摘 要 建立了同時(shí)測(cè)定污水中7種糖皮質(zhì)激素的固相萃取超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的分析方法。利用單因素實(shí)驗(yàn)優(yōu)化固相萃取影響因素：洗脫液、洗脫體積、水樣pH值及淋洗液。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)行L9（34）正交實(shí)驗(yàn)。通過直觀分析和方差分析區(qū)分主次因素，確定了最佳固相萃取條件：洗脫劑為乙酸乙酯，洗脫劑用量為10 mL，pH＝5.0，清洗劑為20%甲醇。7種糖皮質(zhì)激素的檢出限為1.56～10.59 ng/L；在20～100 ng/L的3個(gè)添加水平范圍內(nèi)的平均回收率為72.5%～101.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）小于10.9%。

關(guān)鍵詞 固相萃?。?超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法； 糖皮質(zhì)激素； 正交實(shí)驗(yàn)

1 引 言

糖皮質(zhì)激素具有良好的抗炎、抗免疫、抗毒素和抗休克作用，被廣泛應(yīng)用于疾病的治療與預(yù)防。研究表明，進(jìn)入人和動(dòng)物體內(nèi)的糖皮質(zhì)激素有相當(dāng)一部分隨糞、尿等排泄物排出，并最終排放進(jìn)入環(huán)境\\，可能對(duì)生物體造成危害，如人類生殖系統(tǒng)疾病，動(dòng)物生殖功能異常、雌雄同體率以及性比例失調(diào)等\\。

目前，有關(guān)污水處理廠進(jìn)出水及其它樣品中糖皮質(zhì)激素檢測(cè)方法的研究較多，主要采用固相萃取氣相色譜法、固相萃取氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法、固相萃取液相色譜法及固相萃取液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法\\。優(yōu)化固相萃取影響因素時(shí)，很多學(xué)者\\僅對(duì)部分因素進(jìn)行了單因素實(shí)驗(yàn)，或忽視了主效應(yīng)及各因素之間的交互作用；或不能區(qū)分實(shí)驗(yàn)結(jié)果的差異是由各因素的水平變化而導(dǎo)致，還是由實(shí)驗(yàn)的隨機(jī)波動(dòng)而導(dǎo)致。本實(shí)驗(yàn)采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLCMS/MS）進(jìn)行測(cè)定，在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用L9（34）正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化固相萃取條件，利用直觀分析法及方差分析法確定影響因素的主次順序，運(yùn)用單因素分析和正交表確定最佳固相萃取條件，并應(yīng)用于南京市污水處理廠進(jìn)出口水樣的檢測(cè)。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與試劑

ACQUITYTM超高效液相色譜儀Quattro Premier XE質(zhì)譜儀（Waters公司），配MassLynxV4.1軟件；MilliQ超純水器（美國Mimpore公司）；MH3 微型旋渦混勻器（上海瀘西分析有限公司）；AG285電子天平（Mettler公司）；MG2200氮吹儀（EYELA公司）；12通道固相萃取裝置（美國Waters公司）；Waters Oasis HLB固相萃取柱（200 mg，6 mL，Waters公司）。

甲酸、乙腈和甲醇（色譜純，德國Merck公司）。潑尼松（PRE，99.0%）， 氫化潑尼松（PDL，98.0%）甲基潑尼松龍（MET，99.0%）倍他米松（BET，99.5%）地塞米松（DEX，97.0%）醋酸潑尼松龍（PDA，98.5%）， 醋酸氫化可的松（HDA，99.0%），均購于Dr.Ehrenstorfer公司。取標(biāo)準(zhǔn)品適量，用甲醇配成質(zhì)量濃度為500 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于4 ℃冰箱中保存。

2.2 樣品的采集和處理

采集南京地區(qū)4個(gè)主要污水處理廠的進(jìn)出口水樣，保存于棕色瓶中，加入1%甲醛，避免微生物降解，于4 ℃冰箱避光保存。

L。梯度洗脫程序：0～13.0 min，28%～45% A；13.0～13.1 min，45%～28% A；13.1～15.0 min， 28% A。

采用電噴霧離子源（ESI＋）。離子源溫度為120 ℃，脫溶劑溫度為350 ℃，脫溶劑氣和錐孔氣為氮?dú)?，脫溶劑流速?00 L/h，錐孔氣流速為50 L/h，碰撞氣為高純氬氣，采用（MRM）多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式檢測(cè)。質(zhì)譜分析參數(shù)見表1。