地區(qū)相比，HPV常見(jiàn)基因亞型也有一定地區(qū)差異:浙江省臺(tái)州地區(qū)常見(jiàn)基因亞型依次為16、11、52、33、58;北京地區(qū)常見(jiàn)基因亞型依次為16、58、52、53、33;西安地區(qū)常見(jiàn)基因亞型依次為16、6、39、58、11;廣州地區(qū)宮頸癌常見(jiàn)基因亞型為:16、52、58、68、33、53、59、CP3804、44［2］。本研究中云南紅河和文山多民族地區(qū)常見(jiàn)HPV感染基因亞型依次為68、16、52、58、18、31型。楊英捷等［11］研究北京地區(qū)女性，陶萍萍等［12］研究紹興地區(qū)女性，結(jié)果均提示HPV感染基因亞型除16、52、58型外，CP8304在我國(guó)最常見(jiàn)。本研究結(jié)果顯示，中國(guó)人常見(jiàn)HPV感染基因亞型仍為CP8304，與上述研究結(jié)果一致。但本研究中高危亞型HPV 68感染率最高，與其他研究結(jié)果均有所不同，最常見(jiàn)低危亞型HPV 6、43感染率與其他研究結(jié)果一致。表明HPV感染常見(jiàn)基因亞型具有明顯的人群和地域特點(diǎn)。

3.2 HPV感染的年齡分布 目前對(duì)HPV感染與年齡的相關(guān)性有不同觀點(diǎn)。我國(guó)對(duì)山西省子宮頸癌高發(fā)區(qū)30～50歲女性HPV感染的調(diào)查結(jié)果顯示，不同年齡女性HPV感染率無(wú)明顯差異［4］。楊英捷等［11］報(bào)道北京地區(qū)女性各年齡段HPV感染檢出率差異有顯著性意義。王魯平等［1］報(bào)道北京地區(qū)各年齡組女性HPV感染無(wú)差異，但年齡是HPV感染的重要因素，30歲以前的性活躍期，HPV感染頗為常見(jiàn)且易于清除;30歲以后HPV感染率下降，但隨著年齡增長(zhǎng)，宮頸癌發(fā)病率明顯上升。高危型HPV感染容易促成宮頸癌的發(fā)生，并隨年齡增加其構(gòu)成比逐步增加［13］。本研究結(jié)果顯示，不同年齡段HPV感染率無(wú)差異。

HPV感染主要通過(guò)性生活傳播，感染后通常無(wú)明顯的臨床癥狀。HPV在人群中普遍存在，然而大多數(shù)女性HPV感染是一過(guò)性的，特別是年輕女性機(jī)體對(duì)病毒的限制或清除功能遠(yuǎn)比年長(zhǎng)女性強(qiáng)［14］。因此，應(yīng)用HPV檢測(cè)在宮頸癌防癌篩查中應(yīng)注意受檢者的年齡。35歲以后高危亞型HPV的持續(xù)感染是宮頸癌的直接原因，特別是同一基因高危亞型HPV的持續(xù)感染更易造成宮頸癌。因此，對(duì)已婚女性，尤其對(duì)圍絕經(jīng)期女性積極開(kāi)展HPV感染基因亞型檢測(cè)以預(yù)防宮頸癌及宮頸癌前病變的發(fā)生很重要。

3.3 HPV多重感染情況 云南省紅河和文山兩地區(qū)女性HPV感染以單一感染為主，占81.2%。HPV多重感染率為18.71%，低于陶萍萍等［12］報(bào)道的44.35%。本研究結(jié)果顯示，在多重感染中，二重感染比例最高，為75.0%，各年齡段的單一感染率及多重感染率無(wú)差異。HPV感染的基因亞型數(shù)的多少是否提高宮頸病變的發(fā)生率一直是學(xué)者們關(guān)注的問(wèn)題，但目前仍無(wú)統(tǒng)一說(shuō)法。不少學(xué)者認(rèn)為HPV多重感染并不增加宮頸癌的發(fā)生，但也有學(xué)者認(rèn)為HPV多重感染出現(xiàn)持續(xù)性感染的危險(xiǎn)性更大，而HPV的持續(xù)感染是宮頸病變發(fā)生的原因，因此，多重感染易導(dǎo)致宮頸病變［15］。HPV多重感染可能與患者的性伴侶數(shù)有關(guān)，性伴侶越多，多重感染可能性就越大。研究發(fā)現(xiàn)，HPV單一感染和多重感染的清除率相當(dāng)，但某些特殊亞型，如HPV 16的感染和多重感染清除率低可能更易導(dǎo)致持續(xù)性感染，發(fā)生宮頸上皮內(nèi)瘤變 (CIN)2、3級(jí)甚至鱗癌(SCC)［16］。對(duì)于云南紅河和文山地區(qū)HPV感染基因亞型與宮頸病變的關(guān)系，需在以后的工作中繼續(xù)研究。

由于HPV感染與宮頸癌及癌前病變的關(guān)系密切，且高危亞型與低危亞型以及單一和多重感染引起組織學(xué)變化不同，因此，早期、定期進(jìn)行HPV分型檢測(cè)并結(jié)合宮頸細(xì)胞學(xué)檢查對(duì)宮頸癌的預(yù)防和治療極為重要。

1 于妍妍，金哲，劉艷霞，等.宮頸高危HPV感染與陰道內(nèi)環(huán)境相關(guān)因素分析 ［J］.疑難病雜志 ，2011，10(9):673.

2 羅招凡，王惠英，彭永排，等.快速導(dǎo)流雜交法檢測(cè)人乳頭瘤病毒基因分型及其臨床意義 ［J］.中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2007，27(9):144－145.

3 馮淑燕，馮淑玲.1026例育齡婦女HPV感染情況調(diào)查及分析［J］.中國(guó)婦幼保健，2011，26(9):1374－1377.

4 沈艷紅，陳鳳，黃曼妮，等.我國(guó)山西省子宮頸癌高發(fā)區(qū)人乳頭瘤病毒感染調(diào)查［J］.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)學(xué)報(bào)，2003，25(4):381－384.

5 彭秀紅，毛玲芝，鄧群娣，等.人乳頭瘤病毒DNA分型檢測(cè)在年輕婦女宮頸病變?cè)\斷中的價(jià)值 ［J］.中國(guó)生育健康雜志，2009，20(2):183－186.

6 周楊楊.人乳頭瘤病毒感染篩查結(jié)果分析［J］.臨床檢驗(yàn)雜志，2009，27(3):187－192.

7 彭永排，林仲秋，陸曉楣，等.廣州市1285例志愿者宮頸人乳頭瘤病毒病毒感染調(diào)查 ［J］.國(guó)際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào)，2010，16(1):20－24.

8 鐘偉明，郭靜，吳漢鋒，等.高危型人乳頭瘤病毒感染狀況和年齡分布［J］.中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2011，14(5):1515.

9 邱小華，劉偉.宮頸癌患者人乳頭瘤病毒基因檢測(cè)分型研究 ［J］.中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2011，14(7):2360.

10 郜紅藝，張佳立，張江宇，等.人乳頭瘤病毒病毒感染者宮頸組織病理學(xué)研究［J］.熱帶醫(yī)學(xué)雜志，2006，6(7):188－192.

11 楊英捷，趙健.2285例女性下生殖道人乳頭瘤病毒病毒感染篩查結(jié)查分析［J］.中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，2006，27(6):111－113.

12 陶萍萍，芐美璐，歐華，等.導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)在人乳頭狀瘤病毒檢測(cè)中應(yīng)用的研究 ［J］.中華婦產(chǎn)科雜志，2006，41(1):43－47.

13 周武，陳占國(guó)，陶志華，等.不同HPV亞型的多重感染和年齡因素與宮頸病變的關(guān)系［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2008，18(12):172－174.

14 涂權(quán)梅，邱海凡，劉奕，等.人乳頭瘤病毒檢測(cè)篩查早期宮頸癌的意義——婦科門(mén)診3 700例人乳頭瘤病毒篩查分析［J］.中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2010，13(5):1611.

15 呂榮宇.宮頸病變與HPV多重感染的關(guān)系探討［J］.中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2007，7(9):146－147.

16 周莉，陳姍，張帝開(kāi)，等.持續(xù)性人乳頭瘤病毒感染與宮頸癌的研究進(jìn)展 ［J］.中國(guó)病理生理雜志，2010，26(12):2482－2486.