佟 欣,劉丹丹,衛(wèi) 彥,寇吉友,楊添淞,喬立達(dá)

(1.大西洋中醫(yī)學(xué)院，美國(guó)佛羅里達(dá)州；2.現(xiàn)代中醫(yī)藥研究所，黑龍江 哈爾濱 150040；3.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040；4.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是嚴(yán)重威脅人類健康的常見(jiàn)病、多發(fā)病，是老年人一種常見(jiàn)的以學(xué)習(xí)記憶能力損害為主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。AD是以記憶、認(rèn)知等智能障礙為主要臨床表現(xiàn)的慢性大腦退行性變性疾病[1]。隨著人口老齡化進(jìn)程的加劇，阿爾茨海默病的發(fā)病率呈升高趨勢(shì)[2]，已成為繼心腦血管疾病、癌癥之后的又一致死疾病[3]。本組研究采用D-半乳糖(D-galactose，D-gal)建立AD動(dòng)物模型，通過(guò)電針?lè)椒▽?duì)其進(jìn)行干預(yù)，觀察其療效，探討其改善認(rèn)知功能的效應(yīng)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康雄性Wister大鼠，清潔級(jí)，體質(zhì)量(250±25)g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 主要試劑與儀器 注射用東莨菪堿(由河南竹林眾生制藥股份有限公司生產(chǎn));D-半乳糖(由北京化學(xué)試劑公司生產(chǎn))；胃飼用A1C13(由河南南宮益達(dá)化工廠生產(chǎn))；跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)儀(參照金杰[4]設(shè)計(jì)方法自行制作)；電針儀(型號(hào):G680，由濟(jì)南宏興達(dá)經(jīng)貿(mào)有限公司生產(chǎn))；無(wú)菌針灸針(華佗牌，規(guī)格:0.40 mm×25 mm不銹鋼毫針，由蘇州醫(yī)療用品廠有限公司生產(chǎn))。

1.3 動(dòng)物分組 常規(guī)喂養(yǎng)1周后，篩選出具有學(xué)習(xí)和記憶能力的大鼠24只,按體質(zhì)量隨機(jī)分為模型組、電針組和空白對(duì)照組各8只。

1.4 試驗(yàn)動(dòng)物造模 3組大鼠均普通飼料正常食水喂養(yǎng)7 d。空白對(duì)照組持續(xù)上述常規(guī)飼料、飲食，胃飼和腹腔注射與模型組相同容量的生理鹽水，共持續(xù)28 d，于實(shí)驗(yàn)觀察前10 min，給予腹腔注射用東莨菪堿2 mg/kg。模型組和電針組大鼠均每日腹腔注射D-半乳糖(48 mg/kg)，每日胃飼A1C132mL，余處置同對(duì)照組。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法 電針治療：將大鼠固定于自制束鼠器操作臺(tái)上,應(yīng)用0.40 mm×25 mm不銹鋼毫針，針刺大鼠“百會(huì)”“腎俞”“足三里”，取穴參照《大鼠穴位圖譜的研制》中有關(guān)所選腧穴定位。針刺得氣后，接通G6805脈沖電療儀以連續(xù)波，頻率為150 Hz,強(qiáng)度以大鼠肢體輕度抖動(dòng)為度，1次/d，時(shí)間3～5 min。6 d為1個(gè)療程,療程間休息1 d,共治療4個(gè)療程。

1.6 大鼠認(rèn)知行為觀察 應(yīng)用跳臺(tái)實(shí)驗(yàn):采用被動(dòng)條件15 cm×30 cm×30 cm反應(yīng)箱實(shí)驗(yàn)裝置，箱底鋪直徑1 mm銅柵，接通交流電36 V，反應(yīng)箱內(nèi)右后側(cè)放置一個(gè)大鼠逃避電擊橡皮墊的安全區(qū)(直徑和高度均4.5 cm)。大鼠受刺激后,正常的反應(yīng)應(yīng)是躲避電擊跳到平臺(tái)上。訓(xùn)練和測(cè)試時(shí)把大鼠放入反應(yīng)箱內(nèi)，置于箱內(nèi)使其適應(yīng)環(huán)境3 min后，接通交流電(36 V),持續(xù)達(dá)5 min。學(xué)習(xí)測(cè)試成績(jī)：記錄大鼠首次跳到橡皮墊上所需時(shí)間(即：潛伏期)、記錄5 min內(nèi)大鼠跳下橡皮墊的次數(shù)(即：錯(cuò)誤次數(shù))、記錄大鼠受電擊總時(shí)間。記憶保持測(cè)試成績(jī)：24 h后重復(fù)上述試驗(yàn)，記錄大鼠第1次跳下橡皮墊所需時(shí)間、5 min內(nèi)跳下橡皮墊的次數(shù)及受電擊總時(shí)間。3組大鼠均連續(xù)訓(xùn)練5天，于第6天進(jìn)行大鼠學(xué)習(xí)成績(jī)測(cè)試，于第7天進(jìn)行大鼠記憶成績(jī)測(cè)試；造模后第4天和第針刺干預(yù)結(jié)束后第1天進(jìn)行學(xué)習(xí)成績(jī)測(cè)試;于造模后第5天和第針刺干預(yù)結(jié)束后第2天進(jìn)行記憶成績(jī)測(cè)試。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析。檢驗(yàn)顯著性水平定于P<0.05，或P<0.01。

2 結(jié)果

2.1 電針對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠學(xué)習(xí)行為的影響比較 見(jiàn)表1。

表1 電針對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠學(xué)習(xí)行為的影響比較±s)

2.2 電針對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠記憶行為的影響比較 見(jiàn)表2。

表2 電針對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠記憶行為的影響比較±s)

3 討論

阿爾茨海默病是一種原發(fā)型、成年型、皮層癡呆，以學(xué)習(xí)記憶能力和人格改變?yōu)樘卣鞯穆赃M(jìn)行性神經(jīng)病變[5]。AD屬于中醫(yī)學(xué)的“癡呆”“呆證”等范疇。正如《景岳全書(shū)》所載：“癡呆證，凡平素?zé)o疾而或以郁結(jié)，或以不遂，或以思考，或以驚恐而漸至癡呆?！薄侗静菥V目》曰：“腦為元神之府，”《內(nèi)經(jīng)》：“心者，君主之官，神明出焉”。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，AD病位在腦，與心肝脾腎功能失調(diào)關(guān)系密切[6]。本病的病機(jī)為氣虛血瘀，瘀血內(nèi)阻，蒙蔽清竅，腦髓不足[7]。目前常用的針灸干預(yù)措施有毫針、電針、穴位注射、灸法，其中電針療效較好[8]。筆者根據(jù)中醫(yī)學(xué)經(jīng)絡(luò)腧穴理論，確以補(bǔ)腎填精、健腦益智為其治法。實(shí)驗(yàn)選用百會(huì)、腎俞、足三里組方。在百會(huì)與督脈相交會(huì)，而督脈也“入絡(luò)腦”，具有醒神開(kāi)竅、健腦益智之功，針刺其可以激發(fā)經(jīng)氣，使腦髓的氣血之榮養(yǎng)而復(fù)聰；腎俞屬膀胱經(jīng)，是腎氣輸注之處，益腎填髓充腦；足三里為胃經(jīng)合穴，有和胃健脾，升清降濁，導(dǎo)痰行滯之功[9]。諸穴配伍，共奏補(bǔ)腎填精、健腦益智之效，從而達(dá)到防治老年人癡呆的目的。

認(rèn)知功能涉及知識(shí)獲取、知識(shí)保存和知識(shí)運(yùn)用的多個(gè)過(guò)程。學(xué)習(xí)記憶實(shí)驗(yàn)方法的基礎(chǔ)是條件反射。跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)是目前較為公認(rèn)的單向主動(dòng)逃避實(shí)驗(yàn)，該實(shí)驗(yàn)既可觀察對(duì)記憶過(guò)程的影響，也可觀察對(duì)學(xué)習(xí)的影響。在本組研究中，各組大鼠隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加，其潛伏期均有不同程度的縮短。通過(guò)電針干預(yù)的大鼠在跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)的空間認(rèn)知行為有明顯的提高。提示電針百會(huì)、腎俞、足三里后大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力有顯著改善。

[1]戴思思,董克禮,朱宏.“補(bǔ)腎活血”針刺法對(duì)老年性癡呆模型SAMP8小鼠學(xué)習(xí)記憶能力和腦組織AChE活性的影響[J].上海針灸雜志,2010,29(1):57-59.

[2]趙立剛,馬莉,鄭祖艷,等.針刺“百會(huì)”“四神聰”對(duì)老年性癡呆大鼠認(rèn)知行為及腦內(nèi)超氧化物歧化酶的影響[J].針刺研究,2005,30(1):26-28.

[3]張迪,孫陽(yáng),王麗芹.電針百會(huì)、風(fēng)府穴對(duì)學(xué)習(xí)記憶障礙大鼠的認(rèn)知行為及腦內(nèi)BDNF的影響[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2011,39(3):113-115.

[4]金杰,陳海燕,關(guān)明智,等.健腦益智液作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),1998,21(1):49.

[5]俞金鑫,張洪.老年性癡呆研究現(xiàn)狀[J].吉林中醫(yī)藥,2010,30(9):822-823.

[6]黃太權(quán),劉龍民,范華昌,等.補(bǔ)腎益精方對(duì)血管性癡呆患者認(rèn)知功能影響的臨床研究[J].吉林中醫(yī)藥,2009,29(9):771-772.

[7]毛蕾,張玉蓮.補(bǔ)腎填精中藥治療老年性癡呆[J].吉林中醫(yī)藥,2010,30(5):394-395.

[8]劉佳琳,杜元灝,黎波,等.針灸治療老年性癡呆常用治法的循證醫(yī)學(xué)評(píng)價(jià)[J].吉林中醫(yī)藥,2009,29(10):855-857.

[9]孟培燕,孫國(guó)杰,毛娟娟,等.針刺預(yù)處理對(duì)血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響[J].上海針灸雜志,2009,28(5):293-295.