王 禹

（黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝分院，哈爾濱 150069）

樹莓屬于薔薇科（Rosaceae）懸鉤子屬（RubusL.），是近幾年世界發(fā)展迅速的第三代新興水果。其鮮果含有多種人體必需的營養(yǎng)成分，并有較高的藥用價(jià)值；果實(shí)除鮮食外，還可制成果汁、果酒和清涼飲料，深受消費(fèi)者的喜愛。樹莓推廣種植與產(chǎn)業(yè)化開發(fā)前景廣闊，但傳統(tǒng)的根蘗分株繁殖方法，難以滿足生產(chǎn)對大量優(yōu)質(zhì)苗木的需求。應(yīng)用組織培養(yǎng)繁育樹莓苗木可提高繁殖系數(shù)和苗木質(zhì)量。在植物組織培養(yǎng)過程中，控制外植體污染是組培發(fā)生的關(guān)鍵。本實(shí)驗(yàn)探索了抑制樹莓外植體污染的有效途徑，為快繁技術(shù)研究奠定了基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)材料及方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

試驗(yàn)樹莓品種為“費(fèi)爾杜德”和“哈瑞太茲”，采用的外植體為腋芽。將采集的樹莓當(dāng)年生枝條去除葉片及葉柄部分，將枝條剪成帶1～2個(gè)腋芽的莖段，在流水狀態(tài)下沖洗10min。消毒程序：70%的酒精中浸30s→無菌水沖洗2～3次→0.1%HgCl2中浸泡→無菌水沖洗2～3次，接種到初生培養(yǎng)基上。試驗(yàn)研究外植體在0.1%HgCl2溶液中的適宜消毒時(shí)間和培養(yǎng)基附加抗生素對外植體污染的影響。

1.2試驗(yàn)方法

初生培養(yǎng)基采用MS＋1mg／L 6－BA＋0.3mg／L IAA＋20g／L蔗糖，抗生素（頭孢曲松鈉）附加到培養(yǎng)基中，每一處理20瓶，每瓶2個(gè)外植體，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。所有培養(yǎng)基都經(jīng)高壓蒸汽滅菌20min（120～125℃，1.0～1.2大氣壓下），頭孢曲松鈉經(jīng)過濾滅菌。

調(diào)查：

2 結(jié)果與分析

2.1 外植體在0.1%HgCl2溶液中的適宜消毒時(shí)間

表1 0.1%HgCl2溶液消毒時(shí)間對外植體污染的影響

試驗(yàn)為了觀察外植體污染率初生培養(yǎng)基上未添加抗生素。從表1可以看出8、10、12min處理外植體污染率低；12min處理的萌芽率低，10min處理的萌芽率雖沒有降低，但是萌芽速度開始減慢。綜合比較，外植體在0.1%HgCl2溶液中消毒時(shí)間應(yīng)選8min為宜。

2.2 培養(yǎng)基附加抗生素對外植體污染的影響

表2 抗生素對外植體污染的影響

從表2中看出初生培養(yǎng)基附加抗生素后有效地抑制了外植體污染。費(fèi)爾杜德和哈瑞太茲分別加入60mg／L、80mg／L抗生素，萌芽率最高，污染率較低，芽生長良好。

結(jié)合表1和表2得出雖然高濃度的抗生素可有效地控制外植體污染，但是它會對芽萌發(fā)起到抑制作用，致使芽生長不健壯；相反低濃度的抗生素不能有效的抑制污染；適宜的抗生素濃度會對芽萌發(fā)起到促進(jìn)作用，且不會對芽的生長造成不良影響。

3 討論

和加衛(wèi)等［1］認(rèn)為未萌發(fā)的腋芽是樹莓快速繁殖的最佳外植體。樸日子等［2］認(rèn)為腋芽是無刺紅樹莓快繁的理想外植體，芽生長快，且遺傳性穩(wěn)定，莖尖易褐變死亡。本試驗(yàn)選擇了帶腋芽的嫩枝莖段為外植體。帶腋芽的嫩枝莖段在田間易于取材，數(shù)量多，外層包裹的芽鱗片易于剝離，在生長培養(yǎng)基上啟動率高。

目前對內(nèi)生菌防治的最有效辦法是使用抗生素［3］。研究表明：直接在培養(yǎng)基中加入抗生素能有效控制這類污染，然而這對培養(yǎng)材料也具有致毒作用并延緩其生長［4］。Leifert報(bào)道在培養(yǎng)基中加入抗生素結(jié)果使飛燕草的增殖和生根都受到阻緩［5］。本實(shí)驗(yàn)在培養(yǎng)基中附加了抗生素，有效地抑制了外植體污染，但是高濃度的抗生素會抑制芽的萌發(fā)，造成芽生長發(fā)育不良；抗生素對不同的品種影響不同，因此抗生素的選用也要因品種而異。

4 結(jié)論

外植體在0.1%HgCl2溶液中消毒時(shí)間為8min。初生培養(yǎng)中費(fèi)爾杜德和哈瑞太茲分別附加60mg／L、80mg／L抗生素，萌芽率最高，污染率較低，芽體萌發(fā)效果好。

［1］ 和加衛(wèi)，徐中志，畢海林，等.樹莓組織培養(yǎng)與快速繁殖技術(shù)研究［J］.西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2006，19（4）：754－756.

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