翟學(xué)娜，劉 青，王姿婧，房志仲

（1.天津市眼科醫(yī)院藥劑科，天津醫(yī)科大學(xué)眼科臨床學(xué)院藥劑科，天津300020；2.天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，天津市臨床藥物關(guān)鍵技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300070）

加替沙星（gatifloxacin）是第四代氟喹諾酮類藥物，對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和耐青霉素肺炎鏈球菌顯示了很強(qiáng)的抗菌效能，并對(duì)厭氧菌、支原體、衣原體、分枝桿菌均有一定的抗菌作用，所以受到國內(nèi)外的廣泛關(guān)注[1-2]。加替沙星在眼科領(lǐng)域的應(yīng)用研究已取得廣泛進(jìn)展。0.3%加替沙星滴眼液繼2004年3月獲FDA批準(zhǔn)后，又于同年7月在日本獲準(zhǔn)上市，商品名ZYMAR。ZYMAR是第一種進(jìn)入市場，用于治療眼部感染的第四代氟喹諾酮類藥物，主要用于敏感菌株引起的細(xì)菌性結(jié)膜炎[3]。普通眼用藥物在眼中滯留時(shí)間短，由于眼瞼的眨動(dòng)和淚液的分泌，只有1%～10%的藥物可透過角膜[4]，生物利用度低。卡波姆制成的眼用凝膠劑可延長藥物在角膜的滯留時(shí)間，從而增加藥物吸收并延長作用時(shí)間。用卡波姆940制成的硝酸毛果蕓香堿緩釋滴眼劑，縮瞳持續(xù)時(shí)間較其它滴眼劑長2～3倍，且延長時(shí)間隨卡波姆濃度的增加而增加，卡波姆974與眼的接觸時(shí)間有濃度依賴性，濃度為2%的卡波姆凝膠與眼的接觸時(shí)間約為2～2.5h，接觸時(shí)間與凝膠彈性呈良好相關(guān)性[5]。為此，我們根據(jù)設(shè)計(jì)并制備了加替沙星眼用凝膠劑，按照《中國藥典》二部（2010）版附錄中關(guān)于滴眼劑的要求制定了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[6]，為申報(bào)醫(yī)院制劑提供實(shí)用依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 高效液相色譜儀（美國 Spectraphysics）；輸液泵SP8810；Spectra Focus紫外檢測器；柱溫箱（CBL Model 100）；Anastar色譜工作站；電子分析天平（BP211D，德國Sartorius）；超聲波清洗器（7KQ-100B型，昆山市超聲儀器有限公司）。滲透壓測定儀（SMC30，天津醫(yī)藥儀器有限公司）；黏度計(jì)（NDS-8S型，上海天平儀器廠）；電動(dòng)攪拌器（WH-S型，天津市威華儀器設(shè)備有限公司）；pH計(jì)（雷磁pHs-25型，上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

1.1.2 試劑 加替沙星對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：130518-200402，規(guī)格：供含量測定用）；鹽酸加替沙星注射液（浙江弘盛藥業(yè)有限公司，規(guī)格：0.2g/10mL，批號(hào)：090315）；卡波姆974P（路博潤，批號(hào)：0100772788）；甲醇（色譜純，天津市彪奇科技發(fā)展有限公司），其它試劑均為市售分析純，重蒸水自制。

1.2 方法

1.2.1 加替沙星滴眼用凝膠劑的制備

1.2.1.1 處方：加替沙星3g（相當(dāng)于注射劑15支）；卡波姆974P 5g；氯化鈉8.5g；5%尼泊金乙酯醇溶液10mL；重蒸水加至1000mL。

1.2.1.2 制備：稱取卡波姆974P粉末5.0g，加入盛有500mL重蒸水的燒杯中，使其充分溶脹（冰箱中冷藏過夜）后，取出，加熱至室溫，邊加熱邊攪拌1h（200r/min）。將加替沙星注射液用少量重蒸水稀釋，用少量重蒸水溶解氯化鈉，加至卡波姆974P溶液中，快速攪拌中加入尼泊金乙酯醇溶液 (必要時(shí)加熱)，混勻，以0.1mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)pH至6.0～7.0，混勻，抽濾，經(jīng)濾器加重蒸水至全量，分裝，以100℃流通蒸汽滅菌30min，即得。

1.2.2 加替沙星滴眼用凝膠劑的含量測定[7-9]

1.2.2.1 色譜條件：色譜柱：TIANHE?C18柱（200× 4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：三乙胺磷酸溶液[三乙胺溶液(1→100)，用磷酸調(diào)節(jié)pH至4.5]-乙腈(87:13)；檢測波長：325nm；柱溫：40℃；流速：0.8mL/min；靈敏度：0.01AUFS；進(jìn)樣量：20μL。理論塔板數(shù)按加替沙星峰計(jì)算，不低于2500。

1.2.2.2 溶液的制備：（1）對(duì)照品溶液的制備：取加替沙星對(duì)照品約30mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，即得0.3mg/mL對(duì)照品溶液，備用。（2）供試品溶液的制備：取加替沙星眼用凝膠劑1支，精密量取2.0mL，置10mL量瓶中，以流動(dòng)相定容至10mL，即得供試品溶液。（3）陰性對(duì)照溶液的制備：按處方比例配成不含加替沙星的眼用凝膠劑陰性對(duì)照樣品，照供試品溶液的制備方法，制成陰性對(duì)照溶液。分別精密吸取陰性對(duì)照溶液、供試品溶液及對(duì)照品溶液各20μL，注入液相色譜儀中。

1.2.2.3 線性關(guān)系考察：分別精密量取對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL置10mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液，進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。以加替沙星峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，溶液濃度（C）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2.4 精密度試驗(yàn)：按照“1.2.2.1項(xiàng)下”精密吸取同一供試品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。

1.2.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)：精確稱取樣品，按供試品溶液制備方法操作，在“1.2.2.1項(xiàng)下”色譜條件下，分別在0、4、8、12和24h內(nèi)注入高效液相色譜儀，測定峰面積。

1.2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn)：分別量取供試品溶液6份，按“1.2.2.2（2）項(xiàng)下”操作，在“1.2.2.1項(xiàng)下”色譜條件下，各取20μL進(jìn)樣，測定峰面積。

1.2.2.7 加樣回收率實(shí)驗(yàn)：精密量取供試品1mL，分別在供試品中精密加入相當(dāng)于加替沙星含量的80%、100%和120%的加替沙星對(duì)照品溶液0.8、1.0、1.2mL各3份，用流動(dòng)相稀釋至刻度，作為加樣回收率實(shí)驗(yàn)的供試品溶液。各取20μL進(jìn)樣，進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計(jì)算加替沙星的回收率。

1.2.2.8 樣品測定：取本品3批，按供試品溶液的制備方法，按“1.2.2.1項(xiàng)下”色譜條件進(jìn)樣，分別測定加替沙星的含量。

1.2.2.9 加替沙星眼用凝膠劑質(zhì)量檢查：取各批次樣品，按照《中國藥典》（二部）2010年版滴眼劑附錄項(xiàng)下[6]要求檢查其外觀性狀、pH值、黏度和含量。

1.2.2.10 樣品穩(wěn)定性考察：取各批次樣品，進(jìn)行6個(gè)月的加速試驗(yàn)（溫度40℃，相對(duì)濕度75%）和12個(gè)月的長期試驗(yàn)（溫度25℃，相對(duì)濕度60%），記錄其外觀性狀的變換，同時(shí)測定pH值、黏度和含量等評(píng)價(jià)指標(biāo)。

2 結(jié)果

2.1 HPLC測定結(jié)果 由圖1和圖2可見，加替沙星的保留時(shí)間約為13min，理論塔板數(shù)按加替沙星峰計(jì)算為3845；加替沙星與相鄰雜質(zhì)峰的分離度為5.56。因此，在所制訂的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中要求理論塔板數(shù)按加替沙星峰計(jì)算應(yīng)大于2500，加替沙星峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度大于2.0。圖3空白對(duì)照溶液色譜圖中與對(duì)照品相同保留時(shí)間處無干擾，除溶劑峰外，未見其他色譜峰，表明輔料不干擾樣品測定。

2.2 線性關(guān)系考察 結(jié)果表明，加替沙星濃度在15～180μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。以加替沙星峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：Y=16829536.9C+5703.2，r=0.99989。

2.3 精密度試驗(yàn) 加替沙星峰面積的RSD=0.21%。2.4穩(wěn)定性試驗(yàn) 供試品溶液中加替沙星峰面積RSD=0.98%，供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 供試品中加替沙星含量RSD= 0.55%，本試驗(yàn)重復(fù)性較好。

圖2 加替沙星眼用凝膠劑色譜圖Fig 2 Chromatogram of gatifloxacin ophthalmic gel

圖3 空白輔料的高效液相色譜圖Fig 3Chromatograms of blank

2.6 加樣回收率試驗(yàn) 結(jié)果見表1。

2.7 樣品測定 取本品3批進(jìn)行測定，加替沙星平均含量為99.78%，RSD=0.21%。

2.8 加替沙星眼用凝膠劑質(zhì)量檢查 取各批次樣品，按照《中國藥典》2010年版滴眼劑附錄項(xiàng)下要求檢查其外觀性狀、pH值、黏度和含量等，結(jié)果見表2。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab 1 Result of recovery test

表2 加替沙星眼用凝膠劑質(zhì)量檢查Tab 2 Quality control of gatifloxacin ophthalmic gel

2.9 樣品穩(wěn)定性考察 3個(gè)批次樣品的外觀性狀、pH值、黏度和含量等均未發(fā)生明顯變化，符合《中國藥典》（二部）2010版滴眼劑項(xiàng)下要求，說明本試驗(yàn)制備的加替沙星眼用凝膠劑質(zhì)量穩(wěn)定。

3 討論

3.1 眼用凝膠劑的特點(diǎn) 卡波姆形成的凝膠在pH 5～11范圍內(nèi)較穩(wěn)定，當(dāng)pH＜3或＞12時(shí)，黏度為1Pa·s，在pH 6～12時(shí)較黏稠，pH為8時(shí)黏度增到50Pa·s，因此控制pH值可調(diào)節(jié)制劑的穩(wěn)定性和黏度[10]。周勤等[11]根據(jù)臨床需要，研制了馬來酸噻嗎洛爾眼用凝膠劑，為增加其黏度、延長藥物與眼局部接觸時(shí)間，加入卡波姆，結(jié)果表明，1次/d給藥治療眼高壓癥的作用與馬來酸噻嗎洛爾滴眼液2次/d給藥作用相同，無刺激性且穩(wěn)定性好。羅云等[12]研制的依諾沙星眼用即用型凝膠，是以卡波姆為基質(zhì)的低黏度凝膠，可像傳統(tǒng)的滴眼液一樣滴入眼內(nèi)，分劑量準(zhǔn)確，但較滴眼液的眼內(nèi)滯留時(shí)間長，生物利用度高。許多眼用藥物吸收差，主要由于眼淚使其消除加快，用卡波姆制得的眼用凝膠可延長藥物在眼內(nèi)的滯留時(shí)間，增加藥物的吸收。寧德俄等[13]用卡波姆940研制了滯留型復(fù)方氧氟沙星滴眼液，不但可增稠和延長滯留，且與其它增稠滯留劑相比，卡波姆在高溫滅菌過程中穩(wěn)定，并可保持滴眼劑的黏度不變。汪榮軍[14]以卡波姆940制備了左氧氟沙星眼用凝膠，延長了藥物作用時(shí)間，刺激性小。

3.2 加替沙星眼內(nèi)的生物學(xué)特性 加替沙星滴眼劑具有良好的眼內(nèi)通透性，毛郴等[15]在兔靜脈滴注加替沙星25mg/kg后，淚液、角膜、房水和虹膜睫狀體Cmax分別為0.37μg/mL、0.17μg/g、1.56μg/mL和0.70μg/g，達(dá)到較高藥物濃度。周遠(yuǎn)大等[16]給兔1次滴注0.3%加替沙星滴眼液50μL后，淚液濃度0.125h時(shí)為1115.75μg/mL，t1/2為0.35h；8h后仍達(dá)7.75μg/mL；房水、角膜和虹膜-睫狀體的峰濃度（μg/mL或μg/g）分別為1.94、16.49和8.57，均顯著高于眼感染菌的MIC90。

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