呂占國 路 更 王立強(qiáng)

1.解放軍第二○二醫(yī)院醫(yī)務(wù)處，遼寧 沈陽 110016；2.解放軍第二一一醫(yī)院腎內(nèi)科，黑龍江 哈爾濱 150080；3.華僑大學(xué)分子藥物學(xué)研究所，福建 泉州 362021

腎茶Clerodendranthus spicatus （Thunb.） C.Y.Wu 為唇形科腎茶屬植物。本品為腎茶的干燥莖葉，主要含有黃酮類化合物、甾體皂甙類、蒽醌類甙類、氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸、糖類、多糖類、多酚類化合物等[1-2]。筆者所在單位2008年研制了腎茶膠囊，并對其質(zhì)量進(jìn)行了系統(tǒng)研究。

1 儀器與材料

1.1 儀器

天平：北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司，型號(hào)BP211D；高效液相色譜儀：日本島津，型號(hào)2010；紫外-可見分光光度儀：日本島津，型號(hào)uv-2100。

1.2 材料

腎茶膠囊：中試樣品批號(hào)：090816、090817、090818，規(guī)格：0.3 g/粒，筆者所在單位單位自制。標(biāo)準(zhǔn)品：蘆?。ㄙ徸灾袊幤飞镏破窓z定所，批號(hào)：10080-200705）。

2 方法

總黃酮的含量測定：原標(biāo)準(zhǔn)以薄層掃描方法測定熊果酸的含量，本研究提取的熊果酸含量很低，故采用HPLC法測定主要成分迷迭香酸的含量，同時(shí)腎茶藥材中含有較多的黃酮，故在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中增加了總黃酮的含量測定項(xiàng)，采用紫外分光光度法測定樣品所含總黃酮的含量，取得滿意效果，方法靈敏、可靠[3-4]。

2.1 測定方法

2.1.1 對照品溶液的制備 稱取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品約50 mg，精密稱定后，置于25 mL量瓶中，加甲醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻。精密量取10 mL，置于100 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得（每1毫升中含無水蘆丁0.2 mg）。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分別置于 25 mL 量瓶中，各加水至 6 mL，加 5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加氫氧化鈉試液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15 min，以相應(yīng)的溶液為空白對照，采用分光光度法，在500 nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.1.3 測定法 取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物適量，研細(xì)，從中稱取約0.25 g，精密稱定后，置25 mL錐形瓶中，精密稱定，加甲醇25 mL超聲處理（功率250 W，頻率20 kHz）30 min，放冷，精密稱定，補(bǔ)足重量，搖勻。精密量取10 mL，置100 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取3 mL，置25 mL量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加水至6 mL”起依法測定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的濃度（μg/mL），計(jì)算，即得。

本品每粒含總黃酮以蘆?。–27H30O16）計(jì)，不得少于45.0 mg。

表4 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.2 吸收光譜的測定、光譜一致性檢測

精密吸取蘆丁對照品溶液、供試品溶液各3 mL，分別置于25 mL量瓶中，照分光光度法，在200～750 nm波長范圍內(nèi)測定吸收光譜。結(jié)果蘆丁對照品與供試品光譜可見光區(qū)吸收圖譜基本一致，并且在500 nm波長處有最大吸收。

2.3 線性關(guān)系的考察

精密吸取蘆丁對照品溶液 1、2、3、4、5、6 mL（相當(dāng)于蘆丁 8.03、16.06、24.09、32.12、40.15、48.18 μg/mL），按 上 述 測定法測定吸收度。以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程?；貧w方程為：y=0.0111x+0.0181，r2=0.9995。表明蘆丁在8.03～48.18 μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。見表1、圖1。

圖1 蘆丁不同濃度吸收度

圖1 蘆丁線性回歸方程坐標(biāo)圖

2.4 精密度試驗(yàn)

按2.3項(xiàng)下測定法對對照品溶液重復(fù)測定6次，計(jì)算RSD，結(jié)果見表2。試驗(yàn)結(jié)果表明，RSD＜2%，方法精密度良好，符合測定要求。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

按供試品測定方法測定，對同一批樣品（090816）重復(fù)測定5次，結(jié)果見表3。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果（n=5）

2.6 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的同一批號(hào)（批號(hào)為090816），含量250.51 mg/g）的樣品125 mg，分別精密加入蘆丁對照品各27.5 mg，按正文供試品溶液的制備方法制備及上述光譜條件測定，測定并計(jì)算回收率，平均回收率在97.0%～103.0%之間，RSD＜2%（n=6），方法準(zhǔn)確性良好。見表4。

2.7 含量測定

按上述方法測定各批樣品的含量，結(jié)果見表5。

表5 含量測定結(jié)果（n=6）

根據(jù)3樣品測定結(jié)果，暫定本品含總黃酮不得少于45.0 mg/粒。

3 結(jié)論

通過針對腎茶膠囊中總黃酮的系統(tǒng)研究，包括線性關(guān)系考察、精密度考察、回收率考察、重復(fù)性考察等，證實(shí)本測定方法科學(xué)可行，完全能控制和檢測腎茶膠囊中總黃酮的質(zhì)量。

[1]Hsu CL，Hong BH，Yu YS. Antioxidant and anti-inflammatory effects of orthosiphon aristatus and its bioactive compounds[J].J Agric Food Chem，2010，58（4）：2150-2156.

[2]喻陸，吳凡.欣腎膠囊延緩大鼠慢性腎功能衰竭實(shí)驗(yàn)研究[J].中國中藥雜志，2006，31（24）：2058-2060.

[3]潘曉勤，王曉燕，姜新猷.腎小球系膜細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定[J].南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1995，15（1）：222-223.

[4]李曉玫，戴振華，王海燕.腎小球系膜細(xì)胞增殖抑制因子[J].國外醫(yī)學(xué)（泌尿系統(tǒng)分冊），1997，17（1）：31-34.