李蘭亞（江蘇省沭陽縣中醫(yī)院檢驗(yàn)科 223600）

隨著免疫抑制患者的增多，臨床中發(fā)生深部真菌感染的概率也越來越高。一般來說，深部真菌感染通常發(fā)生于危重患者，對(duì)于這些患者的治療成功與否很大程度上取決于能否快速識(shí)別入侵的病原菌。通過檢測(cè)體液中真菌抗原或代謝物來診斷深部真菌感染的研究很多［1-2］，其中之一就是關(guān)于真菌的細(xì)胞壁成分為1－3－β－D葡聚糖。除結(jié)合菌外，所有真菌的細(xì)胞膜上都含有1－3－β－D葡聚糖，而其他微生物、動(dòng)物及人的細(xì)胞成分和細(xì)胞外液都不含這種成分，因此在機(jī)體的體液中檢測(cè)到1－3－β－D葡聚糖是診斷深部真菌感染的有效依據(jù)［3］。本研究采用MB－80微生物快速動(dòng)態(tài)檢測(cè)系統(tǒng)，檢測(cè)了深部真菌感染患者的血漿1－3－β－D葡聚糖含量，并探討其臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 來自本院2010年1月至2011年10月住院深部真菌感染患者60例，其中男35例，女25例，年齡10～85歲，平均（58.6±26.9）歲。均經(jīng)培養(yǎng)證實(shí)存在深部真菌感染，感染部位包括呼吸道、血液、泌尿道及靜脈插管引起的系統(tǒng)性感染。診斷標(biāo)準(zhǔn)按照歐洲腫瘤研究治療組織（EORTC）深部真菌感染合作組（IFICG）和國家過敏及感染類疾病研究所（NIAID）真菌病研究組（MSG）對(duì)深部真菌感染的定義和分類進(jìn)行判斷［4］，判斷過程結(jié)合臨床，患者出院后進(jìn)行總結(jié)。另外選取健康體檢者30名作為健康對(duì)照組。

1.2 儀器與試劑 MB－80微生物快速動(dòng)態(tài)檢測(cè)系統(tǒng)、T01智能恒溫儀、冰浴槽以及GKT－5M Set動(dòng)態(tài)真菌檢測(cè)試劑盒（定量）均由北京金山川科技發(fā)展有限公司提供。

1.3 血漿1－3－β－D葡聚糖檢測(cè)方法

1.3.1 血漿樣品制備 用含有少許無菌抗凝劑（肝素鈉）的無菌玻璃注射器或一次性采血管采取靜脈血1～2 mL，緩慢放入無熱源離心管中，用滅菌鋁箔封閉管口以防污染，然后3 000 r／min離心60 s，分離得富血小板血漿（PRP），取出后立即放入冰水浴中直到下一步，若暫時(shí)不用，可在－30℃冰箱中保存1個(gè)月。取上述富血小板血漿0.05 mL，加入裝有0.45 mL樣品處理液中，混勻后70℃保溫10min，取出后立刻放入冰水浴中，即為待測(cè)血漿樣品。

1.3.2 測(cè)定分析 取待測(cè)血漿0.2 mL直接加入反應(yīng)主劑中，溶解后使用微量加樣器轉(zhuǎn)移至10mm×75mm標(biāo)準(zhǔn)玻璃反應(yīng)管中（不要產(chǎn)生氣泡），插入 MB－80微生物快速動(dòng)態(tài)檢測(cè)系統(tǒng)中進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后由標(biāo)準(zhǔn)曲線自動(dòng)計(jì)算出待測(cè)血漿中1－3－β－D葡聚糖含量。操作過程中注意避免微生物及細(xì)菌污染。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件包SPSS15.0進(jìn)行t檢驗(yàn)，取P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

深部真菌感染組血漿1－3－β－D葡聚糖含量最高為142.44 ng／L，最低為12.99 ng／L，平均值為（48.96±29.33）ng／L；健康對(duì)照組血漿1－3－β－D葡聚糖含量最高為6.48 ng／L，最低為0.40 ng／L，平均值為（2.55±1.97）ng／L。經(jīng)SPSS統(tǒng)計(jì)軟件t－檢驗(yàn)分析，兩組1－3－β－D葡聚糖平均值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

3 討 論

隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，危重患者的生存時(shí)間越來越長，廣譜抗生素廣泛地用于危重患者感染的降階梯抗炎治療，免疫抑制劑的應(yīng)用改善了器官移植患者的器官排異，但深部真菌感染亦較移植前更常見。盡管進(jìn)行有力的抗真菌治療，深部真菌感染的病死率仍居高不下。真菌培養(yǎng)的確可為臨床提供最為直接的診斷依據(jù)，但培養(yǎng)方法耗時(shí)長，不適宜用作早期診斷。而免疫學(xué)方法，往往需要作多種真菌抗原或抗體檢測(cè)，既費(fèi)時(shí)又不經(jīng)濟(jì)，且當(dāng)抗原譜或抗體譜不全時(shí)也極易造成漏診。

葡聚糖廣泛存在于真菌細(xì)胞壁中，占其干燥質(zhì)量的80%～90%。1－3－β－D葡聚糖是一種多聚糖成分，特異的存在于除結(jié)合菌和隱球菌外的其他真菌。1－3－β－D葡聚糖可以被G因子檢測(cè)出來，G因子是馬蹄蟹的一種凝血因子。本研究利用真菌β葡聚糖激活酶反應(yīng)主劑中的相應(yīng)因子后形成凝固蛋白，根據(jù)其濁度變化對(duì)真菌β葡聚糖濃度進(jìn)行定量。原核生物、病毒和人類的細(xì)胞都沒有葡聚糖，如出現(xiàn)在血和其他無菌體液中則提示深部真菌感染。國內(nèi)目前葡聚糖檢測(cè)手段有比濁法，一些國內(nèi)的研究證明其可以有效地診斷深部真菌感染。本研究深部真菌感染組的血漿葡聚糖水平明顯高于健康對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與研究結(jié)果一致［5-6］。

雖然檢測(cè)1－3－β－D葡聚糖只能提示有無真菌侵襲性感染，不能確定為何種真菌，這是此方法的缺陷，但也可能轉(zhuǎn)化為一種優(yōu)勢(shì)。近年來，一些罕見的條件致病真菌也可引起深部感染，這就要求一種能迅速確定有無深部真菌感染的方法，因系統(tǒng)抗真菌藥物種類較少，抗菌譜較廣，不因真菌種類而異。當(dāng)檢測(cè)到標(biāo)本中葡聚糖含量較高時(shí)，即刻予以系統(tǒng)治療，否則會(huì)貽誤最佳治療時(shí)機(jī)。本研究檢測(cè)的深部真菌感染患者均經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)證實(shí)為念珠菌感染，若以10 ng／L為cut－off值，則陽性率為100.0%；20 ng／L為cut－off值，則陽性率為91.4%。所以血清葡聚糖檢測(cè)可為臨床醫(yī)生早期診斷機(jī)體是否感染真菌的提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，具有重要的臨床價(jià)值，值得推廣。

［1］Yoshida K.Recent advances of serodiagnosis for systemic fungal infections［J］.Nihon Ishinkin Gakkai Zasshi，2006，47（3）：135－142.

［2］熊祝嘉，徐英春.半乳甘露聚糖用于侵襲性曲霉感染實(shí)驗(yàn)診斷的研究現(xiàn)狀［J］.中國真菌學(xué)雜志，2007，2（1）：52－54.

［3］廖軍，郝飛.深部真菌感染血清真菌成分檢測(cè)方法研究進(jìn)展［J］.國外醫(yī)學(xué)：臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè)，2002，23（2）：85－86.

［4］Ascioglu S，Rex JH，de Pauw B，et al.Defining opportunisticinvasive fungal infections in immunocompromised patients with cancer and hematopoietic stem cell transplants：an internationalconsensus［J］.Clin Infect Dis，2002，34（1）：7－14.

［5］楊潔瓊.深部真菌感染患者血漿1，3－β－D葡聚糖檢測(cè)的臨床價(jià)值［J］.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，24（2）：12－13.

［6］李軍，王浚霽，陳偉，等.（1，3）－β－D葡聚糖檢測(cè)對(duì)侵襲性真菌感染的診斷意義［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2010，7（17）：1804－1805.