陳海飛，卞 俊，鮑蕾蕾，柳正良

CHEN Hɑi-fei，BIAN Jun，BAO Lei-lei，LIU Zheng-liɑng

(Depɑrtment of Phɑrmɑcy，No.411 Hospitɑl of CPLA，Shɑnghɑi 200434，Chinɑ)

絕經(jīng)后女性的雌激素水平下降是導(dǎo)致骨質(zhì)加速丟失、引發(fā)骨質(zhì)疏松癥的重要原因［1］。據(jù)此，學(xué)者們采用切除雙側(cè)卵巢的方法建立了大鼠骨質(zhì)疏松癥模型［2-3］，并在相關(guān)研究中廣泛運用。本實驗按照中醫(yī)腎主骨的理論，以補腎方復(fù)方健骨膠囊為實驗藥物，通過觀察卵巢切除誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松癥大鼠模型用藥前后骨鈣含量和骨密度，評價該藥治療骨質(zhì)疏松的作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 60只雌性SD大鼠，清潔級，體質(zhì)量300 g左右，由上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司提供，許可證號SCXK(滬)2003-0003。

1.2 藥品 復(fù)方健骨膠囊，由骨碎補、淫羊藿、丹參、補骨脂、牛膝、山藥組方，膠囊內(nèi)容物為棕褐色顆粒，由本院制劑室自制。

1.3 儀器 原子吸收分光光度計(HG9620A型，沈陽光華精密儀器有限公司)、雙能X線骨密度儀(LUNAR EXPERT#1170型，美國)、精密卡尺、動物解剖器械、電子天平(SL-1001型，精度0.1 g，上海民橋電子儀器廠)、電子天平(JA2003型，精度0.001 g，上海精科天平)、烘箱。

1.4 卵巢切除術(shù)［2-3］及術(shù)后篩查 摘除卵巢后5 d進行陰道涂片檢查，1次/d，連續(xù)7 d，如涂片呈動情反應(yīng)(鏡下見大量半透明、扁平的表皮細胞)，表明卵巢切除不完全，應(yīng)棄去不用。假手術(shù)組按同法進行手術(shù)，去除1小塊脂肪代替卵巢。

1.5 動物分組及給藥方法 大鼠術(shù)后經(jīng)1周適應(yīng)性喂養(yǎng)后分組，除假手術(shù)組外，卵巢摘除大鼠隨機分組為模型組、低劑量組、中劑量組、高劑量組和陽性藥對照組，本組10只。假手術(shù)組和模型組給予蒸餾水，低劑量組、中劑量組和高劑量組分別給予復(fù)方健骨膠囊內(nèi)容物200、400、800 mg/kg，陽性藥對照組給予碳酸鈣100 mg/kg，1次/d，連續(xù)90 d。所有試驗動物均食用配制的飼料，自由攝食飲水，單籠飼養(yǎng)，定期觀察一般情況，每周測1次體質(zhì)量。

1.6 骨鈣含量測定 動物喂養(yǎng)90 d后處死，剝離出左右側(cè)股骨，于烘箱中105℃烘烤至恒重，稱量骨干重。左側(cè)股骨用于測量骨長。右側(cè)股骨置于100 ml潔凈燒杯中，加入混合酸(硝酸∶高氯酸=4∶1)15 ml，蓋上表面皿，在電熱板上加熱消化(冒白煙)，酸液不夠時可以再加入少量混合酸。待消化液透明無色后加數(shù)毫升去離子水，煮沸以除盡剩余的酸，重復(fù)2次，最后消化液的體積不超過1 ml。消化樣品時同時作空白對照，加入與樣品消化時相同體積的混合酸，在相同條件下消化。按照原子吸收分光光度計操作說明書進行測定。測定液、標(biāo)準(zhǔn)溶液和空白對照均用氧化鑭溶液稀釋、定容。

1.7 股骨密度測量 左側(cè)股骨用生理鹽水浸泡的紗布包裹，冷藏保存，用雙能X線骨密度儀測定股骨中點和股骨遠心端骨密度。

2 結(jié)果

2.1 對體質(zhì)量的影響 見表1。實驗第30天、第60天和第90天，模型組體質(zhì)量明顯高于假手術(shù)組(P＜0.05)，各劑量組與模型組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。表明200、400、800 mg/kg劑量復(fù)方健骨膠囊對模型動物體質(zhì)量均無明顯影響。

表1 給藥前后各組大鼠體質(zhì)量變化(±s，各組n=10，g)

表1 給藥前后各組大鼠體質(zhì)量變化(±s，各組n=10，g)

注:與同期模型組相比aP＜0.05

組別 第0天 第30天 第60天 第90天假手術(shù)組 306.5±11.7 337.7±12.0a352.8±12.0a363.8±12.4a模型組 306.2±10.9 368.9±11.4 391.9±13.4 408.7±13.9低劑量組 306.5±10.2 371.8±9.2 393.5±10.6 408.8±13.4中劑量組 306.4±10.1 365.4±11.0 387.3±12.9 401.0±12.5高劑量組 306.5±9.9 367.2±19.9 387.6±22.3 402.1±22.3陽性藥對照組306.5±9.6 370.5±7.0 392.8±10.1 407.4±10.6

2.2 對骨鈣含量的影響 見表2。模型組大鼠骨鈣含量明顯低于假手術(shù)組(P＜0.05)，說明骨質(zhì)疏松癥大鼠模型建立成功。復(fù)方健骨膠囊中、高劑量組和陽性藥對照組骨鈣含量明顯高于模型組(P＜0.05)，表明400、800 mg/kg劑量復(fù)方健骨膠囊具有增加骨鈣含量的作用。

表2 給藥90 d后各組大鼠股骨重、骨長和骨鈣含量(±s，各組n=10)

表2 給藥90 d后各組大鼠股骨重、骨長和骨鈣含量(±s，各組n=10)

注:與模型組相比aP＜0.05

組別 骨重(g) 骨長(cm) 骨鈣含量(mg/g假手術(shù)組 0.407±0.013 3.51±0.02 270.3±17.2)a模型組 0.429±0.021 3.57±0.03 213.8±11.8低劑量組 0.422±0.024 3.54±0.03 218.0±14.4中劑量組 0.420±0.030 3.55±0.03 234.3±11.0a高劑量組 0.413±0.023 3.54±0.04 251.0±16.7a陽性藥對照組 0.416±0.029 3.53±0.04 240.0±9.4a

2.3 對骨密度的影響 見表3。模型組骨密度明顯低于假手術(shù)組(P＜0.05)，說明骨質(zhì)疏松動物模型建立成功。復(fù)方健骨膠囊高劑量組骨密度明顯高于模型組(P＜0.05)，表明800 mg/kg劑量復(fù)方健骨膠囊具有增加骨密度的作用。

表3 給藥90 d后各組大鼠骨密度(±s，各組n=10)

注:與模型組相比aP＜0.05

組別 股骨中點骨密度(g/cm2)股骨遠心端骨密度(g/cm2)假手術(shù)組 0.241±0.017a 0.268±0.013a模型組 0.199±0.017 0.221±0.007低劑量組 0.211±0.008 0.228±0.018中劑量組 0.213±0.013 0.234±0.018高劑量組 0.228±0.017a 0.254±0.011a陽性藥對照組 0.218±0.012a 0.243±0.018a

3 討論

中醫(yī)學(xué)把骨質(zhì)疏松癥歸屬于骨痿、骨枯、骨痹的范疇，認為腎虛和脾虛是重要病機，血瘀是促進因素。復(fù)方健骨膠囊為中醫(yī)驗方，由骨碎補、淫羊藿、補骨脂、牛膝、山藥、丹參等組成。該方以補腎強骨的骨碎補和補腎陽、強筋骨的淫羊藿為主藥，輔以歸腎、脾經(jīng)、溫腎助陽的補骨脂;歸脾、肺、腎經(jīng)、補脾養(yǎng)胃、生津益肺、補腎澀精的山藥;以及歸心、肝經(jīng)，祛瘀止痛、活血通經(jīng)的丹參，并佐以牛膝，共奏益補脾腎、強筋健骨、活血通絡(luò)之效。

本研究通過測定模型大鼠骨鈣含量和骨密度，評價復(fù)方健骨膠囊的抗骨質(zhì)疏松作用。結(jié)果表明復(fù)方健骨膠囊能夠提高骨鈣含量，增加骨密度，有一定的抗骨質(zhì)疏松作用，這為復(fù)方健骨膠囊治療骨質(zhì)疏松癥提供了藥理依據(jù)。

［1］Christiansen C，Lindsay R.Estrogens，bone loss and preservation［J］.Osteoporosis Int，1990，1(1):7-13.

［2］Devlin H，F(xiàn)erguson MW.Compositional changes in rat femur following ovariectomy［J］.Acta Anatomica，1989，136(1):38-41.

［3］Tabuchi C，Simmons DJ，F(xiàn)austo A，et al.Bone deficit in ovariectomized rats［J］.J Clin Invest，1986，78(9):637-642.

(本文編輯:施 莼)