謝瑞祥，范芳，張蓮蓮，楊明華（.福建省腫瘤醫(yī)院藥理研究室，福州35004；.福建省腫瘤醫(yī)院麻醉科，福州 35004）

舒芬太尼（Sufentanil）是一種高選擇性阿片類受體激動藥，鎮(zhèn)痛效能強、作用時間長，近年來廣泛應(yīng)用于臨床麻醉[1]。筆者建立了一種反相高效液相色譜法測定人血清中舒芬太尼濃度的方法，具有簡單、快速、專一性強、準確等優(yōu)點。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

GOLD系統(tǒng)高效液相色譜儀，包括125型泵和168型DAD紫外檢測器（美國Beckman公司）。

1.2 試藥

舒芬太尼對照品（湖北宜昌人福醫(yī)藥公司，批號:D81201）；內(nèi)標:艾司唑侖對照品（江蘇濟州制藥有限公司，批號:101112）；乙腈為色譜純，試驗用水為雙重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Symmetry C18分析柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）及預(yù)柱；流動相:乙腈-0.02 mol·L－1醋酸銨-鹽酸（pH4.3）（45∶55）；流速:1 mL·min－1；檢測波長:230 nm；柱溫:室溫。在此色譜條件下，舒芬太尼、艾司唑侖峰位置無干擾且分離良好，峰形尖銳對稱。高效液相色譜圖見圖1。

2.2 試驗溶液的配制

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.2.1 舒芬太尼標準貯備液:準確稱取舒芬太尼對照品10.00 mg，用雙重蒸餾水溶解后定容至100 mL，即得100 μg·mL－1舒芬太尼標準貯備液。

2.2.2 內(nèi)標溶液:準確稱取艾司唑侖對照品10.00 mg，用10%甲醇溶解后定容至1 000 mL，即得10 μg·mL－1艾司唑侖標準溶液。

2.3 樣品預(yù)處理

精密吸取500 μL血清樣本，依次加入10 μg·mL－1艾司唑侖標準溶液40 μL、0.1 mol·L－1的NaOH 0.2 mL、乙酸乙酯-石油醚（4∶1）2 mL，渦旋混合2 min，4 000 r·min－1離心2 min，取上層有機相于60℃水浴用氮氣吹干，流動相100 μL溶解，取40 μ L進樣，記錄色譜圖。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取100 μg·mL－1舒芬太尼標準貯備液0.4 mL，用血清定容至10 mL，即得到4.000 μg·mL－1的舒芬太尼標準血清，依倍率稀釋法依次配制成 2.000、1.000、0.500、0.250、0.100、0.050、0.025 μg·mL－1的系列舒芬太尼標準血清，按“2.3”項下方法作樣品預(yù)處理并接“2.1”項色譜條件操作，測得舒芬太尼峰面積與內(nèi)標艾司唑侖峰面積的比值（Y）與舒芬太尼濃度值（X）的回歸方程為:Y＝0.285 9X－0.000 2（r＝0.999 9）。結(jié)果表明，舒芬太尼血藥濃度在0.025～4.000 μg·mL－1范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度及回收率試驗結(jié)果

按“2.3”、“2.4”項下方法，在同日內(nèi)測定5次和連續(xù)5 d每天測定1次濃度為0.100、0.500、2.000 μg·mL－1的血清樣品并計算含量，得出日內(nèi)、日間精密度和平均回收率，詳見表1。

表1 精密度及回收率試驗結(jié)果（±s， n＝5）Tab 1 Results of precision and recovery test（s±s， n＝5）

表1 精密度及回收率試驗結(jié)果（±s， n＝5）Tab 1 Results of precision and recovery test（s±s， n＝5）

已知濃度/μg·mL-1 2.000 0.500 0.100日內(nèi)精密度測定值/μg·mL-1 2.060±0.082 0.510±0.018 0.113±0.006 RSD/%3.98 3.49 4.51平均回收率/%103.01 101.92 112.80日間精密度測定值/μg·mL-1 2.037±0.122 0.499±0.029 0.107±0.005 RSD/%5.99 5.87 4.67平均回收率/%101.82 99.82 107.04

3 討論

按照文獻[2，3]，本試驗曾采用過正己烷、正己烷-異丙醇作為提取劑，最終的提取物經(jīng)流動相溶解后十分渾濁，后續(xù)操作極為不便。本文所采用的乙酸乙酯-石油醚（4∶1）作為提取劑，具有提取快、提取回收率高、不易乳化、易吹干、雜質(zhì)少等優(yōu)點，大大簡便了操作。

試驗中發(fā)現(xiàn)，在提取過程中，樣品的堿化程度對提取效果影響較大。樣本堿度太低影響提取率，堿度太高則樣品的提取物經(jīng)流動相溶解后較渾濁，色譜圖雜峰多。經(jīng)反復(fù)試驗，樣品中加入0.1 mol·L－1的NaOH 0.2 mL時，樣品提取率高、雜質(zhì)峰少，滿足測定要求。

本文所確立的提取條件和色譜條件，簡單易行，可用于舒芬太尼的血藥濃度測定。

[1]舒芬太尼多中心研討小組.舒芬太尼多中心研討會紀要[J].臨床麻醉學(xué)雜志，2004，20（1）:668.

[2]戚思華，賀振秋，孫 波，等.HPLC法測定人血漿中的舒芬太尼濃度[J].藥物分析雜志，2008，28（4）:599.

[3]文欣榮，顧健騰，陶國才，等.肝移植無肝期舒芬太尼的藥代動力學(xué)特點[J].臨床麻醉學(xué)雜志，2006，22（10）:736.