(廣東海洋大學(xué) 水產(chǎn)學(xué)院,廣東 湛江 524025)

精子的質(zhì)量影響對(duì)蝦的受精率和幼體的質(zhì)量,對(duì)蝦精莢研究主要側(cè)重于精莢的形態(tài)、精莢的形成和再生、精莢和精子質(zhì)量評(píng)價(jià)方法以及溫度和鹽度對(duì)精莢再生和質(zhì)量的影響等方面[1-5]。凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)“黑精莢”病卻沒有引起人們的重視,至今未見報(bào)道。所謂“黑精莢”病指的是雄蝦貯精囊中的精莢變黃或變黑結(jié)塊,最后壞死。帶“黑精莢”的凡納濱對(duì)蝦,嚴(yán)重的由于精莢結(jié)塊出現(xiàn)交配困難現(xiàn)象,能交配的交配后卵子受精率也會(huì)很低,甚至由于精子質(zhì)量太差而造成卵子不能受精,對(duì)養(yǎng)殖生產(chǎn)影響較大。許多對(duì)蝦繁育場因此而遭受巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為了查清楚引起黑精莢病的病因和探討其防治方法,作者做了些研究,以期對(duì)凡納濱對(duì)蝦人工繁殖有所幫助。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)用蝦

試驗(yàn)的凡納濱對(duì)蝦是廣東海洋大學(xué)選育家系中挑選出來的健康和已有不同程度黑精莢的雄蝦分別進(jìn)行試驗(yàn),雄蝦體質(zhì)量為35～40 g,體長12～14cm。

1.1.2 試驗(yàn)用水及試驗(yàn)池

試驗(yàn)用水是經(jīng)沉淀、沙濾的海水,鹽度 25～30,pH 7.9～8.2,水溫為自然水溫 25～30℃,隨海區(qū)和室外天氣的變化而變化。試驗(yàn)池為水泥池,面積為 20 m2(4 m×5 m),養(yǎng)殖密度10尾/m2。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)菌分離和鑒定

取出黑精莢,搗碎,在平板培養(yǎng)基上涂抹,按常規(guī)方法進(jìn)行細(xì)菌鑒定。

1.2.2 形成黑精莢原因及預(yù)防試驗(yàn)

試驗(yàn)從2009年開始,對(duì)形成黑精莢的凡納濱對(duì)蝦的養(yǎng)殖環(huán)境條件和年齡進(jìn)行綜合分析,并用沒有黑精莢的凡納濱對(duì)蝦進(jìn)行針對(duì)性試驗(yàn),以確認(rèn)形成黑精莢產(chǎn)生的原因。試驗(yàn)時(shí)間90 d。

1.2.3 治療試驗(yàn)

1.2.3.1 擠出黑精莢

試驗(yàn)黑精莢的凡納濱對(duì)蝦60尾,用人工的方法輕輕將黑精莢從生殖孔中擠壓出來,放到池中培育。為防止細(xì)菌感染,第一、二天施用抗菌素,改投喂優(yōu)質(zhì)的餌料,如日本槍烏賊(Loliginidae japonicus)、蛤(Ruditapes philippinarum)和沙蠶(Perinereis aibuhitensis)等,連續(xù)培育觀察,直到新的精莢形成、成熟。

1.2.3.2 藥物治療

試驗(yàn)有3種方法:(1) 用消毒劑進(jìn)行試驗(yàn)(表1);(2) 使用抗生素進(jìn)行治療(表2);(3) 消毒劑與抗生素協(xié)同使用(表3)。每天換水后施藥,混合用藥于上午施用消毒劑,當(dāng)天下午施用抗生素,治療時(shí)間為 10 d,觀察藥物治療的效果。

2 結(jié)果

2.1 引起凡納濱對(duì)蝦黑精莢的原因

2.1.1 精莢黑化過程

凡納濱對(duì)蝦雄蝦的精莢變黑發(fā)生在精莢成熟的個(gè)體,性腺未發(fā)育成熟的個(gè)體很少發(fā)生黑精現(xiàn)象。精莢黑化過程是逐漸的,初期在生殖孔附近出現(xiàn)淡黃色,此時(shí)的精莢具備受精能力,卵的受精率在85%～90%;中期細(xì)菌進(jìn)一步感染到精莢里面,看上去整個(gè)精莢都帶點(diǎn)淡黃色,卵的受精率在40%～65%;后期精莢變黑、變硬,失去受精能力。

表1 消毒劑種類及用量Tab.1 Type and dosage of disinfectant

表2 抗生素種類及用量Tab.2 Type and dosage of antibiotics

表3 抗生素和消毒劑聯(lián)合用量Tab.3 Combination dosage of antibiotics and disinfectants

2.1.2 精莢黑化原因分析

用水浸法觀察黑精莢,沒有發(fā)現(xiàn)有真菌的菌絲,說明不是由真菌引起的。把黑精莢搗碎接種到培養(yǎng)基上可培養(yǎng)出細(xì)菌菌落,經(jīng)初步鑒定,為哈維氏弧菌(Vibrio harveyi),說明凡納濱對(duì)蝦的“黑精莢”病可能是由細(xì)菌引起的。

2.2 清潔池底間隔時(shí)間對(duì)黑精莢形成的影響

60 d的試驗(yàn)表明,雄蝦在營養(yǎng)充足的條件下,每天清潔池底,出現(xiàn)精莢變黑的現(xiàn)象較少,少于2%,且發(fā)生的精莢變黑程度低,只是在離生殖孔不遠(yuǎn)處有較淡的黃色,達(dá)到預(yù)防黑精莢的目的。如果不清潔池底,時(shí)間越長,出現(xiàn)黑精莢的比例越高,較多長時(shí)間(90 d)生活在底泥(主要是殘餌和蝦的糞便)的雄蝦,容易病變產(chǎn)生黑精莢,黑精莢率高達(dá) 43.2%～65.0%(表4)。

表4 不同管理水平對(duì)黑精莢形成的影響(水溫25～29℃,鹽度25～32)Tab.4 Influence of different pool cleaning ways on the formation of black spermatophore

2.3 擠出黑精莢后精莢再生的效果

擠出黑精莢后,雄蝦可再次形成精莢,形成精莢到成熟的時(shí)間為6～14 d(表5),且再次成熟的雄蝦精子質(zhì)量好,受精率可達(dá) 85.4%～90.2%,與正常的雄蝦受精率沒有差異,說明這種方法可解決生產(chǎn)上雄蝦精莢黑化問題。但從表中5也可以看出,處理后的雄蝦死亡率較高,高的死亡率達(dá)28.3%。尤其是已變硬的精莢,很難擠出來,即使擠出來,蝦易受傷,不久也會(huì)死亡。

表5 擠出黑精莢后精莢重新形成和受精的情況Tab.5 Spermatophore formation and fertilization conditions after squeezing out the black spermatophores

2.4 藥物治療黑精莢效果

2.4.1 水體施用消毒劑的治療效果

直接施用消毒劑對(duì)治療黑精莢病效果見表6,3種消毒劑中二氧化氯有一定的治療效果,治痊率達(dá)45%。觀察發(fā)現(xiàn):二氧化氯只對(duì)輕度病癥的有治療效果,對(duì)已變黑的精莢很難恢復(fù),甲醛和高錳酸鉀治療效果不顯著。

表6 消毒劑的治療效果Tab.6 The disinfectant treatment results on black spermatophores control

2.4.2 抗生素的治療效果

單純使用抗生素對(duì)凡納濱對(duì)蝦黑精莢病治療效果不顯著(表7),諾氟沙星具最高的治痊愈率只有18%。

表7 抗生素治療效果Tab.7 The antibiotic treatment results on black spermatophores control

2.4.3 抗生素和消毒劑聯(lián)合用藥的治療效果

使用抗生素和消毒劑聯(lián)合用藥試驗(yàn) 10 d,二氧化氯+諾氟沙星聯(lián)合用藥治療效果顯著,黑精莢治痊率高達(dá)85%,但已變硬的精莢無法恢復(fù)(表8)。其他2種組合效果不顯著。

表8 抗生素和消毒劑聯(lián)合用藥治療效果Tab.8 The combination treatment results on black spermatophores control using both antibiotics and disinfectants

3 討論

凡納濱對(duì)蝦雄蝦“黑精莢”現(xiàn)象比較普遍,在親蝦中均有發(fā)現(xiàn),是影響受精率的重要因素之一,但一直沒有引起人們的關(guān)注。當(dāng)親蝦的精莢變黑時(shí),意味著精子生存的環(huán)境發(fā)生了改變,精子的活力和質(zhì)量變差,甚至失去受精能力。對(duì)于產(chǎn)生黑精莢的原因國內(nèi)外研究不多,孟慶顯[6]認(rèn)為中國明對(duì)蝦黑精莢病是由真菌引起的,但是原發(fā)性還是繼發(fā)性感染尚難斷定。這點(diǎn)與凡納濱對(duì)蝦黑精莢病的病因不同,作者從黑精莢中沒有發(fā)現(xiàn)真菌,但分離出細(xì)菌,說明可能是由細(xì)菌感染引起。根據(jù)試驗(yàn)過程中跟蹤檢查的結(jié)果,引起黑精莢病的具體的原因有4種:(1)對(duì)蝦長期生活在底質(zhì)較臟的塘或養(yǎng)殖池中,受到細(xì)菌感染,患黑精莢的凡納濱對(duì)蝦占 43%～65%;(2)長期營養(yǎng)不良,精莢不飽滿時(shí),患黑精莢的凡納濱對(duì)蝦占20%～35%;(3)水溫過高,當(dāng)雄蝦在水溫高于32～33℃環(huán)境中培育時(shí)間超過20 d時(shí),精莢容易變黑;(4)月齡超過15個(gè)月的雄蝦,長期生活在底質(zhì)較臟的養(yǎng)殖池中,營養(yǎng)不良,患黑精莢病的幾率大增。由此推測,引起黑精莢病主要是由于親蝦長期生活在較臟的底質(zhì)中,營養(yǎng)不良等因素引起細(xì)菌感染;培育水溫過高,引起精莢壞死變黑,因此,細(xì)菌感染可能是繼發(fā)的。海捕的斑節(jié)對(duì)蝦(Penaeus monodon)和墨吉明對(duì)蝦(Fenneropenaeus merguiensis)的雄蝦極少有患黑精莢病的,也間接說明了底質(zhì)、水溫和營養(yǎng)是影響黑精莢產(chǎn)生的主要因素。

了解產(chǎn)生黑精莢病的原因后,可有針對(duì)性地做好預(yù)防黑精莢病的工作。方法是每天吸污、清掃池底積物,保持親蝦的池底清潔;勤換水,每天換水量達(dá) 50%～100%;進(jìn)行適當(dāng)?shù)乃w消毒;投喂優(yōu)質(zhì)餌料,尤其是營養(yǎng)豐富的鮮活餌料,控制水溫在 30℃以下,這樣就不會(huì)出現(xiàn)黑精莢病。這也是在親蝦催熟培育期間很少發(fā)生黑精莢病的原因。

發(fā)生黑精莢病后要及時(shí)治療,平時(shí)要進(jìn)行水體消毒,早期發(fā)現(xiàn)可用二氧化氯消毒處理,當(dāng)精莢變黃色,且只在生殖孔不遠(yuǎn)處,沒有深入到精莢中部,這是用藥治療的最佳時(shí)機(jī),聯(lián)合使用二氧化氯 1 mL/m3(濃度5%)+諾氟沙星2 mg/L,用藥一周時(shí)間治療,效果非常顯著,治愈率可達(dá)85%,甚至更高。但如果早期不采取預(yù)防和治療措施,讓其進(jìn)一步發(fā)展,整個(gè)精莢都變黑,并結(jié)成硬塊,此時(shí)藥物是很難治療、讓其再恢復(fù)功能了。

當(dāng)病菌進(jìn)入到精莢中部后,藥物治療還有效果,但需要時(shí)間長,最好的辦法是將病變的精莢擠出來,讓新的精莢重新形成。重新形成的精莢飽滿,不會(huì)變黑,且精子的質(zhì)量好,平均受精率達(dá) 90.2%。因此,用人工方法擠出黑精莢,讓新的精莢重新形成,是解決黑精莢病難題的有效途徑之一。但用人工擠黑精莢的方法,雄蝦死亡率較高,最高的死亡率達(dá)28.3%。在試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn),若操作不熟練,很容易將納精囊和輸精管一起擠出來,引起雄蝦死亡;或擠不出精莢,用力過度使雄蝦受傷導(dǎo)致死亡。因此,以后可考慮改用電擊的方法,將黑精莢電擊出來,減少雄蝦死亡。另外,當(dāng)精莢變黑,產(chǎn)生硬塊時(shí),證明精莢已壞死,由于生殖孔小,也很難從生殖孔中擠出,這種雄蝦最好淘汰掉。

[1]趙連翠,蔡生力.對(duì)蝦精莢和精子的研究進(jìn)展[J].海洋科學(xué),2005,29(2):73-77.

[2]Dougherty W J,Dougherty M M.Electron microscopical and histochemical observations on melanized sperm and spermatophores of pond- cultured shrimp,Penaeus vannamei[J].Journal of Invertebrate Pathology,1989,54:331-343.

[3]Martin Perez-Velazqucz,William A,Bray,et al.Effect of temperature on sperm quality of captiveLitopenaeus vannameibroodstock [J].Aquaculture,2001,198:209-218.

[4]Perez-Velazquez Martin,Gonzalez-Felix M L.Dietary effects on sperm quality ofLitopenaeus vannameibroodstock[J].J World Aquac Soc,2003,34(1):92-98.

[5]袁路,蔡生力.溫度、鹽度對(duì)凡納濱對(duì)蝦精莢再生和精子質(zhì)量的影響[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào),2006,30(1):63-68.

[6]孟慶顯.對(duì)蝦疾病防治手冊(cè)[M].青島:青島海洋大學(xué)出版社,1991:152-153.