厲善波

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，約占女性癌癥總數(shù)的7%，近年來(lái)其發(fā)病率有上升趨勢(shì)，其發(fā)生發(fā)展的機(jī)制仍不明確。因此，尋找敏感而特異的腫瘤標(biāo)志物對(duì)子宮內(nèi)膜癌的早期診斷、治療方法的合理選擇和患者的遠(yuǎn)期生存率的提高至關(guān)重要［1］。本研究旨在研究子宮內(nèi)膜樣腺癌中HER-2/neu、p53蛋白的表達(dá)及其臨床病理意義，探討這些生物標(biāo)記在診斷和治療中的作用。

材料和方法

1.標(biāo)本及其來(lái)源:所有病例均來(lái)自1998年1月～2012年3月間我科存檔資料，患者術(shù)前均未接受放療、化療或激素治療，術(shù)后均經(jīng)病理檢查證實(shí)為子宮內(nèi)膜樣腺癌。組織學(xué)類(lèi)型分類(lèi)根據(jù)1988年國(guó)際婦科病理協(xié)會(huì)(ISGP)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，手術(shù)病理分期根據(jù)1988年國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，并經(jīng)病理復(fù)查核實(shí)。

2.主要試劑:DAKO HercepTest抗體(A0485)、鼠抗人p53單克隆抗體(DO-7)、鼠抗人雌激素受體(ER，1D5)、鼠抗人孕激素受體(PR，PqR636)、EnVision+二抗及二氨基聯(lián)苯胺(DAB)均為DAKO公司產(chǎn)品。

3.染色方法:免疫組化采用EnVision+法，HER-2/neu的染色方法依據(jù)DAKO公司的HercepTest的檢測(cè)方法［2］。步驟簡(jiǎn)述如下:石蠟切片厚度4μm，常規(guī)脫蠟至水，微波抗原修復(fù)20min，室溫冷卻，特異性一抗室溫(25℃左右)1h或4℃過(guò)夜，EnVision+二抗40min，DAB顯色3～5min，以上各步驟之間均用TBS緩沖液浸洗3～5min。自來(lái)水終止顯色，充分水洗后蘇木精對(duì)比染色，常規(guī)脫水、透明、封片，同時(shí)設(shè)置陽(yáng)性、陰性(以TBS代替一抗)對(duì)照。

4.免疫組織化學(xué)結(jié)果分析:p53、ER及PR陽(yáng)性染色位于細(xì)胞核(圖1A、B、C)，呈棕黃色或褐色顆粒狀，＞10%為陽(yáng)性。HER-2評(píng)分參考HercepTest的標(biāo)準(zhǔn)及歐美最新的臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)［3］，陽(yáng)性結(jié)果位于腫瘤細(xì)胞胞膜，正常肝細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)著色或腫瘤組織僅細(xì)胞質(zhì)著色均為非特異染色。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):陰性，無(wú)陽(yáng)性結(jié)果表達(dá)或非特異著色;1+，大于10%的區(qū)域有陽(yáng)性表達(dá)，胞膜顯色不連續(xù);2+，大于10%的區(qū)域有陽(yáng)性表達(dá)，胞膜顯色連續(xù)，強(qiáng)度中等;3+，大于10%的區(qū)域有陽(yáng)性表達(dá)，胞膜呈連續(xù)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(圖1D)。對(duì)于異質(zhì)性明顯的腫瘤，如同一切片中同時(shí)存在1+、2+、3+的情況，以高級(jí)別評(píng)分。

圖1.子宮內(nèi)膜樣腺癌中p53、HER-2/neu、ER和PR蛋白表達(dá)

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析。HER-2/neu、p53、ER和PR蛋白與其臨床病理特征的關(guān)系進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料的相關(guān)性分析用Pearson法，以P＜0.05表示差異有顯著性。

結(jié) 果

1.子宮內(nèi)膜樣腺癌的臨床病理特征:67例子宮內(nèi)膜樣腺癌的年齡23～71歲，中位年齡53歲。組織學(xué)分級(jí):I級(jí)(高分化，G1)21例，Ⅱ級(jí)(中分化，G2)17例，Ⅲ級(jí)(低分化，G3)29例;手術(shù)病理分期:I期28例，Ⅱ期12例，Ⅲ期13，Ⅳ期14例;子宮肌層浸潤(rùn)深度≤1/2的39例，子宮肌層浸潤(rùn)深度＞1/2的28例;有淋巴或血管浸潤(rùn)的33例。

2.p53、HER-2/neu、ER 和 PR 的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系:子宮內(nèi)膜樣腺癌p53、HER-2/neu、ER和PR的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系見(jiàn)表1。p53、HER-2/neu、ER和PR的陽(yáng)性表達(dá)率分別為 38.8%(26/67)、46.3%(31/67)、58.2%(39/67)和61.2%(41/67)。p53蛋白在高、中分化(G1+G2)組的陽(yáng)性表達(dá)率為 34.2%(13/38)，低分化(G3)組陽(yáng)性表達(dá)率為62.1%(18/29)，兩者比較差異有顯著性(χ2=5.135，P=0.023);有淋巴血管浸潤(rùn)的陽(yáng)性表達(dá)率66.7%(22/33)明顯高于無(wú)浸潤(rùn)者26.5%(9/34)，兩者比較差異有顯著性(χ2=10.884，P=0.001)。HER-2/neu 過(guò)度表達(dá)在手術(shù)分期Ⅰ+Ⅱ組的陽(yáng)性表達(dá)率為25%(10/40)，Ⅲ、Ⅳ組的陽(yáng)性表達(dá)率為59.3%(16/27)，兩者比較差異有顯著性(χ2=5.759，P=0.016);有淋巴血管浸潤(rùn)的陽(yáng)性表達(dá)率57.6%(19/33)明顯高于無(wú)浸潤(rùn)者20.6%(7/34)，兩者比較差異有顯著性(χ2=4.728，P=0.03)。ER 在高、中分化(G1+G2)組的陽(yáng)性表達(dá)率為 73.7%(28/38)，低分化(G3)組陽(yáng)性表達(dá)率為37.9%(11/29)，兩者比較差異有顯著性(χ2=8.643，P=0.003)。PR 在高、中分化(G1+G2)組的陽(yáng)性表達(dá)率為78.9%(30/38)，低分化(G3)組陽(yáng)性表達(dá)率為37.9%(11/29)，兩者比較差異有顯著性(χ2=11.652，P=0.001)。

3.p53、HER-2/neu、ER 和 PR 蛋白表達(dá)之間的相關(guān)性:子宮內(nèi)膜樣腺癌p53、HER-2/neu、ER和PR蛋白表達(dá)之間的相關(guān)性見(jiàn)表2。結(jié)果顯示p53與HER-2/neu的過(guò)度表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.305，P=0.012)，而與ER和PR無(wú)相關(guān)性。HER-2/neu的過(guò)度表達(dá)與 ER(r=-0.443，P ＜0.001)和 PR(r=-0.271，P=0.024)陽(yáng)性呈負(fù)相關(guān)。ER 與 PR陽(yáng)性呈正相關(guān)(r=0.257，P=0.036)。

討 論

研究表明20% ～30%的乳腺癌HER-2/neu基因擴(kuò)增或過(guò)表達(dá)，卵巢癌、肺癌、胃癌、前列腺癌中也可檢出，證明其與這些腫瘤的發(fā)生也有一定相關(guān)性?？笻ER-2/neu單克隆抗體trastuzumab的研制成功給乳腺癌和其他HER-2/neu過(guò)度表達(dá)腫瘤患者帶來(lái)了希望，已正式應(yīng)用于乳腺癌的治療研究中，并取得了明顯療效［4］。本研究用FDA推薦的標(biāo)準(zhǔn)HER-2/neu檢測(cè) HercepTest試劑盒，顯示38.8%(26/67)的子宮內(nèi)膜樣腺癌有HER-2/neu蛋白過(guò)度表達(dá)，低分化(G3)組陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于高、中分化(G1+G2)組，且與p53蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)，表明HER-2/neu蛋白的過(guò)度表達(dá)是部分子宮內(nèi)膜樣腺癌預(yù)后不良的一個(gè)重要預(yù)測(cè)指標(biāo)，這些病例對(duì)trastuzumab治療可能有效。

眾多研究證實(shí)女性乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌等腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后與雌、孕激素受體有關(guān)。本組ER、PR的表達(dá)率為58.2%和61.2%。因此，對(duì)ER、PR陽(yáng)性的子宮內(nèi)膜樣腺癌輔助應(yīng)用內(nèi)分泌治療可改善療效。本研究結(jié)果還顯示，ER、PR的表達(dá)與HER-2/neu的過(guò)度表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示對(duì)ER、PR表達(dá)陰性患者，如果HER-2/neu過(guò)度表達(dá)，可應(yīng)用trastuzumab治療。本研究結(jié)果顯示HER-2/neu和p53蛋白表達(dá)可作為子宮內(nèi)膜樣腺癌患者的浸潤(rùn)和不良預(yù)后的良好標(biāo)記，對(duì)選擇有效的治療方案也有重要意義。

1 張立琴，張樹(shù)輝.宮頸腺癌HER-2/neu和P53的表達(dá)及其臨床病理學(xué)意義?J?.臨床腫瘤學(xué)雜志，2006，11:854-858.

2 Menard S，Pupa SM，Campiglio M，et al.Biologic and therapeutic role of HER2 in cancer? J?.Oncogene，2003，22(42):6570-6578.

3 Ross JS，F(xiàn)letcher JA，Linette GP，et al.The Her-2/neu gene and protein in breast cancer 2003:biomarker and target of therapy?J?.Oncologist，2003，8(4):307-325.

4 Maeda K，Tsuda H，Hashiguchi Y，et al.Relationship between p53 pathway and estrogen receptor status in endometrioid-type endometrial cancer?J?.Hum Pathol，2002，33(4):386-391.

表1 p53、HER-2/neu、ER、PR蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜樣腺癌臨床病理特征的關(guān)系

表2 子宮內(nèi)膜樣腺癌中p53、HER-2/neu、ER和PR蛋白表達(dá)之間的相關(guān)性