王 芳，馬艷梅，丁原春

（黑龍江職業(yè)學(xué)院，黑龍江 雙城市 150111）

“瘦肉精”--克倫特羅為一種β-受體激動(dòng)劑，屬于擬腎上腺素類藥物。“瘦肉精”可使豬等畜禽生長(zhǎng)速率和胴體瘦肉率提高，但給消費(fèi)者帶來(lái)了巨大的負(fù)面后果?！笆萑饩敝卸竞?，人們會(huì)出現(xiàn)心悸，面頸、四肢肌肉顫動(dòng)，頭暈，乏力等癥狀，嚴(yán)重者會(huì)導(dǎo)致心律失常而猝死。雖然各國(guó)目前均已禁止在動(dòng)物飼料中添加瘦肉精，但是“瘦肉精”中毒事件屢有發(fā)生，因此加強(qiáng)“瘦肉精”殘留的檢測(cè)和監(jiān)督工作十分重要，國(guó)內(nèi)外對(duì)于檢測(cè)克倫特羅殘留的研究未曾停止，現(xiàn)將近年來(lái)克倫特羅在肉制品檢測(cè)方面的研究進(jìn)行綜述。

1 “瘦肉精”色譜分析技術(shù)

1.1 氣相色譜法

國(guó)外研究者通過(guò)毛細(xì)管氣相色譜檢測(cè)了尿液中的克倫特羅，他們先通過(guò)固相吸附法提取尿中的克倫特羅，再通過(guò)氣相色譜進(jìn)行檢測(cè)，其檢測(cè)限為1.5ng/mL。謝維平等未對(duì)樣品進(jìn)行衍生化，采用厚膜非極性柱直接分離，檢測(cè)限為0.03mg/L。崔曉明等采用固相萃取法對(duì)動(dòng)物組織中克倫特羅進(jìn)行提取，經(jīng)衍生后用ECD檢測(cè)器進(jìn)行氣相檢測(cè)，其最低檢出限為1μg/kg。

1.2 高效液相色譜法

高效液相色譜法（HPLC）是近年來(lái)發(fā)展迅速的一項(xiàng)檢測(cè)技術(shù)，它靈敏性高、選擇性好。國(guó)外研究人員先用通過(guò)有機(jī)酸提取動(dòng)物組織中的克倫特羅，再經(jīng)提取、凈化，最后采用HPLC測(cè)定克倫特羅的含量，效果良好。另有研究人員通過(guò)雙相透析法提取食品中的克倫特羅，通過(guò)HPLC（二極管陣列檢測(cè)器）測(cè)定其含量，其最低檢出限為1.26mg/kg。我國(guó)科研人員也采用高效液相色譜技術(shù)對(duì)克倫特羅的檢測(cè)進(jìn)行了大量嘗試。黃士新等應(yīng)用HPLC技術(shù)檢測(cè)豬內(nèi)臟和肌肉組織中的克倫特羅殘留，最低檢測(cè)限可達(dá)2ng/g。方炳虎等應(yīng)用HPLC檢測(cè)豬血液中克倫特羅的濃度，其檢測(cè)限為0.05ug/ml。目前我國(guó)已將高效液相色譜技術(shù)確定為檢測(cè)克倫特羅的半確定性方法。HPLC用于檢測(cè)克倫特羅精確度較高，但缺點(diǎn)是需要大型專業(yè)儀器，無(wú)法實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)采樣檢測(cè)。

1.3 毛細(xì)管電泳法

毛細(xì)管電泳法是一種高效的分離檢測(cè)方法，Gausepohl等采用毛細(xì)管電泳法檢測(cè)人尿液中的克倫特羅含量，檢出限為0.5μg/L，檢測(cè)時(shí)間不到15min。管月清等采用毛細(xì)管電泳-電化學(xué)法對(duì)肉制品中的克倫特羅含量進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng)優(yōu)化條件后8min內(nèi)即可實(shí)現(xiàn)分離。該檢測(cè)法樣品前處理簡(jiǎn)單，檢測(cè)迅速，但是毛細(xì)管電泳儀并不是一般實(shí)驗(yàn)室常備檢測(cè)儀器，限制了該技術(shù)在克倫特羅檢測(cè)的中廣泛應(yīng)用。

1.4 聯(lián)用技術(shù)分析法

（1）液相色譜－質(zhì)譜法（LC-MS）。Laurent Debranwer等對(duì)尿液中克倫特羅殘留作了檢測(cè)，研究者優(yōu)化了液相色譜-電噴霧質(zhì)譜法的實(shí)驗(yàn)條件，取得了良好地效果。KaitaDeWach等應(yīng)用LC-MS檢測(cè)了克倫特羅等多種β受體激動(dòng)劑，證實(shí)該檢測(cè)方法靈敏度高，能夠達(dá)到歐盟最高允許殘留限量（0.5ug/kg）的標(biāo)準(zhǔn)。余建新等采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定法檢測(cè)了尿樣及動(dòng)物組織中克倫特羅等β-興奮劑的濃度，其檢出量為0.15~0.6ng/g，線性指標(biāo)及回收率均較理想。

（2）氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。Wilson RT等人對(duì)豬等動(dòng)物組織中克倫特羅含量進(jìn)行了氣質(zhì)檢測(cè)(GC-MS)，其檢測(cè)限為0.25ug/kg。D.J.Smith同樣采用氣質(zhì)聯(lián)機(jī)檢測(cè)了豬肉組織中克倫特羅的含量，結(jié)果表明可檢出織中濃度小于2ug/kg的克倫特羅。蔣珊等人通過(guò)進(jìn)行了GC-MS技術(shù)測(cè)定了豬肝、豬尿中鹽酸克倫特羅殘留，其檢出限：豬肝為0.30μg/kg，豬尿?yàn)?.25μg/L。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)克倫特羅靈敏度更高，并且假陽(yáng)性率更低。在我國(guó)及歐盟等國(guó)家，GC-MS法已經(jīng)確定為檢測(cè)克倫特羅的確證性方法，但是GC-MS法同樣需要昂貴精密的儀器和專業(yè)操作人員，樣品前處理繁瑣，測(cè)定成本高[3]。

2 “瘦肉精”免疫分析技術(shù)

免疫分析技術(shù)是“邁向21世紀(jì)的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)”之一，酶免法是克倫特羅殘留免疫檢測(cè)方法中最為常用的一種方法，此外放射免疫法、熒光免疫法也是免疫法分析克倫特羅常用的手段。免疫檢測(cè)法具有異性強(qiáng)，靈敏度高等特點(diǎn)，不需要特殊儀器，適合現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控。但是免疫法檢測(cè)費(fèi)用昂貴，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求也較苛刻。

（1）酶免疫分析技術(shù)。酶免疫分析技術(shù)是將抗原和抗體親合反應(yīng)的特異性、高專一性與酶對(duì)底物的高效催化作用結(jié)合起來(lái)的固相免疫測(cè)定技術(shù)。目前，使用較普遍的是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)方法。英國(guó)和德國(guó)公司都開(kāi)發(fā)出了克倫特羅的酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒，可用于肉品、飼料中克倫特羅殘留的檢測(cè)。但檢測(cè)費(fèi)用昂貴，單個(gè)樣品檢測(cè)費(fèi)用就超過(guò)了千元。我國(guó)在研究酶免疫分析技術(shù)檢測(cè)克倫特羅方面的起步較晚，但發(fā)展迅速。陳繼明等用酶免疫分析法檢測(cè)了飼料、尿樣與臟器中克倫特羅含量，檢測(cè)結(jié)果顯示該方法與高效液相色譜法的結(jié)果大體一致。孔科也用酶免法檢測(cè)了豬肝中克倫特羅的殘留其檢測(cè)限為0.3ng/ml，證實(shí)了該法是一種較簡(jiǎn)便可靠的快速檢測(cè)方法。另外史建國(guó)等采用國(guó)產(chǎn)酶聯(lián)免疫吸附試劑盒檢測(cè)了豬肉中的瘦肉精殘留，檢測(cè)限可達(dá)0.05ng/g，也證實(shí)了國(guó)產(chǎn)試劑盒已達(dá)到進(jìn)口試劑盒的檢測(cè)水平。胥傳來(lái)等人建立了檢測(cè)豬尿樣品中克倫特羅殘留量的間接競(jìng)爭(zhēng)化學(xué)發(fā)光酶免疫法，檢出限可達(dá)0.01μg/L，檢測(cè)范圍、回收率穩(wěn)定性等指標(biāo)均優(yōu)于目前廣泛使用的酶聯(lián)免疫法。

目前，我國(guó)已有多個(gè)廠家生產(chǎn)出了商品化的克倫特羅ELISA檢測(cè)試劑盒，如由上海市畜牧獸醫(yī)站聯(lián)合上海市農(nóng)科院、上海普飛生物技術(shù)有限公司組成的攻關(guān)團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)出了國(guó)產(chǎn)克倫特羅ELISA檢測(cè)試劑盒，該試劑盒在靈敏度、準(zhǔn)確性上與進(jìn)口產(chǎn)品不相上下，但價(jià)格上低很多，顯示了極大地優(yōu)勢(shì)。

（2）放射免疫分析技術(shù)。Ropitar和Zimmer報(bào)道了采用放射免疫測(cè)定法測(cè)定包括克倫特羅在內(nèi)的β-腎上腺素能激動(dòng)劑。隨后Delahaut等又建立了更為特異的檢測(cè)克倫特羅的放射免疫方法，用此方法克倫特羅與其他β-腎上腺素能激動(dòng)劑的交叉反應(yīng)在10%以下，檢測(cè)限為0.5ng/g。目前國(guó)外已生產(chǎn)用于測(cè)定克倫特羅的放免試劑盒產(chǎn)品，檢測(cè)限可達(dá)到2.4ng/g，國(guó)內(nèi)也在進(jìn)行此方面的研究。但是放射免疫分析同樣具有假陽(yáng)性較高等弊端，并且放射性同位素對(duì)人體有一定傷害，從而限制了該法的廣泛應(yīng)用。

（3）膠體金免疫層析技術(shù)。膠體金免疫層析技術(shù)是將克倫特羅的抗體與膠體金結(jié)合成免疫金，制備成結(jié)果肉眼可見(jiàn)的檢測(cè)試紙條。該方法不僅特異性好，敏高度高，并且簡(jiǎn)單，便捷，對(duì)操作者沒(méi)有太高的技術(shù)要求，適用于現(xiàn)場(chǎng)的快速檢測(cè)工作 [4]。張敏娟等也證實(shí)分別用該法和酶聯(lián)免疫法對(duì)豬尿樣檢測(cè)時(shí)，兩種方法陽(yáng)性吻合率達(dá)到85%以上。

（4）熒光免疫分析法。熒光免疫分析法是用三價(jià)稀土離子及其螯合物作為示蹤物標(biāo)記分析物，根據(jù)熒光強(qiáng)度和相對(duì)熒光強(qiáng)度比值，判斷反應(yīng)體系中分析物的濃度。我國(guó)學(xué)者時(shí)瑾等建立了的時(shí)間分辨熒光免疫法檢測(cè)豬尿樣品中克倫特羅的濃度，其檢出限為0.01μg/L，并證實(shí)這種檢測(cè)方法受其他干擾物影響較小。熒光免疫分析法靈敏度高，無(wú)放射性污染，是一種穩(wěn)定，理想的檢測(cè)方法。但該法對(duì)溫度的有較高要求和熒光強(qiáng)度取決于激發(fā)波長(zhǎng)，也限制了其在瘦肉精檢測(cè)上的應(yīng)用。

（5）生物傳感技術(shù)。生物傳感器檢測(cè)法是近些年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新型分析技術(shù)，它具有選擇性好、反應(yīng)速度快、操作簡(jiǎn)易、價(jià)格低廉、定量準(zhǔn)確，可以實(shí)現(xiàn)連續(xù)的在線檢測(cè)和反復(fù)使用等優(yōu)點(diǎn)。我國(guó)學(xué)者呂會(huì)田等構(gòu)建了基于量子點(diǎn)標(biāo)記的ATP合酶分子馬達(dá)免疫旋轉(zhuǎn)生物傳感器，結(jié)合熒光技術(shù)實(shí)現(xiàn)了對(duì)瘦肉精快速、高靈敏度的檢測(cè)。。肖紅玉等同樣利用免疫生物傳感技術(shù)，檢測(cè)樣品中瘦肉精的殘留量，檢出限可達(dá)到0.1μg/L，該方法檢測(cè)時(shí)間短（20min內(nèi)），檢測(cè)費(fèi)用低，可以實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。

3 結(jié)語(yǔ)

“瘦肉精”等非法添加物的查處治理是一項(xiàng)長(zhǎng)期、艱巨的工作，它需要多個(gè)部門的通力合作，上下齊心，標(biāo)本兼治，才能共同維護(hù)好消費(fèi)者的食品安全。綜上所述，各種“瘦肉精”的檢測(cè)技術(shù)均存在各自的優(yōu)勢(shì)和缺點(diǎn)，但我們相信，隨著國(guó)家相關(guān)法規(guī)政策的完善、各有關(guān)部門監(jiān)管力度的加強(qiáng)及“瘦肉精”檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展，“瘦肉精”不會(huì)再變成“害人精”。

[1]裴艷濤，孫繼國(guó)，林密等.動(dòng)物性產(chǎn)品中“瘦肉精”殘留的檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J].動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué)，2004，21（1）:24-26.

[2]管月清，楚清脆，葉建農(nóng).肉制品中β-興奮劑的毛細(xì)管電泳-電化學(xué)檢測(cè)方法[J].華東師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2005，（2）:85-90.

[3]蔣珊，毛慧玲.GC-MS法測(cè)定豬肝、豬尿中鹽酸克倫特羅殘留量的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，35（33）:10711-10713.

[4]劉見(jiàn).免疫金試紙法快速檢測(cè)鹽酸克倫特羅[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)科技版)，2009，22（4）:350-354.