劉金瑩，唐 燕，王洪鑫，王炫策，許 新*

(1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130117；2.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)研發(fā)中心，吉林 長(zhǎng)春 130117)

腦血管疾病是發(fā)生在腦部血管的因顱內(nèi)血液循環(huán)障礙而造成腦組織損害的一組疾病，具有發(fā)病率、致殘率和致死率高的特點(diǎn)[1]。利腦心膠囊是由丹參、紅花等15味藥物組成的具有活血化瘀、補(bǔ)氣行滯、降脂化濁之功效的復(fù)方中藥制劑，廣泛用于心腦血管疾病的治療。本實(shí)驗(yàn)對(duì)利腦心膠囊對(duì)抗缺血性腦血管疾病的作用及其可能機(jī)制進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，報(bào)告如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物 健康Wistar大鼠120只，雌雄各半，體質(zhì)量250～350 g,吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SCXK-(吉)2008-0005。

1.2 藥物 利腦心膠囊藥粉：由吉林敖東藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司提供(批號(hào)：110414)。通脈顆粒：市售，河北萬(wàn)歲藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(批號(hào)110303)。

1.3 試劑與材料 線栓，購(gòu)自北京沙東生物技術(shù)有限公司；MDA試劑盒，SOD試劑盒，考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒，本實(shí)驗(yàn)所用試劑盒，均由南京建成生物工程研究所提供。

1.4 儀器 低溫超速離心機(jī)，可調(diào)高速勻漿器，紫外可見分光光度計(jì)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 模型制作 參照改良后的Zea Longa線栓法[2-3]建立大鼠大腦中動(dòng)脈梗死(MCAO)模型，待大鼠清醒后觀察其行為和神經(jīng)癥狀，參照神經(jīng)學(xué)分級(jí)方法[4]，選取提尾懸空時(shí)向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈的大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。

2.2 樣品采集與處理 血漿[5]與腦組織[6]的采集與處理參照文獻(xiàn)即可。

2.3 血漿與腦組織中SOD、MDA含量測(cè)定 所有操作均按試劑盒說(shuō)明書程序進(jìn)行。

2.4 病理學(xué)檢查 腦切片行常規(guī)HE染色，然后光鏡下觀察大鼠腦組織情況。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 血漿和腦組織中SOD、MDA含量測(cè)定結(jié)果 見表1，圖1。

圖1 大鼠血漿和腦組織中SOD、MDA含量測(cè)定結(jié)果

表1 大鼠血漿和腦組織中SOD、MDA含量測(cè)定結(jié)果(±s，n=8)

模型組與對(duì)照組比較，血漿和腦組織中SOD活力明顯降低，MDA含量明顯升高，兩者相比有極顯著性差異(P<0.01),證明本實(shí)驗(yàn)造模成功；利腦心膠囊高、中、低劑量組和通脈顆粒組與模型組比較，都有提高血漿和腦組織中SOD活力，降低MDA含量的作用，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；利腦心膠囊3個(gè)劑量組兩兩比較亦有差異，對(duì)血漿和腦組織中SOD活力和MDA含量的影響均以利腦心膠囊中劑量組(P<0.01)效果最佳。

3.2 病理學(xué)檢查結(jié)果 對(duì)照組大鼠腦組織結(jié)構(gòu)正常，細(xì)胞形態(tài)正常，胞漿豐富，核周圍少量氣泡；模型組大鼠腦組織水腫，部分腦細(xì)胞壞死，細(xì)胞核縮小，核周圍空泡多；通脈顆粒組和利腦心膠囊各劑量組對(duì)腦組織病變面積、組織水腫程度和細(xì)胞壞死程度等均有所改善。

4 討論

大鼠腦缺血模型有2種，分為全腦缺血模型和局灶性腦缺血模型[7]。全腦缺血模型多用于缺血再灌注對(duì)腦組織影響的研究，而局灶性腦缺血模型更接近人類腦血栓、腦栓塞等癥的發(fā)病過(guò)程和體征。線栓法自1986年Koizumi等[8]首次報(bào)道該模型以來(lái)，研究者們不斷探索，本實(shí)驗(yàn)采用Zea Longa的方法并加以改進(jìn),無(wú)需開顱即可形成穩(wěn)定、確切的腦缺血病灶，手術(shù)操作簡(jiǎn)單易行，并且降低了動(dòng)物死亡率。

組織處于缺氧狀態(tài)時(shí)，體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生大量氧自由基，它可以造成生物膜系統(tǒng)損傷以及細(xì)胞內(nèi)氧化磷酸化障礙，產(chǎn)生具有細(xì)胞毒性的過(guò)氧化物，是人體疾病、衰老和死亡的重要影響因素。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物，它的含量可直接反映出體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程的程度,從而間接反映體內(nèi)的氧自由基水平；SOD是體內(nèi)主要的抗氧化酶,具有清除自由基的能力。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，利腦心膠囊可提高腦缺血大鼠血漿及腦組織中SOD活力，降低血漿和腦組織中MDA含量，從而減輕自由基對(duì)腦組織的損害。其對(duì)中動(dòng)脈阻斷腦缺血模型大鼠的治療作用，可能與其增強(qiáng)SOD清除自由基的能力和抑制MDA的產(chǎn)生有關(guān)。

目前，市場(chǎng)上治療缺血性腦卒中的西藥多達(dá)幾十種[9]，大致分為以下6類：血管擴(kuò)張藥(如潘生丁等)，改善微循環(huán)、擴(kuò)充血容量的藥物(如低分子右旋糖酐等)，溶解血栓的藥物(如尿激酶等)，抗凝藥物(如肝素等)，防止血小板凝聚藥(如阿司匹林等)和鈣離子拮抗劑(如尼莫地平等)。這些藥物雖然在治療缺血性腦卒中方面有較好的療效，但不良反應(yīng)較大,稍有不慎就會(huì)引起腦出血等意外發(fā)生。中藥在治療腦缺血疾病方面，以活血化瘀藥為君藥，配伍行氣調(diào)和的藥物，內(nèi)調(diào)外養(yǎng)，且無(wú)毒副作用。

[1]張林,李然,陳金,等.補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)功能、腦梗死體積和血清IL-10含量的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志,2009(增刊):42-43.

[2]徐立新,袁芳.改良的大鼠腦局部缺血模型[J].中國(guó)康復(fù)理論與實(shí)踐,2005,11(1):23-24.

[3]Zea Longa E,Weinsten PR,Carlson S,et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniotomy in rats[J].Stroke,1989,20:84-91.

[4]吳遠(yuǎn)華,朱廣旗,胡蓉,等.線栓法大鼠腦缺血再灌注模型改良與評(píng)價(jià)[J].中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志,2010,13(18):4-6.

[5]SU Yan-bin,JIANG Yi-zhong,LU Ming,et al.Regulation of Content of Malondialdehyde by Siqi Decoction via Increasing Activity of Superoxide Dismutase in Blood Serum of Rats with Myocardial Ischemia[J].Chem.Res.Chinese Universitles,2009,25(5):686.

[6]楊春根.補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐,2010,24(1):36-39.

[7]李雪麗,朱丹.腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ偷难芯窟M(jìn)展[J].中央民族大學(xué)學(xué)報(bào),2010,19(1):23-26.

[8]Koizumi J,Yoshida Y,Nakazawa T,et al.Experimental studies of ischemic brain edema.I.A new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area[J].Jpn J Stroke,1986(8):1-8.

[9]劉國(guó)利,沈途,張錦英.異氟醚預(yù)處理對(duì)缺血再灌注損傷后幼兔心肌INF-α和iNOS mRNA表達(dá)的影響及其機(jī)制[J].吉林大學(xué)(醫(yī)學(xué)版),2011,37(4):622-625.