韋娟

HPLC法測定血脂康膠囊的有關物質

韋娟

目的 建立高效液相色譜法測定血脂康膠囊中有關物質的方法。方法 采用C18柱，以甲醇-水-磷酸(77∶23∶0.14)為流動相，檢測波長為238 nm。結果 血脂康膠囊的主要活性成分洛伐他丁與降解產物分離良好，洛伐他丁濃度在1.958～293.7 mg/L范圍內，峰面積與濃度呈良好的線性關系，檢測限為2μg/L。結論 該方法簡便、快速、靈敏、準確，可用于測定血脂康膠囊的有關物質。

高效液相色譜法;血脂康膠囊;有關物質

血脂康膠囊由紅曲加工制成，具有除濕祛痰、活血化瘀、健脾消食、降血脂的功效，其主要活性成分為洛伐他丁，中國藥典［1］2010年版二部對洛伐他丁原料藥及制劑均進行有關物質控制。為了更好地控制血脂康膠囊的質量，本文建立了高效液相色譜法測定血脂康膠囊中有關物質的檢查方法，方法快速、準確、精密度好。

1 儀器與試藥

島津LC-20AB高效液相色譜儀，二極管陣列檢測器。甲醇、磷酸為色譜純，洛伐他丁對照品(中檢所，批號100600-201003)，血脂康樣品(批號10/05/13，市售)。

2 實驗方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent C18柱，4.6 nm×250 nm，流動相:甲醇:水:磷酸(77∶23∶0.14)，檢測波長:238 nm，柱溫:25℃，流速:1.0 ml/min，進樣量:10 μl，理論板數:按洛伐他丁計算不低于2500，洛伐他丁與相鄰雜質峰的分離度大于1.5。

2.2 溶液的配制 洛伐他丁對照品溶液:取洛伐他丁對照品約20 mg置50 ml的容量瓶中，加乙腈溶解，定容至刻度。得洛伐他丁對照品貯備液。

供試品溶液的配制:取血脂康膠囊內容物約0.06 g(相當于1/5粒)，于50 ml離心管中，加入10.0 m lpH=3磷酸水溶液，超聲提取10 min后精密加入10.0 ml三氯甲烷，置渦旋混勻器混合3 min。靜置后去掉上層水相，將三氯甲烷以3000轉/min離心3 min。準確吸取上清液5.0 m l，蒸干，用流動相溶解，置25 m l量瓶中，定容至刻度。

酸破壞試驗溶液:取血脂康膠囊內容物約0.06 g，加入0.05 mol/L鹽酸溶液10.0 ml，放置2 h，精密加入10.0 ml三氯甲烷，以下同供試品溶液制備方法制備酸破壞試驗溶液。

2.3 測定方法

2.3.1 專屬性試驗:取上述對照品溶液、供試品溶液、酸破壞試驗溶液，分別進樣10μl，測定結果見圖1。

圖1 專屬性試驗色譜圖

酸破壞實驗表明，有關物質明顯變化，各雜質峰與主峰之間的分離度良好。

2.3.2 線性關系考察 精密量取洛伐他丁對照品貯備液，加流動相配制成濃度為 2.0、10、50、100、300μg/ml洛伐他丁標準溶液。分別注入液相色譜儀，進樣量10μl，以濃度為縱座標，以對應的峰面積為橫座標，繪制標準曲線，洛伐他丁的標準曲線為 Y=3E-5X，線性范圍為1.958～293.7 mg/L，r=0.999.

2.3.3 檢測限的測定 精密量取洛伐他丁對照品溶液，用流動相遂級稀釋進樣，按3倍信噪比計算洛伐他丁最低檢測限為2μg/L，結果表明，該法靈敏度較好.

2.3.4 溶液穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液，在室溫下放置，于0、2、4 h分別進樣，測定血脂康膠囊雜質1、雜質2的峰面積，結果表明血脂康膠囊溶液在4 h內穩(wěn)定。

2.3.5 精密度試驗 取供試品溶液連續(xù)進樣6次，記錄峰面積，計算血脂康膠囊雜質1、雜質2峰面積的 RSD為0.58%，結果表明，儀器的進樣精密度良好。

2.3.6 記錄時間的確定 上述條件下，色譜圖中明顯可見的有關物質最大的保留時間在主峰附近，確定記錄時間為主峰保留時間的2倍。

2.4 結果 根據上述實驗結果，制定血脂康膠囊有關物質檢查方法，照高效液相色譜法《中國藥典》2010年版附錄測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇:水:磷酸(77∶23∶0.14)為流動相，檢測玻長為238 nm，理論板數按洛伐他丁計算不低于2500，洛伐他丁峰與相鄰雜質峰的分離度應大于1.5。

測定法取本品的內容物，混合均勻，精密稱取適量(相當于1/5粒量)，于50 m l離心管中，加入10.0 m lpH=3磷酸水溶液，超聲提取10 min后精密加入10.0 ml三氯甲烷，置渦旋混勻器混合3 min。靜置后去掉上層水相，將三氯甲烷以3000轉/min離心3 min。準確吸取上清液5.0 m l，蒸干，用流動相溶解，置25 ml量瓶中，定容至刻度，作為供試品溶液;精密量取供試品溶液1 m l，置100 ml量瓶中，用流動相定容至刻度，作為對照品溶液;分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至洛伐他丁峰保留時間的2倍，供試品溶液如有雜質峰，(溶劑峰和輔料峰除外)，單個雜質峰面積不得大于對照溶液主峰面積(1.0%)，各雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積的3倍(3.0%)。

3 討論

3.1 酸破壞試驗結果表明，洛伐他丁容易被酸破壞降解，產生有關物質，為了更好地控制血脂康膠囊的質量，建議對血脂康膠囊進行有關物質的控制。

3.2 雜質限度的確定，參照《中國藥典》洛伐他丁膠囊項下有關物質的規(guī)定，供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，單個雜質峰不得大于對照溶液的主峰面積(1.0%);各雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積的3倍(3.0%)。

3.3 高效液相色譜法檢查血脂康膠囊的有關物質，靈敏度高，專屬性強，重復性好，建議作為血脂康膠囊有關物質的檢查方法。

［1］中國藥典.2010年版二部，2010:614-615.

530001 南寧食品藥品檢驗所