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(湖南中醫(yī)藥大學藥學院，湖南 長沙 410208)

竹瀝為禾本科剛竹屬植物淡竹(PhyllostachysnigroMunrovar.hcninis(Mif)StapfetRendle)的莖用火烤灼而流出的液汁。其性味甘苦，寒。入心、胃經(jīng)，具有清熱化痰，鎮(zhèn)驚利竅之功能。臨床上主要用于治腦卒中痰迷，肺熱痰壅，驚風，癲癇，壯熱煩渴，子煩,破傷風[1]。竹子品種繁多，分布廣泛，可見不同產(chǎn)地、不同品種竹子所制竹瀝質(zhì)量、藥效不同。本實驗所選竹子產(chǎn)地均為竹源較豐富地區(qū)，品種也是較常見竹種，采用水提取法制取竹瀝[2]，通過建立其HPLC指紋圖譜，比較其差異,探索其基本成分規(guī)律，并鑒別真?zhèn)?，從而為中藥材種植采收規(guī)范和打擊假冒偽劣產(chǎn)品奠定基礎(chǔ)?，F(xiàn)將實驗結(jié)果，報道如下。

1 儀器與試藥

AR1140電子分析天平(奧豪斯國際貿(mào)易有限公司)；Waters高效液相色譜儀(包括Waters1525泵，Waters2410檢測器Refractive Index Detecter,Breeze工作站)；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)；RE-52C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(鞏義市英峪予華儀器廠)；800型離心沉淀器(長沙市科偉儀器廠);KDM型調(diào)溫電熱套(山東鄄城華魯電熱儀器有限公司)。

愈創(chuàng)木酚對照品(供含量測定用，批號:111510-200202；購于中國藥品生物制品檢定所)；乙腈為色譜純，其他為分析純；水為2次重蒸餾水。

實驗中所用樣品種類及產(chǎn)地見表1。樣品經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學藥學院生藥教研室周日寶教授鑒定，均為禾本科剛竹屬植物竹子的新鮮桿莖，見表1。

表1 樣品產(chǎn)地及品種

2 實驗方法

2.1 色譜條件 色譜柱：Dikma DiamonsilTMC18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫為30 ℃；流速：1.0 mL/min；進樣量：10 μL；檢測波長：254 nm；流動相梯度如表2，記錄時間為80 min。

表2 流動相梯度(A：乙腈，B：0.1%磷酸水溶液)

2.2 樣品溶液的制備 稱取竹子粉末50 g，加7倍量水浸泡1 h后，武火煮沸,沸后用文火煮50 min，濾過，濾渣加5倍量水，武火煮沸，沸后用文火煮40 min，濾過,合并濾液，減壓濃縮(70 ℃水溫)，定容至100 mL量瓶中，即得[2]。

2.3 供試品溶液的制備 精密量取竹瀝樣品溶液20 mL，放置冰箱24 h，取出濾過，濾液加水定容于25 mL量瓶中，取10 mL，離心15 min(轉(zhuǎn)速4 000 r/min)，上清液過0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液備用[3]。

2.4 偽品供試品溶液的制備 毛竹制偽品：將毛竹點燃插入水中，再按2.3處理制成。淡竹制偽品：將淡竹點燃插入水中，再按2.3處理制成。

2.5 檢測波長的確定 先后在200、210、220、254、275、285 nm處檢測，結(jié)果表明，只有在 254 nm處檢測，峰數(shù)較多，基線較平穩(wěn)，故選擇254 nm作為指紋圖譜的檢測波長[3]。

2.6 方法學考察

2.6.1 精密度實驗 取樣品1的供試品溶液，連續(xù)進樣6次，測定高效液相色譜圖，結(jié)果 6次進樣各共有峰相對保留時間及相對峰面積的相對標準偏差(RSD)均小于5%，表明儀器精密度良好[3]。

2.6.2 穩(wěn)定性實驗 取樣品1的供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12 h進樣，測定高效液相色譜圖，結(jié)果 6次進樣各共有峰相對保留時間及相對峰面積的相對標準偏差(RSD)均小于5%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定[3]。

2.6.3 重復(fù)性實驗 取樣品1溶液6分，精密量取，按文中3.3項制備供試品溶液，分別進樣，測定高效液相色譜圖，結(jié)果 6次進樣各共有峰相對保留時間及相對峰面積的相對標準偏差(RSD)均<5%，表明此分析方法的重復(fù)性較好[3]。

3 實驗結(jié)果

3.1 將不同產(chǎn)地、相同品種的樣品HPLC圖譜導入國家藥典委員會“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2004A版”，對照譜生成方法采用中位數(shù)，時間窗寬度0.20，進行自動匹配，所得見圖1～圖4。

長沙(S1)、湘潭(S2)/淡竹/(29個共有峰，相似度0.796)

廣西(S1)、江西(S2)、長沙(S3)/水竹/(25個共有峰)

河南(S1)、廣西(S2)/甜竹/(28個共有峰，相似度0.610)

河南(S1)、重慶(S2)/苦竹/(28個共有峰，相似度0.902)

3.2 將相同產(chǎn)地、不同品種的樣品HPLC圖譜導入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)，所得圖譜見圖5～圖8。

3.3 真、偽竹瀝指紋圖譜 見圖9。

長沙/斑竹(S1)、淡竹(S2)、水竹(S3)/(20個共有峰)

湘潭/叢竹(S1)、淡竹(S2)/(26個共有峰，相似度0.881)

廣西/水竹(S1)、甜竹(S2)/(19個共有峰，相似度0.426)

河南/苦竹(S1)、甜竹(S2)/(29個共有峰，相似度0.824)

長沙淡竹(S3)與偽淡竹(S1)、偽毛竹(S2)

4 結(jié)論

淡竹瀝中主要含有氨基酸、酚類成分、無機元素、有機酸4大類成分[4]，無機元素和有機酸為植物中普遍含有的成分。根據(jù)文獻[5-6]報道，淡竹瀝中的氨基酸及愈創(chuàng)木酚被認為是清熱化痰作用的有效成分。天然酚性化合物具有廣泛的生理作用，一般簡單的酚性化合物如愈創(chuàng)木酚多具有抗感染作用，淡竹瀝中的愈創(chuàng)木酚有減輕炎癥，減少呼吸道分泌物的作用?；谥駷r祛痰的主要作用，故選擇愈創(chuàng)木酚作為有效成分進行含量測定。

竹的種類很多,共計500余種，大多可供庭院觀賞、經(jīng)濟實用，竹子藥用也早有記載。根據(jù)歷代文獻記載鮮竹瀝主要是以淡竹為原料制備而得，梁代陶宏景認為也可采用苦竹和慈竹為原料[1]?，F(xiàn)在用來制備鮮竹瀝的竹種不僅僅局限于淡竹一種，因此本實驗選用常見的有代表性的7種竹子為原料進行實驗。

通過實驗研究發(fā)現(xiàn)：不同產(chǎn)地的同一品種竹瀝的指紋圖譜存在較大差異；相同產(chǎn)地的不同品種竹瀝的指紋圖譜存在較大差異；由于不同產(chǎn)地不同品種竹子所制竹瀝指紋圖譜存在較大差異，可以肯定其藥效也不同。在竹瀝的生產(chǎn)加工過程中，應(yīng)規(guī)范竹子的產(chǎn)地、品種。

與竹瀝比較，偽竹瀝幾乎不具有共有峰且含量極低。利用指紋圖譜可對偽竹瀝進行真?zhèn)舞b別。

[1]梁·陶弘景.本草經(jīng)集注[M].北京:群聯(lián)出版社影印,1955.

[2]李紅,劉黨生,將孟良,等.竹瀝水提取方法的優(yōu)選研究[J].中藥材,2009,32(4):620-622.

[3]周孟輝,李紅,將孟良,等.不同采收期水竹所制竹瀝的HPLC指紋圖譜研究[J].湖南中醫(yī)藥大學學報,2009,29(3):33-36.

[4]歐敏銳,李忠琴,周訓勝,等.福建產(chǎn)竹醋液(竹瀝)的組分分析[J].福建大學學報,2003,31(3)：360-363.

[5]殷玉生,丁青龍.竹瀝止咳成分探討及臨床療效觀察[J].中國醫(yī)院藥學雜志,1988(11):519-521.

[6]殷玉生,丁青龍.竹瀝淺淡[J].江西中醫(yī)藥,1987(4):47.