王為民 謝朋木 侯洪春

細胞角蛋白(cytokeratin，CK)是1種細胞中間絲蛋白,具有顯著的分子多樣性，不同的上皮組織和細胞分化的不同階段表達不同的CK。正常宮頸組織中的各種細胞分別表達不同的CK，在正常宮頸組織向?qū)m頸癌轉(zhuǎn)化的過程中，一些CK的表達會發(fā)生變化，并表現(xiàn)出一定的規(guī)律性，因此CK有望在宮頸癌診斷和預(yù)后判斷中發(fā)揮作用。本研究通過觀察CK8在宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌組織中的表達情況，探討其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2008年1月～2009年10月在濟南市婦幼保健院行宮頸活檢、環(huán)形電切術(shù)、手術(shù)切除宮頸標本89例，其中CINⅠ15例，CINⅠⅡ17例，CINⅢ21例，宮頸癌36例。36例宮頸癌中，宮頸鱗癌28例、宮頸腺癌8例。CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宮頸癌的標本均經(jīng)病理檢查確診，病理診斷由至少2名以上資深病理科醫(yī)生確定。選取經(jīng)病理檢查證實為正常宮頸組織的15例標本作為對照組。所有患者年齡在28～66歲，中位年齡41歲，所有患者術(shù)前均未做放療、化療，無免疫、代謝性等疾病。

1.2 方法

采用SP免疫組化方法：標本經(jīng)石蠟包埋，4 μm厚切片,CK8單克隆抗體及SP試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。PBS代替一抗作陰性對照。按SP試劑盒說明書操作。

1.3 結(jié)果判斷標準

CK8的陽性表達部位為細胞質(zhì)。在400倍光鏡下隨機選取8個視野，每個視野觀察100個細胞，計數(shù)陽性細胞，取平均值。按陽性細胞染色數(shù)量和顯色強度分為4級：陽性細胞數(shù)為0，不計分；1%～25%為1分；26%～50%為2分；51%～75%為3分；76%以上為4分；染色強度按無著色、淺黃色、棕黃色、棕褐色分別計0～3分；兩項相加，0～1分為“-”，2～3分為“+”，4～5分為“++”，6～7分為“+++”，以+～+++為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

用SPSS13.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。數(shù)據(jù)采用χ2檢驗，F(xiàn)isher確切概率法及相關(guān)性分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CK8在不同宮頸組織中的表達情況

CK8在正常宮頸組織中無表達、在CIN和宮頸癌中的陽性表達率分別為47.2%(25/13)和80.6%(29/36)，呈逐漸增高的趨勢。3組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=28.503，P<0.05)。經(jīng)χ2分割后比較(α'=0.0125)，CIN組陽性率高于正常宮頸組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=11.189，P<0.0125)；宮頸癌組陽性率高于正常宮頸組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=28.011，P<0.0125)；宮頸癌組陽性率高于CIN組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=10.014，P<0.0125)。CIN組內(nèi)，從CINⅠ→CINⅡ→CINⅢ，CK8的陽性表達率分別為13.3%(2/15)、52.9%(9/17)和66.7%(14/21)，隨著病變級別的升高，陽性表達率有逐漸增高的趨勢，F(xiàn)isher確切概率法得出，CINⅡ組陽性率高于CINⅠ組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.016)；CINⅢ組陽性率高于CINⅠ組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002)；CINⅡ組和CINⅢ組陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 CK8的陽性表達率與宮頸病變程度的關(guān)系

CK8在正常宮頸、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宮頸癌的陽性表達率分別為0、13.3%、52.9%、66.7%和80.6%。隨著宮頸病變程度的加重(正常宮頸→CINⅠ→CINⅡ→CINⅢ→宮頸癌)，CK8的陽性表達率逐漸增高，其陽性表達率同宮頸病變程度呈正相關(guān)關(guān)系(γ=0.979，P<0.01)。

3 討論

宮頸癌的致病因素現(xiàn)在已非常明確，即HPV感染。但HPV感染正常宮頸組織后，究竟如何促使正常組織向惡性轉(zhuǎn)變，目前尚不清楚。隨著研究的深入，宮頸儲備細胞在宮頸癌發(fā)生和發(fā)展中的作用日益受到人們的重視。研究顯示，儲備細胞為宮頸干細胞，是HPV感染的靶細胞[1]。當(dāng)受到激素的過度刺激或某些化學(xué)毒性物質(zhì)的影響，同時合并HPV的感染，這些細胞化生的過程就會受到影響，從而向癌前病變轉(zhuǎn)化，并進一步向鱗癌、鱗腺癌和腺癌轉(zhuǎn)化。由此可見，儲備細胞在宮頸癌的形成中發(fā)揮著重要作用。而CK8為儲備細胞的分子標志物[2]，因此研究CK8在宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌中的表達無論是對于疾病的診斷還是對于疾病進展的預(yù)測都有著重要意義。

Bobrow等[3]研究了CK8在高級別CIN(≥CINⅡ)和宮頸浸潤癌中的表達，結(jié)果顯示在22例高級別CIN中，9例有CK8的表達，而在17例宮頸浸潤癌中，CK8全部有表達。Angus等[4]研究了從CINⅠ到宮頸浸潤癌CK8表達的變化情況，結(jié)果為CK8表達率分別為CINⅠ 0(0/20)，CINⅡ 4.5%(1/22)，CINⅢ 22.7%(5/22)，浸潤癌73.3%(11/15)，說明隨著病變的進展，CK8的表達是逐漸增高的。Carrilho等[5]研究了64例患者，其中正常10例，CINⅢ10例，宮頸浸潤癌44例，結(jié)果CK17在其中的陽性表達率分別為0、44.4%、57.1%，說明隨著病變進展，CK8的表達增高，認為CK8是宮頸惡性轉(zhuǎn)變的特異標志物。Ikeda等[2]研究了134例患者，其中CINⅠ 39例，CINⅡ 31例，CINⅢ 43例，浸潤癌21例，結(jié)果CK8的陽性表達率分別為12.8%、22.6%、 62.8%和 71.4%，CK8陽性率同CIN級別的增高相關(guān)聯(lián)，CINⅠ< CINⅡ< CINⅢ<浸潤癌，統(tǒng)計學(xué)分析顯示有顯著性差異(P<0.0001)。作者認為CK8可作為評價CIN級別的標志物，并可能在篩查宮頸癌高危病例中發(fā)揮作用。Smedts等[6]的研究結(jié)果也顯示，隨著病變由CINⅠ到浸潤癌的改變，CK8的表達會逐漸增高，并由此認為，病變表達CK8有可能進展，不表達則有可能消退或持續(xù)存在但并不進展。

我們的研究結(jié)果顯示，從正常宮頸→CINⅠ→CINⅡ→CINⅢ→宮頸癌，隨著病變程度的逐漸加重,CK8的陽性表達率逐漸增高，通過相關(guān)性分析，兩者之間呈正相關(guān)關(guān)系(γ=0.979，P<0.01)，即宮頸病變程度越重,CK8的陽性表達率越高。由此可以認為，通過CK8的表達情況，可以預(yù)測宮頸病變未來的發(fā)展趨勢，即表達CK8的宮頸病變，將來很有可能進一步發(fā)展，相反，不表達CK8的宮頸病變，將來進一步發(fā)展的可能性很小。因此，我們認為CK8可作為高級別CIN和宮頸癌診斷及預(yù)測病變進展趨勢的標志物。

[1]Martens JE,Arends J,Van der Linden PJ,et al.Cytokeratin 17 and p63 are markers of the HPV target cell,the cervical stem cell 〔J〕.Anticancer Res,2004,24(2):771.

[2]Ikeda K,Tate G,Suzuki T,et al.Coordinate expression of cytokeratin 8 and cytokeratin 17 immunohistochemical staining in cervical intraepithelial neoplasia and cervical squamous cell carcinoma：An immunohistochemical analysis and review of the literature 〔J〕.Gynecologic Oncology,2008,108(3):598.

[3]Bobrow LG,Makin CA,Law S,et al.Expression of low molecular weight cytokeratin proteins in cervical neoplasia 〔J〕.J Pathol,1986，148(2):135.

[4]Angus B,Kiberu S,Purvis J,et al.Cytokeratins in cervical dysplasia and neoplasia：a comparative study of immunohistochemical staining using monoclonal antibodies NCL-5D3,CAM 5.2,and PKK1〔J〕.J Pathol,1988,155(1):71.

[5]Carrilho C,Alberto M,Buane L,et al.Keratins 8,10,13,and 17 are useful markers in the diagnosis of human cervix carcinomas 〔J〕.Hum Pathol,2004,35(5):546.

[6]Smedts F,Ramaekers FC,Vooijs PG.The dynamics of keratin expression in malignant transformation of cervical epithelium：a review 〔J〕.Obsetet Gynecol,1993,82(3)：465.