邵 華（徐州醫(yī)學院附屬第三醫(yī)院檢驗科，江蘇 徐州 221003）

乙型肝炎是一種嚴重威脅人類健康的傳染病，據(jù)世界衛(wèi)生組織估計，每年有100萬人死于本病，我國為乙型肝炎高發(fā)區(qū)，約有1.2億人為乙型肝炎病毒（HBV）攜帶者［1］。據(jù)全國病毒性肝炎流行病學調(diào)查結(jié)果，在我國一般人群中乙型肝炎病核心抗體（抗－HBc）陽性率為49.8%，其中多數(shù)人為單項抗－HBc陽性。本文針對酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）測定的單項抗－HBc陽性的血清，用聚合酶鏈反應（PCR）檢測其HBV DNA的含量，并探討其相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 標本來源 血清標本來源于本院2008年8月至2011年5月的門診和住院患者的HBV標志物檢測中單純抗－HBc陽性的標本共計376份，其中男205例，女171例，年齡18～65歲。

1.2 儀器與試劑 血清標志物儀器為BIO RAD－680酶標儀測定，采用上?？迫A有限公司ELISA試劑盒。HBV DNA檢測儀器為羅氏公司Lightcycler 3.0熒光定量擴增儀，檢測試劑由廣州達安生物公司提供。

1.3 方法 HBV標志物采用ELISA進行檢測，嚴格按說明操作書，結(jié)果由BR－680酶標儀測定，每一批標本均設(shè)陰陽性和臨界對照。熒光定量PCR測定HBV DNA嚴格按試劑盒說明書和儀器廠家提供的方法進行。每次試驗設(shè)立4個HBV DNA標準品系列濃度，分別為1×104、1×105、1×106、1×107，其檢測靈敏度為1×103copy／mL，嚴格按照Agrawal等［2］提出的防污染措施進行試驗操作。

2 結(jié) 果

定量結(jié)果采用HBV DNA拷貝數(shù)，試驗結(jié)果顯示，在376例HBC陽性患者中，HBV DNA陽性有21例，陽性率為5.58%。其中拷貝數(shù)在103以下的有7例，拷貝數(shù)在103～104之間的為9例，拷貝數(shù)在104～105之間的為4例，拷貝數(shù)在105～106的為1例。

3 討 論

本研究結(jié)果表明，376例抗－HBc陽性患者中，HBV DNA的陽性率為5.58%，低于文獻［3］報道7.14%的陽性率，可能與病毒的區(qū)域分布或基因突變有關(guān)。HBV標志物是HBV感染的實驗室傳統(tǒng)檢測手段，它檢測的是抗原抗體，是反映人體對HBV的免疫應答狀態(tài)。由于HBV的表達和機體免疫反應的強弱受多種因素影響，因此，反映患者體內(nèi)病毒復制時有一定局限性［4］。特別是對于單純抗－HBc陽性的患者，很難判斷出其體內(nèi)有無病毒復制。而PCR技術(shù)可檢測病毒的DNA，即HBV的拷貝數(shù)，能準確地反映病程變化和治療恢復情況。HBV標志物檢測不能明確說明HBV在體內(nèi)的活動情況，由于受免疫學方法靈敏度的限制很難檢測出低水平狀態(tài)下的HBV復制情況，而PCR就可以很準確地檢測出來，所以結(jié)合HBV血清標志物檢測HBV DNA對臨床早期診斷和治療乙型肝炎意義更大［5］。

人感染HBV后，血清中首先出現(xiàn)HBV DNA陽性，約1個月后出現(xiàn)乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）和e抗原（HBeAg）陽性，爾后出現(xiàn)抗－HBc陽性等。隨著病情的逐漸好轉(zhuǎn)，血清中HBV DNA、HBsAg和HBeAg先后轉(zhuǎn)為陰性，在HBsAg消失后隔一段時間，出現(xiàn)乙型肝炎表面抗體（抗－HBs）。此時抗－HBc與抗－HBs可同時陽性。由于抗－HBs在血清中持續(xù)存在時間較抗－HBc短，因此，經(jīng)過一段時間后，抗－HBs消失，僅單項抗－HBc陽性。因此，單項抗－HBc陽性，特別是抗－HBc低水平陽性，表示既往感染過HBV，現(xiàn)已康復。但也有一部分單項抗－HBc陽性者，特別是抗－HBc高水平陽性者，其體內(nèi)仍有HBV復制，但因病毒復制水平低，不易用常規(guī)方法檢出。但用敏感的HBV DNA擴增法檢測，可發(fā)現(xiàn)他們的HBV DNA陽性。因此，當機體抵抗力下降時，病毒復制活躍，他們可再次復發(fā)乙型肝炎。本研究資料提示，單憑HBV血清標志物的測定結(jié)果判定體內(nèi)HBV的復制及傳染性是不夠的，而采用熒光定量PCR檢測HBV DNA能更準確、直接地反映體內(nèi)病毒復制情況，因此動態(tài)觀察血清HBV DNA的變化，對于病毒感染的轉(zhuǎn)歸、病情及預后的判斷更具有臨床意義。隨訪時HBV DNA水平明顯升高，提供病毒仍在復制，病情可能出現(xiàn)反復或加重，所以HBV DNA檢測在評價和監(jiān)測抗病毒藥物療效等方面具有十分重要的臨床價值。HBV DNA定量檢測能正確反映病毒復制情況，是乙型肝炎治療有效的直接療效指標［6］。

以上分析表明，單純依靠HBV血清標志物的檢測結(jié)果只能較好地反映機體對HBV感染的免疫應答狀況，而熒光定量PCR可以定量檢測HBV DNA的濃度，且靈敏度高，特異性強，更能清楚地反映乙型肝炎患者的病毒活動程度，真實地反映HBV的感染和復制情況，目前可認為PCR定量檢測HBV DNA是診斷病毒是否復制的金標準［7］。作為臨床醫(yī)生只有將兩種方法有機地結(jié)合起來，對HBV標志物中單純抗－HBc陽性的患者進行綜合分析，才能對臨床診斷、治療方案設(shè)計、藥物療效觀察提供可靠的依據(jù)。

［1］劉樹林，鄒菊賢.PCR檢測 HBV－DNA與 HBV血清標志物常見模式和Pre－S2相互關(guān)系研究［J］.重慶醫(yī)學，2001，30（2）：100－101.

［2］Agrawal V，Roy N.Contaminating insert degradation by preincubation colony PCR：a method for avoiding false positives in transformant screening［J］.Anal Biochem，2008，375（1）：159－161.

［3］王曉東，李秀全，李鳳換，等.慢性乙肝血清標志物與HBV－DNA水平的關(guān)系［J］.國際檢驗醫(yī)學雜志，2006，27（12）：1070－1072.

［4］Chemin I，Zoulim F，Merle P，et al.High incidence of hepatitis B infections among chronic hepatitis cases of unknown aetiology［J］.Hepatol，2001，34（3）：447－454.

［5］章家新，吳統(tǒng)健，郭永煉，等.熒光定量聚合酶鏈反應檢測乙型肝炎病毒DNA及其臨床價值［J］.汕頭大學醫(yī)學院學報，2005，18（2）：108－109.

［6］李金明.乙肝肝炎病毒血清標志物測定及結(jié)果解釋的若干問題［J］.中華檢驗醫(yī)學雜志，2006，29（5）：385－389.

［7］駱抗先.乙型肝炎基礎(chǔ)和臨床［M］.2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：257.