陳水琴，劉書超，李 瓊

（湖南省公安廳刑偵總隊(duì)，湖南 長(zhǎng)沙 410001）

DNA鑒定質(zhì)量的影響因素和保證措施

陳水琴，劉書超，李 瓊

（湖南省公安廳刑偵總隊(duì)，湖南 長(zhǎng)沙 410001）

D NA鑒定的過程包括現(xiàn)場(chǎng)生物檢材的發(fā)現(xiàn)和提取、生物檢材的保存和送檢、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的檢驗(yàn)等環(huán)節(jié)。這其中的每一環(huán)節(jié)，都有可能影響D NA鑒定的質(zhì)量，從而影響案件的偵破及訴訟。為消除這些影響因素，確保D NA鑒定的質(zhì)量，必須采取相應(yīng)的保證措施。

D NA鑒定；影響因素；保證措施

隨著DNA檢驗(yàn)技術(shù)的不斷提高，DNA檢驗(yàn)鑒定已廣泛應(yīng)用于各類案件中的各種檢材，尤其是DNA檢驗(yàn)的靈敏度提高后，接觸性DNA的檢驗(yàn)極大地拓寬了生物物證的提取范圍。

DNA鑒定的過程包括現(xiàn)場(chǎng)生物檢材的發(fā)現(xiàn)和提取、生物檢材的保存和送檢、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的檢驗(yàn)等環(huán)節(jié)。對(duì)于其中的每一環(huán)節(jié)，都有可能影響DNA鑒定的質(zhì)量，從而影響案件的偵破及訴訟。現(xiàn)對(duì)每一環(huán)節(jié)中的影響因素進(jìn)行分析，并提出相應(yīng)的保證措施。

1 現(xiàn)場(chǎng)生物檢材的發(fā)現(xiàn)和提取環(huán)節(jié)

1.1 影響因素

1.1.1 現(xiàn)場(chǎng)檢材的發(fā)現(xiàn)和提取率不高

從理論上講，只要有人活動(dòng)，就有可能在現(xiàn)場(chǎng)留下生物物證。對(duì)于常見的、明顯的生物物證，技術(shù)人員一般都會(huì)正確提取。但對(duì)于一些少見、微量生物物證，或者因技術(shù)發(fā)展而拓寬的生物檢材，就有可能遺漏，如汗斑、吻痕、指紋、各種接觸性檢材等。

1.1.2 現(xiàn)場(chǎng)檢材遭污染

現(xiàn)場(chǎng)勘查時(shí)若防污染的意識(shí)不夠，現(xiàn)場(chǎng)人員（現(xiàn)場(chǎng)指揮、現(xiàn)場(chǎng)保護(hù)、搶救、勘驗(yàn)技術(shù)人員、作證人員等）將本不屬于現(xiàn)場(chǎng)的生物成分帶入現(xiàn)場(chǎng)，造成污染，如在現(xiàn)場(chǎng)丟棄煙蒂、吐痰、咳嗽等，或?qū)⒖彬?yàn)后的手套、頭套亂扔。

因個(gè)人防護(hù)不夠，極易對(duì)生物檢材造成污染，尤其是微量接觸性檢材。如無一次性頭套、手套、口罩等，自己的頭發(fā)、指紋、唾沫等極易留在現(xiàn)場(chǎng)。

現(xiàn)場(chǎng)提取生物檢材時(shí)若操作不當(dāng)，則易造成交叉污染。如提取檢材時(shí)不使用一次性耗材，會(huì)使不同檢材間的DNA發(fā)生轉(zhuǎn)移，如蜜蜂轉(zhuǎn)移花粉；多件物證混合在一個(gè)包裝袋內(nèi)會(huì)相互污染；同一物證的不同部位有不同人不同濃度的DNA，由于不當(dāng)包裝會(huì)使DNA轉(zhuǎn)移，造成濃度變化，使量少DNA被掩蓋而無法檢出，如兇器柄上少量嫌疑人的成分被受害人大量血跡掩蓋。

其他物證檢驗(yàn)，如指紋顯現(xiàn)時(shí)粉末和刷子的重復(fù)使用也可對(duì)生物檢材造成污染。

1.1.3 現(xiàn)場(chǎng)檢材被破壞

對(duì)于需要轉(zhuǎn)移提取的斑跡，尤其是微量斑跡，在轉(zhuǎn)移提取時(shí)DNA常常被稀釋，導(dǎo)致后續(xù)檢驗(yàn)失??；

對(duì)同一載體上的不同部位可能遺留有多人DNA的物證，進(jìn)行大范圍一次性轉(zhuǎn)移，將單純的DNA人為變成混合DNA，破壞了載體上DNA的原始分布。

對(duì)接觸性檢材，因?yàn)槊撀浼?xì)胞在載體上粘附松散，極易脫落。現(xiàn)勘過程中，若動(dòng)作力度稍大，或反復(fù)翻動(dòng)、抖動(dòng)，都會(huì)對(duì)物證造成破壞，如面罩、繩結(jié)、衣物等。

在進(jìn)行指紋顯現(xiàn)時(shí)未注意保護(hù)其他可能留有DNA的部位，如對(duì)茶杯、碗、飲料瓶等進(jìn)行指紋顯現(xiàn)時(shí)，未對(duì)杯口、碗沿、瓶口等可能留有唾液部位的保護(hù)。

1.1.4 現(xiàn)場(chǎng)勘驗(yàn)記錄不完整、不準(zhǔn)確

完整、準(zhǔn)確的現(xiàn)勘記錄，既能重現(xiàn)生物物證的原始狀態(tài)，也有助于現(xiàn)場(chǎng)重現(xiàn)，直接關(guān)系到DNA檢驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)，也關(guān)系到完整證據(jù)鏈的建立。如某殺人案中，現(xiàn)勘筆錄記錄現(xiàn)場(chǎng)有5枚煙蒂，送檢DNA檢驗(yàn)為7枚，其中2枚檢出為犯罪嫌疑人的。檢察院因數(shù)量不一致而退卷，后查現(xiàn)場(chǎng)照片確有7枚煙蒂。

1.2 質(zhì)量保證措施

1.2.1 將對(duì)參與現(xiàn)勘的所有人員進(jìn)行必要的DNA基礎(chǔ)知識(shí)培訓(xùn)，提高對(duì)生物檢材的防污染意識(shí)和保護(hù)意識(shí)。

1.2.2 對(duì)現(xiàn)勘技術(shù)人員進(jìn)行定期的培訓(xùn)和知識(shí)更新，掌握基本方法和新動(dòng)向，提高生物檢材的發(fā)現(xiàn)、提取率和提取質(zhì)量。

1.2.3 進(jìn)入現(xiàn)場(chǎng)的所有人均應(yīng)做好個(gè)人防護(hù)，最基本應(yīng)有口罩、手套、頭套、腳套；嚴(yán)格實(shí)行每份檢材都使用新的一次性耗材和器具（包含手套、剪刀、鑷子、棉簽、指紋顯現(xiàn)粉末），避免人員污染。

1.2.4 將所有現(xiàn)勘人員的DNA輸入全國(guó)DNA數(shù)據(jù)庫(kù)的質(zhì)控庫(kù)，避免將勘驗(yàn)過程中的人員污染當(dāng)成嫌疑人DNA進(jìn)行錯(cuò)誤排查。

1.2.5 做好現(xiàn)場(chǎng)勘查筆錄，確保有關(guān)檢材的文字記錄和照片的完整、準(zhǔn)確、一致。

2 生物物證的保存和送檢環(huán)節(jié)

2.1 影響因素

2.1.1 標(biāo)識(shí)不清楚或不牢靠，造成檢材的混亂，甚至張冠李戴。

2.1.2 檢材的干燥方法不正確，導(dǎo)致檢材DNA降解。一般斑痕類檢材需先在陰涼通風(fēng)處晾干后裝入透氣的潔凈包裝袋內(nèi)。若使用烘、烤、曬等方式，都會(huì)使檢材中的DNA降解。

2.1.3 檢材保存條件不恰當(dāng)，造成檢材腐敗或DNA降解。斑痕類檢材應(yīng)干燥后在低溫、干燥、無陽光照射的空間保存。新鮮組織類檢材如肌肉、臟器、肋軟骨、新鮮骨骼等，均應(yīng)冷凍保存。

2.1.4 對(duì)檢材的保護(hù)措施不到位，導(dǎo)致檢材被破壞或丟失。如被風(fēng)吹走、被老鼠、蟑螂等動(dòng)物啃噬等。

2.1.5 檢材不及時(shí)送檢，使檢材中的DNA自然降解甚至喪失殆盡，尤其是接觸性檢材，時(shí)間越長(zhǎng)，檢出率越低。

2.1.6 送檢人員對(duì)案件及現(xiàn)場(chǎng)不熟悉，不明白檢材與案情的關(guān)聯(lián)程度和證據(jù)力度，對(duì)送檢的檢材無重點(diǎn)、無針對(duì)性，不利于DNA技術(shù)人員科學(xué)的設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。比如命案現(xiàn)場(chǎng)提取上百份血跡，送檢人員應(yīng)能結(jié)合現(xiàn)場(chǎng)情況、嫌疑人可能的活動(dòng)軌跡、血跡分布規(guī)律、血跡形狀等綜合分析哪些可能為嫌疑人所留下。

2.2 質(zhì)量保證措施

2.2.1 建立正規(guī)的檢材保管室，并有一整套關(guān)于檢材的標(biāo)識(shí)、干燥、包裝、保存的嚴(yán)格的操作規(guī)程。

2.2.2 及時(shí)送檢，并有一套嚴(yán)格的送檢流程。

2.2.3 送檢人員不僅熟悉現(xiàn)場(chǎng)，熟悉物證，還應(yīng)了解DNA檢驗(yàn)的基本知識(shí)，有助于DNA檢材的篩選、排序，進(jìn)而設(shè)計(jì)科學(xué)的檢驗(yàn)方案。

3 DNA檢驗(yàn)環(huán)節(jié)

3.1 影響因素

3.1.1 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境設(shè)施的設(shè)置不合理

DNA實(shí)驗(yàn)室最起碼應(yīng)設(shè)置有受理區(qū)、準(zhǔn)備區(qū)、DNA提取區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、檢測(cè)區(qū)、DNA數(shù)據(jù)庫(kù)工作區(qū)、試劑配置區(qū)、物證和樣本保管區(qū)、辦公區(qū)，按照DNA含量由少到多的順序，實(shí)現(xiàn)檢材和樣本在區(qū)域間的單向流動(dòng)。尤其是P C R產(chǎn)物，必須有專門的存儲(chǔ)冰箱和處理回收途徑。

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有獨(dú)立的送排風(fēng)設(shè)施，實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室間空氣的相對(duì)獨(dú)立性，避免DNA通過氣溶膠污染。

3.1.2 實(shí)驗(yàn)室的消毒設(shè)施和措施不到位

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該配備紫外燈、高壓蒸汽消毒鍋、超聲波清洗儀等清潔、消毒設(shè)施。

實(shí)驗(yàn)室必須每天進(jìn)行紫外消毒；關(guān)鍵儀器如離心機(jī)、P C R儀、孵育儀、批量工作站等，均需定期消毒；所有器皿、耗材在使用前必須消毒；所有操作臺(tái)面在操作前、后均應(yīng)進(jìn)行清潔、消毒，尤其在處理L C N樣品時(shí)，更應(yīng)加倍注意。

3.1.3 實(shí)驗(yàn)過程中個(gè)人防護(hù)意識(shí)和措施不到位

實(shí)驗(yàn)室個(gè)人防護(hù)意識(shí)和措施應(yīng)該比現(xiàn)場(chǎng)勘查時(shí)更嚴(yán)格。進(jìn)入實(shí)驗(yàn)區(qū)前必須更衣，換穿潔凈的工作服，穿戴好一次性的鞋套、頭套、口罩、手套。尤其是在處理接觸性檢材前，每份檢材必須更換一次手套。

實(shí)驗(yàn)過程中，嚴(yán)格避免對(duì)著檢材近距離咳嗽、噴嚏、講話等行為。

當(dāng)實(shí)驗(yàn)員在不同實(shí)驗(yàn)區(qū)間單向移動(dòng)時(shí)，應(yīng)保證手套等易污染的耗材不帶入另一區(qū)間，更不能從P C R后區(qū)間逆向移至其他區(qū)間。

3.1.4 實(shí)驗(yàn)過程中，無全面的質(zhì)量控制程序和措施

關(guān)鍵試劑（DNA提取、純化、擴(kuò)增試劑盒）和耗材（離心管、吸頭、棉簽拭子等）在使用前要對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)收檢驗(yàn)，質(zhì)量合格才能使用。

每次實(shí)驗(yàn)必須設(shè)置對(duì)照樣本（如標(biāo)準(zhǔn)品、已知樣本和陰性對(duì)照），分析結(jié)果時(shí)，首先分析對(duì)照樣本結(jié)果是否準(zhǔn)確。

建立DNA質(zhì)控庫(kù)，且每批基因型入庫(kù)前要與質(zhì)控庫(kù)比對(duì)，排除相關(guān)人員污染，尤其是混合基因型、無比對(duì)樣本的孤立基因型。

3.1.5 DNA技術(shù)人員的技術(shù)力量和檢驗(yàn)習(xí)慣，直接關(guān)系到檢驗(yàn)的成功率和作用率

現(xiàn)場(chǎng)生物檢材的質(zhì)量千差萬別，腐敗、降解、微量、污染的檢材都是DNA檢驗(yàn)中的難題。而DNA技術(shù)的發(fā)展日新月異，作為技術(shù)人員，應(yīng)不斷更新知識(shí)，掌握新技術(shù)如骨骼牙齒等疑難檢材的DNA提取技術(shù)、L C N檢材的DNA純化和濃縮技術(shù)等，提高DNA檢驗(yàn)的成功率和作用率。

受技術(shù)影響，分析DNA結(jié)果遇到干擾譜帶時(shí)，如影子帶（stutter峰）、加A不完全、熒光洇滲（pull-up峰）、模版量太大（雙肩峰）、稀有等位基因（rareallele）等，若不能正確鑒別和分析，就會(huì)發(fā)生基因分型錯(cuò)誤。

受檢驗(yàn)習(xí)慣和責(zé)任心的影響，若樣本標(biāo)記或編號(hào)失誤造成DNA結(jié)果的張冠李戴，使DNA數(shù)據(jù)庫(kù)產(chǎn)生錯(cuò)誤信息，則會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的比中結(jié)果，誤導(dǎo)辦案人員，甚至直接影響到案件的訴訟和判決。

3.2質(zhì)量保證措施

3.2.1 建立規(guī)范、合理的DNA實(shí)驗(yàn)室；各區(qū)間有獨(dú)立的通風(fēng)排氣系統(tǒng)；實(shí)現(xiàn)人物分流；根據(jù)DNA含量由少到多實(shí)現(xiàn)單向流動(dòng)；配備齊全的清洗、消毒設(shè)施，從設(shè)施設(shè)備上有效防止污染。

3.2.2 加強(qiáng)技術(shù)人員的培訓(xùn)和交流，切實(shí)加強(qiáng)技術(shù)力量和攻堅(jiān)克難的能力，加強(qiáng)證據(jù)意識(shí)和訴訟意識(shí)，使DNA更好服務(wù)于偵查實(shí)戰(zhàn)。

3.2.3 建立一套完整、科學(xué)、可靠的檢驗(yàn)方法，從方法原理、使用范圍及要求、操作步驟、注意事項(xiàng)等方面形成作業(yè)指導(dǎo)書，規(guī)范所有技術(shù)人員的實(shí)驗(yàn)過程。

3.2.4 制定嚴(yán)格的質(zhì)量控制和監(jiān)督程序，如對(duì)儀器的校準(zhǔn)和期間核查、關(guān)鍵試劑和耗材的驗(yàn)收、實(shí)驗(yàn)對(duì)照樣本的設(shè)置、圖譜質(zhì)量的核查、實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證等。

4 DNA檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用環(huán)節(jié)

4.1 影響因素

4.1.1 錯(cuò)誤地運(yùn)用DNA的鑒定結(jié)論

線粒體DNA測(cè)序和Y-S T R分析不能達(dá)到同一認(rèn)定的水平，只能作為S T R分型技術(shù)的補(bǔ)充手段。因?yàn)樗鼈兌紝儆趩伪扼w檢驗(yàn)，在排除變異的前提下，同一母系的所有個(gè)體線粒體序列一致，同一父系的所有男性個(gè)體的Y-S T R單倍型分型一致。實(shí)際辦案中若不能正確認(rèn)識(shí)到這一點(diǎn)，將它們等同于常染色體DNA檢驗(yàn)，就有可能出現(xiàn)錯(cuò)案，如山西岳兔元案。

4.1.2．不能正確對(duì)待DNA技術(shù)的局限性

常染色體S T R分型的個(gè)體識(shí)別率高，一般在個(gè)體識(shí)別和三聯(lián)體的親子鑒定中可以達(dá)到同一認(rèn)定的水平，作為證據(jù)使用。但當(dāng)遇到遺傳變異、單親親子鑒定、非直系親屬鑒定、混合DNA樣本檢驗(yàn)等特殊情況時(shí)，無法到達(dá)認(rèn)定的水平。在實(shí)際辦案中，這些特殊案例的檢驗(yàn)結(jié)果不能輕易當(dāng)成認(rèn)定的結(jié)果，必須結(jié)合具體情況進(jìn)行分析。

4.1.3 過分依賴，單純將DNA結(jié)果作為直接判斷有無犯罪的依據(jù)

對(duì)于檢出基因型的“陽性”結(jié)果，只能說明現(xiàn)場(chǎng)中遺留有某人的生物成分，但不能斷定是否為案發(fā)時(shí)遺留，必須結(jié)合其他相關(guān)證據(jù)能否形成證據(jù)鏈進(jìn)行綜合分析，如強(qiáng)奸案中犯罪嫌疑人家中床單、衛(wèi)生紙等檢出精斑成分。

對(duì)于未檢出基因型的“陰性”結(jié)果，也不能直接作為排除作案的可能性，如強(qiáng)奸案中若嫌疑人無精癥或輸精管結(jié)扎，均可能導(dǎo)致無法檢出精斑成分；刀具等已被清洗，無法檢出受害人的成分；傷害多人的兇器中部分受害人的基因型未能檢出等。

4.2 質(zhì)量保證措施

第一，正確定位DNA技術(shù)在偵查、起訴、審判階段的作用，不夸大，不迷信，不依賴。

第二，DNA技術(shù)人員在積極宣傳DNA技術(shù)的同時(shí)，也要向辦案人員解釋DNA的局限性。

第三，在公、檢、法、司系統(tǒng)進(jìn)行DNA基礎(chǔ)知識(shí)的培訓(xùn)，尤其是DNA結(jié)果的解讀和應(yīng)用。

Influencing Factorsand GuaranteeM easures in theQuality of DNA Identification

CHEN Shui-qin,LIU Shu-chao,LI Qiong
(Department of Criminal Investigation,Hunan Public Security Bureau,Changsha,Hunan,410001)

DNA identification process includes the discovery,extraction,preservation and submission of the biological samples，as well as the laboratory test.Each of these factors is likely to influence the quality of DNA identification,thus affecting the solving of the case and its litigation.In order to ensure the quality of the DNA identification,appropriate Guarantee measures should be taken to eliminate these factors.

DNA identification;influencing factors;Guarantee measures

D919.4

A

2095-1140（2012）05-0096-03

2012-09-15

陳水琴（1970- ），女，湖北黃石人，湖南省公安廳刑偵總隊(duì)DNA室主任，副主任法醫(yī)師，主要從事DNA檢驗(yàn)技術(shù)工作。

王道春）